實驗六、細(xì)菌的生理生化實驗

1、實驗六實驗六 細(xì)菌的生理生化實驗細(xì)菌的生理生化實驗v實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康膙鞏固微生物無菌接種技術(shù)；鞏固微生物無菌接種技術(shù)；v了解細(xì)菌鑒定中常用的生理生化實驗了解細(xì)菌鑒定中常用的生理生化實驗的原理和方法的原理和方法 微生物的生理生化反應(yīng)v微生物細(xì)胞在酶的催化下進(jìn)行各種各樣的生理生微生物細(xì)胞在酶的催化下進(jìn)行各種各樣的生理生化反應(yīng)化反應(yīng)v把微生物細(xì)胞在一定的條件下培養(yǎng)，通過觀察生把微生物細(xì)胞在一定的條件下培養(yǎng)，通過觀察生理現(xiàn)象和檢查代謝產(chǎn)物，可以了解微生物的代謝理現(xiàn)象和檢查代謝產(chǎn)物，可以了解微生物的代謝過程和代謝的特點過程和代謝的特點v由于不同的微生物可能具有不同的酶，代謝途徑由于不同的微生物可能具有不

2、同的酶，代謝途徑和代謝產(chǎn)物可能也有不同，生理生化反應(yīng)是微生和代謝產(chǎn)物可能也有不同，生理生化反應(yīng)是微生物分類鑒定的重要指標(biāo)之一。物分類鑒定的重要指標(biāo)之一。淀粉水解實驗淀粉水解實驗淀粉培養(yǎng)基+淀粉培養(yǎng)基+接種+變色圈，水解圈培養(yǎng)培養(yǎng)24h加盧哥氏碘液I-KIv結(jié)果：結(jié)果：v 有水解圈有水解圈淀粉水解實驗陽性，用淀粉水解實驗陽性，用 + + 表示；表示；v 無水解圈無水解圈淀粉水解實驗陰性，用淀粉水解實驗陰性，用 - - 表示；表示；糖發(fā)酵實驗v 原理：原理：v丙酮酸裂解生成乙酰丙酮酸裂解生成乙酰CoA與甲酸，甲酸在酸性條件與甲酸，甲酸在酸性條件下在甲酸氫解酶作用下可進(jìn)一步裂解生成下在甲酸氫解酶作用

3、下可進(jìn)一步裂解生成H2和和CO2產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣v缺少甲酸氫解酶缺少甲酸氫解酶產(chǎn)酸不產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣v 步驟：配制糖發(fā)酵培養(yǎng)基步驟：配制糖發(fā)酵培養(yǎng)基接種接種培養(yǎng)（約培養(yǎng)（約24h)觀察結(jié)果觀察結(jié)果v 結(jié)果：結(jié)果：v 紫色無氣泡，既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣用紫色無氣泡，既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣用 - 表示；表示；v 黃色無氣泡，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，用黃色無氣泡，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，用 + 表示；表示；v 黃色且有氣泡，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，用黃色且有氣泡，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，用 0 表示。表示。甲基紅實驗（甲基紅實驗（M.R實驗）實驗）v原理原理v微生物進(jìn)行混合酸發(fā)酵，產(chǎn)生各種有機酸微生物進(jìn)行混合酸發(fā)酵，產(chǎn)生各種有機酸pH下降下降加入指示劑甲基紅加入指

4、示劑甲基紅紅色紅色v 步驟：配制蛋白胨水培養(yǎng)基步驟：配制蛋白胨水培養(yǎng)基接種接種培養(yǎng)（約培養(yǎng)（約24h) 加入指示劑甲基紅加入指示劑甲基紅12滴滴觀察結(jié)果觀察結(jié)果v 結(jié)果：結(jié)果：v 紅色紅色M.R實驗陽性，用實驗陽性，用 + 表示；表示；v 不變色不變色M.R實驗陰性，用實驗陰性，用 - 表示；表示； V.P實驗V.PV.P實驗實驗v 步驟：配制蛋白胨水培養(yǎng)基步驟：配制蛋白胨水培養(yǎng)基接種接種培養(yǎng)（約培養(yǎng)（約24h) 510d 40%KOH, 510d 5%a-奈酚和奈酚和少量肌少量肌 醇醇 ，取出塞子，用力震蕩，保溫（，取出塞子，用力震蕩，保溫（37度度1530min）觀察結(jié)果觀察結(jié)果v 結(jié)果：

5、結(jié)果：v 紅色紅色V.PV.P實驗陽性，用實驗陽性，用 + + 表示；表示；v 不變色不變色V.PV.P實驗陰性，用實驗陰性，用 - - 表示。表示。實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容v 以組為單位進(jìn)行淀粉水解實驗、以組為單位進(jìn)行淀粉水解實驗、糖發(fā)酵實驗、糖發(fā)酵實驗、 V.PV.P實驗和實驗和M.R實驗。實驗。v 實驗菌種：實驗菌種：v淀粉水解實驗、糖發(fā)酵實驗：大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌淀粉水解實驗、糖發(fā)酵實驗：大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌vV.P實驗和實驗和M.R實驗：大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌實驗：大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌v 注意事項：注意事項：v 實驗報告：實驗報告：v 1、列表記錄實驗結(jié)果、列表記錄實驗結(jié)果v 2、思考題：

6、第、思考題：第4小題小題四大類細(xì)胞型微生物菌落的鑒定四大類細(xì)胞型微生物菌落的鑒定v初步鑒定初步鑒定v確證：顯微鏡觀察確證：顯微鏡觀察微生物菌落特征的記錄和描述微生物菌落特征的記錄和描述v菌落形態(tài)：形狀，邊緣情況菌落形態(tài)：形狀，邊緣情況v大?。捍笮。簐表面狀況：濕潤、粘稠或干燥，隆起或扁平，厚或表面狀況：濕潤、粘稠或干燥，隆起或扁平，厚或薄，是否粉末狀薄，是否粉末狀v質(zhì)地：致密或疏松質(zhì)地：致密或疏松v蔓延程度：蔓延程度：v與培養(yǎng)基結(jié)合程度與培養(yǎng)基結(jié)合程度v顏色（正面、反面、邊沿、中心）顏色（正面、反面、邊沿、中心）v氣味氣味示例 將菌株在查氏瓊脂平板上將菌株在查氏瓊脂平板上25 25 培養(yǎng)培養(yǎng)7d 7d 后菌落直徑后菌落直徑181819mm 19mm ， 圓形，邊緣齊圓形，邊緣齊整不蔓延，表面絲絨狀并具整不蔓延，表面絲絨狀并具放射狀溝