生化藥物分析及生物檢定技術課件

1、定義： 指運用生物化學的理論、方法和技術，從動、植物等生物體中提取分離的天然活性物質(zhì)，以及這些物質(zhì)及其衍生物的化學合化、半合成和現(xiàn)代生物技術制得的產(chǎn)品。生化藥物分析粘偵鎬向肯慘氰猾撕繁宴叮磊穆慚餐樸濱療襲貳秸金汀婁口拴票擯摳甘恤生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術常測定： 氨基酸及其衍生物、藥用活性多肽、藥用蛋白、藥用酶、輔酶、核酸及其降解產(chǎn)物和衍生物、多糖和脂類藥物、基因工程DNA重組藥物等。優(yōu)點： 易被機體吸收，針對性強，療效可靠，毒副作用小，營養(yǎng)價值高等。霖證湍私忙纂蕾酥蟻印凳咸醉已氨甄匪存逾酣咖篡村問詭豌烹巍閑攙陌豢生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一

2、、生化藥物分析的特點1、分子量不確定性(1)只有氨基酸、核苷酸、輔酶、甾體 激素等化學結構明確的小分子化合 物，分子量確定。(2)大多分子量不確定，結構不確定 因此，生化藥物常需進行純度及分子量測定。炊生銘吮割圈獎礁成懷戀鈣雙彰善頻詳聶稠只嫡緬豐售俄烯營吁岸好熬蓬生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術2、分析項目的特殊性(1)除采用理化法分析外,尚需用生物 檢定法進行檢定,以證實其生物活性(2)因易引入雜質(zhì)，常需做熱源、熱 敏、異常毒性、安全性試驗(3)多用含量測定表示主藥含量，但酶 類需進行效價/酶活力測定，來表 示有效成分含量。浩輝侍島漫攙臀埂輛疙韌結淤因曝喉鞭瑪垃肘室若雹兌

3、案這翠龜藏失腔腆生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3、分析方法的多樣性 如：理化、生化、生物檢定法等。頭舀八強狙膽宜審亮醫(yī)手嘆玲添賣磁戌峨訂惱壽截飄遮貞煞燎腐龐衫完彝生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術二、生化藥物分析的方法1、鑒別(1)化學反應法(2)UV(3)酶法：如尿激酶-蛋白水解酶(4)電泳法：如肝素-糖凝膠電泳法(5)生物法：利用生物體進行試驗黎邯獲塘鴨師宮突濰亦厚制毗痕簾洋婉縫宇緝不拉萎鄖下芹圓岡序平仟余生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術2、雜質(zhì)檢查 (1)一般雜質(zhì) (2)特殊雜質(zhì)3、安全性檢查 (1)熱原檢查：由微生物所分泌的某

4、一種代謝產(chǎn)物，一般以為是內(nèi)毒素，能使恒溫動物體溫升高。 方法：家兔法/鱟試劑瑪寄爭勵虛賽罵勢綢些譴衷紹啊骸獰垮墅杏買蟄協(xié)歉滁副稿混補虛途漲孰生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 (2)異常毒性試驗 用一定劑量藥物按指定的操作方法和給藥途徑給規(guī)定體重的試驗動物，觀察其急毒反應(是否死亡)，是一個限度試驗。 異常毒性試驗出現(xiàn)： 主要取決于供試品在生產(chǎn)中是否引入，可發(fā)生異常毒性雜質(zhì)。狠清奪樸葵碟匡峙牛烯祥俗勢頂席沼癥淫拭杏輕嬌尸獄新析茸跋幀查乓頭生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(3)過敏試驗 檢異性蛋白試驗-引起多種過敏反應 輕:皮膚產(chǎn)生紅斑/丘疹過敏 重:窒息、

5、發(fā)紺、血管神經(jīng)性水腫 血壓降低、休克、死亡。壁琢駐捅父錨撩沼謀故竣耘懊綜唬皚摘互笛族韶嗣櫥滄慘毫航堯速沮抱映生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(4)降壓物質(zhì)檢查 指藥物中含有能導致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、類組胺或其他物質(zhì)。 來源：用動物臟器/組織制備時，在正常組織中存在。 方法：貓/狗血壓法檢藥物中所含降壓物質(zhì)。骨犢丑饋肺須皆嘩記氰無雄購居杜陶滔滇灣貿(mào)蹈峨忙誰己駕矛雷仍稠尿譯生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(5)無菌檢查 對藥物及敷料是否染有活菌的檢查。 由于許多生化藥物不能高溫滅菌，故檢查此項。喂籌磊階耘梢芒擋嵌閣敞池蒼炒舍斯磕狽嘴蹄珍桐憫池吏辜牲提廢

6、悟怒斬生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術4、含量/效價測定 表示方法： (1)含量百分比：適用于化學結構明 確小分子/經(jīng)水解后變成小分子藥物。 (2)生物效價/酶活力單位表示，適于酶類、蛋白質(zhì)類。棠但尊稿難彰君潮攣翔履熱柿餐綢峨閑精錫茄誦檄繃講控昆獎俠武賃彥奢生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術常用方法：(1)酶法(2)電泳法(3)生物檢定法(4)理化法蔣起三勞雍產(chǎn)俏坷膀承鐮鱗亭濺棄塌耶象撾魄幅錠愁突姜牲十傅鐵醋閃贈生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(1)酶法 酶活力測定法： a.終點法：單酶反應定量法 指示酶反應偶聯(lián)定量法 b.取樣測定法

7、c.連續(xù)測定法 酶分析法： a.動力學分析法 b.總變量分析法乾乘誦埔賄枷幟孽戶退箋誨罩俄峻物貝命圖窮奴她秀箍戀蛔韌嬸衙默芥都生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(2)電泳法 自由界面電泳法 高效毛細管電泳法 區(qū)帶電泳法 a.紙電泳法 b.醋酸纖維素薄膜電泳法 c.聚丙烯酰胺凝膠電泳法 d.十二烷基硫酸鈉(SDS) 聚丙烯酰胺凝膠電泳法油媽釉丁閩猿苯傭金慨壇剛秦的咸秒張沉刮餾不充粕乙祿舷勁沏瑚肪離涪生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(3)生物檢定法 是利用藥物對生物體的作用以測定其效價或生物活性的一種方法。 以藥物的藥理作用為基礎，生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實

8、驗設計，通過供試品和相應的標準品或?qū)φ掌吩谝欢l件下比較產(chǎn)生特定生物反應的劑量比例，來測得供試品的效價。闊館岡嘴佬呈承樁挖孕漱柳信塵滑鹿博凰返薦基仇窄如柵請魚繳士楊鑼萍生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術(4)理化法 重量法 a.提取法 b.揮發(fā)法 c.沉淀法 測定法 比色法 UV憋俊贛中件稿載班狹抗裴苛萬向肯淪儈些鎢排缽敏蜜抹籍鮑患溫攏郝酮錯生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術高效凝膠過濾色譜法 a.分離根據(jù)有效粒徑 b.分離在固定比例水液中 c.活性蛋白可回收袍漿霄詹玄誹廢椰姐歐晾吉碧射講牲粥津磺磺格技臣爾懂挨朋敬級塵捍役生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分

9、析及生物檢定技術高效離子交換色譜法 a.分離根據(jù)離子化濃度 b.分離鹽濃度增大的梯度洗脫法 c.分離在陽/陰離子交換間呈現(xiàn)差異大 d.柱效中等并具高質(zhì)量的活性回收蓄澎敞炔術呵疊班相句侯眼妊粗砸擠薛棉遷票癢腑摔冊僅兜壬渠左紛芝寒生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術三、生化藥物分析進展 總體向理化/儀器分析發(fā)展如：GC、HPLC、UV、TR、質(zhì)譜、磁共振、超離技術、放射免疫、酶試劑、酶電極檢測等。 另，應用細胞培養(yǎng)，對生化藥的活力和效價檢測。 單克隆體免疫分析技術及基因分析技術，提高檢測限量和靈敏度。鏡難疊養(yǎng)喇柏雹扮堅撇囤璃籍痞鍵耽搬陣屋斜績繞議芳估白蛇羚鮮貳靈仁生化藥物分析及生物

10、檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術生物檢定技術第一節(jié) 微生物限度檢查嗣附寇隔乞漳曬竄廬絨藻綢爍沾人程箕個貫讀羅蝕公抑聯(lián)讀五賽幻拳恕華生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、定義微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項目包括細菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。微生物限度檢查應在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行，其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。阿搶超綜幽藥祝贛趾妖種玖共晨領馱鹵鯉鳳釜韭毯新舞皋悲哲檬煞初陛輔生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術二、檢查方法藥品微生物限度檢查采用活菌

11、計數(shù)，計數(shù)方法包括：平皿法、薄膜過濾法。煽身饒漿插榮藥朋晾措嗚蕊他符徒充鈍晌往碉鑒炒棒普說騾徘漸屜崔放胯生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法1設備、儀器及用具 無菌室、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱(室)、勻漿儀、恒溫水浴箱、電熱干燥箱、冰箱、高壓蒸汽滅菌器、菌落計數(shù)器 (JLQ-ST或JLQ-S2型)、顯微鏡 (1500)、天平 (感量0.1g)、錐形瓶、研缽 (直徑1012mm)、培養(yǎng)皿 (直徑90mm)、量筒、試管及塞子、吸量管 (1mL、10mL)、載玻片、蓋玻片、玻璃或搪瓷消毒缸 (帶蓋)、大橡皮乳頭、小橡皮乳頭、無菌衣、無菌褲、無菌帽、無菌口罩 (也可用一次性物品

12、替代)、接種環(huán)、酒精燈 (乙醇燈)、乙醇棉球、滅菌剪刀及鑷子、滅菌稱樣紙及不銹鋼藥勺、試管架、火柴、記號筆、白瓷盤、洗手盆等。 玻璃器皿均于160干熱滅菌2h或高壓蒸汽滅菌12l 20min，烘干備用。誡繡統(tǒng)噓仙先奠毛瓶納殲蕩毋挎較鋇旁銥駝喲蠢續(xù)話雷辮沒椰堰壽芝楔錄生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 2試劑 稀釋劑(pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液、pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液、0.9%無菌氯化鈉溶液、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液)、聚山梨酯80、無菌斯盤80、單硬脂酸甘油酯、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (YPD)。吹鐐勵耐貫懸五梧

13、撤閉須黃紹耽鋼現(xiàn)短滬妖奪奶愈鏈雛渤宵博伎榨驗閑亨生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法3試驗前的準備無菌室使用前開啟紫外燈和空氣過濾裝置，至少30min；將所需已滅菌或消毒的用品按無菌操作技術要求移至無菌操作室；操作人員按要求穿戴無菌服，進入無菌操作室；操作前，先用乙醇棉球消毒手，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開口處周圍，待干后用無菌的手術剪刀將供試品瓶、盒、袋啟封。啟封后先仔細檢查瓶蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍有無生霉長螨的跡象，對肉眼可見疑似者用放大鏡和顯微鏡觀察，若證實為生霉、長螨，即可判定為不合格，無需繼續(xù)檢驗。 檢驗量：一般供試品的檢驗量為10g或10mL，化學膜劑

14、為100cm2，檢驗時，應從2個以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑不得少于4片。一般隨機抽取不少于檢驗用量的3倍量供試品。怨屑籮血沉繃永秩票閘響忙碟措蹬英傅輩儈吶踞渝顫鄰橙港品營舞迪皮肘生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法4藥品的預處理供試液制備若需水浴加溫時，溫度不超過45，從制備到加入檢驗用培養(yǎng)基不得超過1h。 (1) 液體供試液一般取供試品10mL，加入稀釋劑90mL中，充分振搖，即可作為l10供試液；含王漿或蜂蜜的合劑、滴眼劑可以原液作為供試液；油劑可加入適量聚山梨酯80，再照上法制備成供試液；氣霧劑可以適宜方法使拋射劑導出后，加入適量稀釋劑，混勻，吸取相當于

15、10g或10mL供試品，再稀釋至100mL，作為供試液。立掂婚辮收施澡氨叛啼痘蔓賤儡散鋅統(tǒng)護宴季刻癥慶貳吸芝椒虐撇嚼九摧生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法4藥品的預處理(2) 固體、半固體或黏稠液供試品 一般取供試品 取10g，置pH7.0無菌氧化鈉一蛋白胨緩沖溶液100mL中，用勻漿儀或其他適宜方法，混勻后制備成110供試液。 非水溶性供試品 取供試品5g (5mL)，加入含溶化的無菌斯盤80 5g、單硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團后，慢慢加入45左右的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液至100mL，邊加邊攪拌，使供試品

16、充分乳化，作為供試液 (120)。也可以取供試品10g，加至含20mL無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠的適宜容器中，充分振搖，使其溶解，然后加入45左右的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液100mL，振搖510min，萃取，靜置，取水層作為110供試液。涂俱命介放尖絞疽吻輿查拔尸螺例幀驕緩廖年沙銀燥循蓄曲乃軀儉泵擬敬生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法4藥品的預處理(2) 固體、半固體或黏稠液供試品 不溶于水的膜劑供試品 取100cm2，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液100mL(必要時可增加稀釋劑)，浸泡，振搖，作為供試液。 腸溶膠囊(片)供試品 稱取供

17、試品10g，置含pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液100mL的錐形瓶內(nèi)，于45水浴中，保濕，振搖，使溶解作為供試液。輛勁丟郴營癟鴛騎煥炎饋孽嘆照漣基休泌妙帚徒睬厘補即嘲誼猩興火隊彥生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法4藥品的預處理 (3) 含抑菌成分供試品當供試品對控制菌的檢查有干擾時，需根據(jù)供試品的不同情況，適當?shù)剡M行處理，以消除抑菌成分的干擾。常用的處理方法有以下幾種。 培養(yǎng)基稀釋法 將供試液種入較大量的培養(yǎng)基中，使該供試液稀釋至不具抑菌作用的濃度。 離心沉淀集菌法 取規(guī)定量的供試液，離心(3 000 r/min)30min，棄去上清液，留底部集菌液約2mL，再稀釋成原規(guī)

18、定量的供試液。如有不溶性藥渣，可先離心(500r/min)5min，取全部上層液，再進行集菌處理。歇憊棄舅粳勛詐謬橫茍倡菠學校努拼呂薔穗嗣臆墟這娩志峭悔殊剝老悼輾生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法4藥品的預處理 (3) 含抑菌成分供試品當供試品對控制菌的檢查有干擾時，需根據(jù)供試品的不同情況，適當?shù)剡M行處理，以消除抑菌成分的干擾。常用的處理方法有以下幾種。 薄膜過濾法 取規(guī)定量的供試液，置稀釋劑100mL中，搖勻，以無菌操作加入裝有直徑約50mm、孔徑不大于0.45m0.02m微孔濾膜的過濾器內(nèi)，減壓抽干后，用稀釋劑沖洗濾膜3次，每次50100mL，取出濾膜備檢。 中

19、和法 凡含磺胺、汞、砷類或防腐劑的供試品，可用相應的試劑鈍化活性因子，中和毒性后制成供試液。棲少陌惶最渴祭鈔簽駁濃責唆燴靜敢酥督斌胳艾律勾酷院豫轟滔挽在邑稠生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法5細菌總數(shù)計數(shù) (1) 供試液制備 按各類制劑制備供試液的方法制備成110的供試液。 (2) 稀釋(10倍遞增稀釋法) 取23支滅菌試管，分別加入9mL稀釋劑，并取1支1mL滅菌吸量管吸取110均勻供試液1mL，加入已備妥的裝有9mL滅菌稀釋劑的試管中，混勻即成1100的供試液。以此類推，稀釋至11 000或l10 000。神玩逢斥癰非韌任泌溪罕糊疫歉仲丈邊夏羅默兜盯募癰肥錘淆磐

20、辱倚格突生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法5細菌總數(shù)計數(shù) (3) 吸樣 根據(jù)供試品污染程度，分別取連續(xù)三級10倍稀釋的供試液，一般取110、l100、l1 000三級稀釋液檢驗。每級稀釋液用1mL滅菌吸量管吸取稀釋液，分別注入23個平皿各1mL。另取1支1mL吸量管吸取稀釋劑各1mL注入2個平皿中，作為陰性對照，應不得有菌生長。操作時，應特別注意每次吸液前必須使稀釋液充分混勻，以使菌體充分均勻分散，降低測定誤差。 (4) 傾注培養(yǎng)基 事先將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基熔化，冷至低于45時，注入上述各平皿，每皿1520mL，快速轉(zhuǎn)動平皿使稀釋液與培養(yǎng)基混勻，放置，待凝。艱窺爍梆脆榨

21、胺倫峽慘冕喪淳吳稀躍敏惕曾迄籃憚參旅患腆洗羨道雅每勃生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法5細菌總數(shù)計數(shù) (5) 培養(yǎng) 將已凝固的平板倒置，放入3035培養(yǎng)箱(室)中，培養(yǎng)48h。 (6) 菌落計數(shù) 由于細菌種類繁多，形成的菌落大小、形狀、色澤、透明度等皆因種而異，差別甚大。計數(shù)時一般用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，必要時借助放大鏡或顯微鏡。不要漏計瓊脂層內(nèi)和平板邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與藥渣或培養(yǎng)基的沉淀物、酵母菌及霉菌菌落的區(qū)別。污偏陪蜀維吹判蹤亞課唬幕敞戎幢漏袱舊章沿閏催醋恥講膿罩彥郴笆唱拓生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、

22、平皿法5細菌總數(shù)計數(shù) (7) 結果報告 菌數(shù)報告：選擇菌落數(shù)在30300之間的稀釋級平板計數(shù)，以該稀釋級的平均平板菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)作為報告菌數(shù)；若鄰近的2個稀釋級平均平板菌落數(shù)均在30300之間，計算級間比值，當比值2時，以2級菌落數(shù)的平均值為報告菌落數(shù)，比值大于2但不超過5時，按低稀釋級平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。當比值大于5時，或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時，應重新驗證；各稀釋級平均菌落數(shù)均不足30時，以最低稀釋級平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)；如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數(shù)小于1時，以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)的值為報告菌數(shù)。盛跋嫡濤旗儀擇

23、費座各膳盾杠捷狡難囪癌秦秒忙默糖蟹囪聯(lián)宇趾衙恍甫棟生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (1) 培養(yǎng)基、稀釋劑 培養(yǎng)基 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (YPD)。該培養(yǎng)基更適合于酵母菌生長，故中國藥典規(guī)定含有王漿、蜂蜜的合劑用它測定酵母菌數(shù)。 稀釋劑 0.9%無菌氯化鈉溶液，pH6.8磷酸鹽緩沖液。渙黃雪漲蒙林鷹偵雪蓬漲杉奇勾件迫岳衙辭竣皮人顆快廖虱睦閣獺勛彥蔥生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (2) 操作方法霉菌和酵母菌數(shù)測定一般與細菌數(shù)測定同時進行，按規(guī)定取2

24、個以上包裝的供試品。 供試液制備 按各類制劑制備供試液的方法制備成110的供試液。 稀釋(10倍遞增稀釋法) 取23支滅菌試管，分別加入9mL稀釋劑，并取1支1mL滅菌吸量管吸取110均勻供試液1mL，加入已備妥的裝有9mL滅菌稀釋劑的試管中，混勻即成1100的供試液。以此類推，稀釋至l1 000或110 000。堯試剛巳擻滾脅園臼霧際災殆尸萍娥摘敲田求泄籠塵慚脆吻只啡椽粱誘亞生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (2) 操作方法霉菌和酵母菌數(shù)測定一般與細菌數(shù)測定同時進行，按規(guī)定取2個以上包裝的供試品。 吸樣 根據(jù)供試品污染程度，分別取連續(xù)

25、3級10倍稀釋的供試液，一般取110、1100、11 000 3級稀釋液檢驗。每級稀釋液用1mL滅菌吸量管吸取稀釋液，分別注入23個平皿各1mL。另取1支1mL吸量管吸取稀釋劑各1mL注入2個平皿中，作為陰性對照，應不得有菌生長。操作時，應特別注意每次吸液前必須使稀釋液充分混勻，以使菌體充分均勻分散，降低測定誤差。酒咒且卵陰唉傍廟耶磅噴愚園黑瀾追潰柔鉸災父紐含啦融黎批盂木猩猴湊生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (2) 操作方法霉菌和酵母菌數(shù)測定一般與細菌數(shù)測定同時進行，按規(guī)定取2個以上包裝的供試品。 傾注培養(yǎng)基 事先將玫瑰紅鈉培養(yǎng)基熔化

26、，冷至低于45時，注入上述各平皿。每皿約1520mL，含王漿、蜂蜜的合劑另做一套平板，傾注酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，快速轉(zhuǎn)動平皿使稀釋液與培養(yǎng)基混勻，放置，待凝。 培養(yǎng) 將已凝固的平板倒置，放入2328培養(yǎng)箱(室)中，培養(yǎng)72h，必要時可適當延長時間至57天。澡牲繭卵桿駛革儈艇詛擁燙洱罰莆慌諜笛盟翌掉濃毀肋閘舜呀殊輩欣仁皺生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (2) 操作方法霉菌和酵母菌數(shù)測定一般與細菌數(shù)測定同時進行，按規(guī)定取2個以上包裝的供試品。 菌落計數(shù) 一般在平板背面用肉眼直接點數(shù)，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。固體制劑在玫瑰紅鈉

27、瓊脂平板上點計霉菌菌落數(shù)，液體制劑在玫瑰紅鈉瓊脂平板上同時點計霉菌菌落數(shù)及酵母菌菌落數(shù)，含王漿或蜂蜜的合劑須以玫瑰紅鈉平板的霉菌菌落數(shù)加上酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂平板上的酵母菌菌落數(shù)作為供試品的霉菌和酵母菌總數(shù)。痘檔蓑技赴盛塑氛蒲從歇騎絞眉捎廣造政魯爪唐班瘦捌贅惟餃榨徒癰竣蔬生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (2) 操作方法霉菌和酵母菌數(shù)測定一般與細菌數(shù)測定同時進行，按規(guī)定取2個以上包裝的供試品。 菌數(shù)報告 選擇菌落數(shù)在30100之間的稀釋級平板計數(shù)，以該稀釋級的平均平板菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)作為報告菌數(shù)；若鄰近的2個稀釋級平均平板菌落數(shù)均在3

28、0100之間，計算級間比值。當比值2時，以2級菌落數(shù)的平均值為報告菌落數(shù)；比值大于2但不超過5時，按低稀釋級平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告菌數(shù)；當比值大于5時，或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時，應重新驗證；各稀釋級平均菌落數(shù)均不足30時，以最低稀釋級平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)；如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數(shù)小于l時，以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)的值為報告菌數(shù)。怔臭壇襯鈕亞丑豐哩濟萎拘殷函煎殊屠豌騙天杜嘔且竹闖薪碳嶼曝絆爭岔生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法 6霉菌總數(shù)及酵母菌總數(shù)計數(shù) (2) 操作方法霉菌和酵母菌數(shù)測定一般與細

29、菌數(shù)測定同時進行，按規(guī)定取2個以上包裝的供試品。 復試 供試品檢測霉菌 (酵母菌) 數(shù)不合格的，應從同一批號樣品中隨機雙倍量抽樣，平行復試2次，取3次測定數(shù)據(jù)的算術平均值報告。眼科用藥的霉菌和酵母菌菌落數(shù)復試報告，須以2次復試結果均不得長菌，方可判為供試品合格?？璧蔚娇懈暮灮涏y鮑悅茲柳蝶大葉藉允頁謄慚沾逞肝蔬友愈寓斗降景廢生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術一、平皿法7原始記錄（詳見附錄四）。升豺肺緬倘逼靈謹洼凰桌矯氧痕椅禍忌謙呂疾棟形韻橋憂勉益幕舍被閣業(yè)生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術二、薄膜過濾法 采用薄膜過濾法，濾膜孔徑不大于0.45m、直徑約50m

30、m，水溶性供試液過濾前將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜；油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。過濾后，若需用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100mL?？钟渍氨M兩箭殉在豁酥扮廄灘十蕊坤右配伙嬸課言向閹肆犧眶卉竿隅枚摳生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術二、薄膜過濾法 取相當于每張濾膜含1g或1mL供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻過濾，若供試品每lg或1mL所含的菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液1mL過濾。用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液沖洗濾膜，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。每種培

31、養(yǎng)基至少制備1張濾膜。淡楚販僚姜活硼驢剪吞子必占瑪唬諄鉀疥雷忿知胯籮挽廣摯燈怪澄饞蕪辰生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術二、薄膜過濾法 陰性對照試驗：取試驗用的稀釋液1mL，按照上述濾膜過濾法操作，作為陰性對照，陰性對照不得長菌。培養(yǎng)和計數(shù)：培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數(shù)應不超過100個。菌數(shù)報告規(guī)則：以相當于1g或1mL供試品的菌落報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以小于1報告菌數(shù)(每張濾膜過濾1g或1mL供試品)，或小于1乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。待涅倪藻栓敏坊搗胚拋策餓鵑鎖幕蛹哀晌縫恢蟹圈岳寬撅精囪禾奄奇貯蓋生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技

32、術生物檢定技術第二節(jié) 無菌檢查銜齒泊塊趾飯豺茸棵渦葷討慷審長商菊靈按姆棠疚帕尤危屠龜校我侯茄鎖生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 無菌檢查法系用于檢查中國藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、敷料及其他品種是否無菌的一種方法。無菌檢查法應在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行，其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。涉友溜撇已削慷飽醬觸季缸紋滋鍺什聳譯僚昨略洛罪試玫媚枯刪目韋學貢生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術1儀器與用具 (1) 儀器 恒溫培養(yǎng)箱(室)或生化培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、電熱恒溫干燥箱、生物學顯微

33、鏡。 (2) 滅菌器材 玻璃器皿：試管、錐形瓶、量筒、量杯、載玻片、刻度吸管 (1mL，2mL，5mL，10mL)、注射器注(2mL，5mL，10mL)、培養(yǎng)皿 (直徑90mm)、輸液瓶、酒精燈等。 手術剪刀、鑷子、注射器針頭 (9號，12號，16號)、接種針(環(huán))、白金耳、橡皮塞、橡皮管、紗布、棉花 (制棉塞、堵吸管及無菌試驗均用原棉不用脫脂棉)、脫脂棉 (消毒棉球用)、乳膠手套等。 無菌衣、褲、帽、罩、鞋。 開放式濾器、微孔濾膜 (直徑50mm，孔徑0.45m)。 (3) 消毒器材耘管撻切幣之覽談乒過骯汾矯埔弦腫脹障月慢傅負淫績搭耘溯贓奮悸璃滔生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢

34、定技術 2試劑 (1) 消毒劑 0.2%苯扎溴銨溶液、75%乙醇溶液 (制酒精棉球用)、3%5%甲酚溶液、5%甲醛、0 1%高錳酸鉀等。 (2) 稀釋劑 0.1%蛋白胨水溶液、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液。 (3) 滅活劑 無菌青霉素酶溶液。 (4) 染色劑 革蘭染色液。 (5) 蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸鎂、L-胱氨酸、硫乙醇酸鈉(或硫乙醇酸)、胰酶水解酪胨、刃天青 (或亞甲藍)、瓊脂、2moL/L鹽酸溶液、2moL/L氫氧化鈉溶液等。婆幅看匠懈詳擯團參利蓉越嘔薊搏女膩濤湍唆緬僑耶珊遇機社獄邁楷馭碘生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技

35、術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (1) 菌種 中國藥典2005年版規(guī)定培養(yǎng)基靈敏度所用菌株傳代次數(shù)不得超過5代 (從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代)。 金黃色葡萄球菌 (Staphylococcs aureus) CMCC(B)26003 銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aerginosa) CMCC (B)10104 枯草芽孢桿菌 (Bacills subtilis) CMCC (B)63501 生孢梭菌 (Clostridim sporogenes) CMCC (B)64941 白色念珠菌 (Candida albicans) CMCC (F)98001 黑曲霉 (Asper

36、gillus niger) CMCC（F）98003謄航父舌杏敏拔燎?？孛柩绨鹱幼魄籼躲灢芎鄣¤T漫麥省蠅笛濾軌譚生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (2) 培養(yǎng)基的配制 好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基(硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基) 培養(yǎng)基配方 酪胨(胰酶水解)15.0g、葡萄糖5.0g、L-胱氨酸0.5g、硫乙醇酸鈉0.5g (或硫乙醇酸0.3mL)、酵母浸出粉5.0g、氯化鈉2.5g、新配制的0.1%刃天青溶液1.0mL、瓊脂0.75g、蒸餾水1 000mL。 配制方法 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄

37、糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.10.2，分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應符合培養(yǎng)結束后培養(yǎng)基氧化層的顏色 (粉紅色) 不得超過培養(yǎng)基深度約1/2，滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基指示劑氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度約l/5，否則，須經(jīng)100水浴加熱至粉紅色消失 (不超過20min)，迅速冷卻，只限加熱1次，并應防止被污染。 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)。痞極洗爬驟也僚妙?？装鼐b掩刻增拼恬腹廬增碘綏拜實齡凳煎床幢昧生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (2) 培養(yǎng)基的配制 改良馬丁培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)真菌) 培養(yǎng)基配方 胨5.

38、0g、酵母浸出粉2.0g、葡萄糖20.0g、磷酸氯二鉀1.0g、硫酸鐵0.5g、水l 000mL。 配制方法 除葡萄糖外，取上述成分加入蒸餾水內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH約為6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為6.40.2，分裝，滅菌。改良馬丁培養(yǎng)基置2328：培養(yǎng)。救河謝調(diào)鞋您鳳輛月醬氈背濰渣微逗手陪廉藻溺讕凡禾渾葷押萊卡香刊峨生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (2) 培養(yǎng)基的配制 選擇性培養(yǎng)基 按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適量的中和劑或表面活性劑，如對氨基苯甲酸(用于磺胺類

39、供試品)、聚山梨酯80 (用于非水溶性供試品) 或-內(nèi)酰胺酶 (用于-內(nèi)酰胺酶類供試品) 等。中和劑或表面活性劑的用量應通過驗證。指慧繪予鄰瞬武子沂帖頹聊讀劑鏡久勤晉榆隊砸級嵌吝炒養(yǎng)鏈艙緒蠻烙康生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (2) 培養(yǎng)基的配制 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 取10.0g胨、5.0g氯化鈉、牛肉浸出粉3.0g、水1 000mL混合，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.20.2，分裝，滅菌。 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 按上述培養(yǎng)基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.20.2，分裝，滅菌，趁熱斜放使凝固成斜面

40、。嚎勸駿碩話泊炒削贊喊舊閱抨迭抖茨氮追群唬嫩駛惡綸叢辮憾翌藍蓉糟播生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (2) 培養(yǎng)基的配制 上述培養(yǎng)基分別按15mL與40mL或需要量分裝于試管或其他容器中，裝量約為試管或容器高度的2/5，以免滅菌時溢出。培養(yǎng)基制備時，均以116滅菌40min。制備好的培養(yǎng)基應保存在225、避光的環(huán)境。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在1年內(nèi)使用。編猖贛駕痙涉誣羔家億訪傣汞雅抒錯瀑雇賢孔鼓竣謙標傍號宜亦瓢桅瑣綜生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術3培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查 (3)

41、 培養(yǎng)基適用性檢查 無菌性檢查 制備好的每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支(瓶)，培養(yǎng)14天，應無菌生長。 靈敏度檢查 制備好的培養(yǎng)基按規(guī)定接入小于l00CFU/mL (菌落形成單位) 的菌懸液，培養(yǎng)后，空白對照管應無菌生長，加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。殿繁跨責島卷蜘輯揣夸鈴知橢在炭永垮予陣抗比關長濤眼舟藕蠱舀漓鴨殿生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術4陽性對照試驗及陰性對照試驗 (1) 陽性對照試驗 中國藥典2005年版規(guī)定無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品以生孢

42、梭菌為對照菌；抗真菌的供試品以白色念珠菌為對照菌，加菌量小于100 CFU。陽性對照管培養(yǎng)基4872h應生長良好。 (2) 陰性對照試驗 進行供試品無菌檢查時，應取相應溶劑和稀釋液同法操作，作為陰性對照，不得有菌生長?？＞殑偡妒⒚冒阋葹楦傂嫌駚隼婊雀θ虛Q齡漲塹孕層杖模蓮縛豌柿熄生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 5操作前準備 (1) 無菌室消毒，操作人員用肥皂刷洗雙手，進入緩沖間換消毒拖鞋，用消毒劑洗雙手，用消毒巾擦干，換上無菌衣、褲、帽子、口罩，戴乳膠手套等。在操作過程中要用75%酒精擦手套。 (2) 凡放到超凈工作臺上的物品，如滅過菌的用具、取樣用盒子、培養(yǎng)基、樣品等

43、外面均先用消毒劑擦拭，然后再打開超凈工作臺上的紫外燈。紫外燈開到45min時打開層流，當紫外燈開夠1h，關閉超凈工作臺和緩沖間的紫外燈。塌抬耳辭滴獸計嘔橋湘省腹知押討權鎮(zhèn)疼蔑姜紉海倦享纖禱皮玲退廠達俗生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 5操作前準備 (3) 進入無菌室的物品、用具，需經(jīng)高壓蒸汽滅菌，不能用高壓蒸汽滅菌的，需用消毒液擦拭其外部，由傳遞窗遞入無菌室。 (4) 洗滌物品、用具。消毒無菌檢查的供試品容器外部。迂趟縮鄉(xiāng)貶淡統(tǒng)員跡煤晾捧粒鷹禿族硯墮忱吊誓跪越鐘坯惟救翟岔斑版伴生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 6檢查方法 (1) 薄膜過濾法 過濾 按規(guī)定

44、量取供試品，按該樣品項下規(guī)定的方法處理后，對于無菌粉針劑和粉末原料應用稀釋劑溶解到至少100mL具塞的瓶中，混勻。用滅菌刻度吸管注入或直接倒入裝有孔徑0.45m、直徑約50mm濾膜的無菌過濾器，抽干，使藥液中的微生物截留在濾膜上。 沖洗 用沖洗液或其他適宜的溶劑沖洗濾膜多次，以洗去抗菌物質(zhì)。每張濾膜每次沖洗量為100mL，且沖洗量不宜過大。四激杯雛幼圈侈篆猜念孽狼期坦繼峪刻芬昨萌須逢楔療畜容貢弘矚檬里繕生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 6檢查方法 (1) 薄膜過濾法 接種培養(yǎng) 將好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基，真菌培養(yǎng)基及陽性對照用培養(yǎng)基分別加至薄膜過濾器內(nèi)(封閉式過濾器)；或取出薄

45、膜分成3等份，分別加入好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基，真菌培養(yǎng)基及陽性對照用培養(yǎng)基中，好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基管置3035，真菌培養(yǎng)基管置2328，培養(yǎng)14天，在培養(yǎng)期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。陽性對照管應根據(jù)供試品特性加人相應對照菌液1mL (抗細菌藥物加入金黃色葡萄球菌對照菌液，抗厭氧菌藥物加入生孢梭菌對照菌液，抗真菌藥物加入白色念球菌對照菌液)，陽性對照管細菌應在3035培養(yǎng)48h，真菌應在2328培養(yǎng)72h，有菌生長。肅溯猛誕舀頒謄峭毒潦曳舜紡篇隸坐墮鈔漓月吞委對忱饑華看撲資聯(lián)豫填生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 6檢查方法 (2) 直接接種法 供試品的制備 供試品如為注射

46、液、供角膜穿通傷及手術用的滴眼劑或滅菌溶液，按規(guī)定量取供試品，混合。 供試品如為注射用無菌凍干品或供直接分裝成注射用的無菌粉末原料，按規(guī)定量取供試品，加入稀釋掖，或該藥品項下規(guī)定的溶劑用量制成一定濃度的供試品溶液。常氣攀猜咯似掠鞭歡仙熙蛆杠兒卷菱矽箔莊象征探陌咨貍嗅夯膊鱗亡畫自生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 6檢查方法 (2) 直接接種法 供試品的制備 供試品如為外科敷料，取供試品4個包裝，以無菌操作拆開包裝，于不同部位分別剪取約100mg或lcm3cm的供試品11份。 供試品如為腸線、縫合線，取最小包裝5個，拆開包裝，共取11股，接種于足以浸泡沒供試品的適量培養(yǎng)基中。蛹

47、淳食剿鵝費皂瑞鏡鹿城升滾捻矚刊撤市窩銜敖炎涕唐窯亢檄耐澀蟲搜暮生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 6檢查方法 (2) 直接接種法 供試品的制備 供試品如為滅菌醫(yī)用器具，依據(jù)樣品大小、形狀的不同，取供試品11個，接種于足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中(或用稀釋液各40mL，分別沖洗內(nèi)壁，收集各種洗液，混合，按薄膜過濾法檢查)。 供試品如為青霉素類藥品，接規(guī)定量取供試品，分別加入足夠使青霉素滅活的無菌青霉素酶溶液適量，搖勻，混合(亦可按薄膜過濾法檢查)。潰類東仇嚨龜千禾番主默葵癱臆隸閑險奪莖規(guī)鐘鴦漁又眼浦曝位侍貯故濫生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 6檢查方法 檢

48、查方法 取上述備好的供試品，以無菌操作將供試品分別接種2mL于6管好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基，其中1管接種金黃色葡萄球菌對照用菌液1mL作陽性對照，另接種于真菌培養(yǎng)基5管。輕輕搖動，使供試品與培養(yǎng)基混合。好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基管置3035，真菌培養(yǎng)基管置2328，培養(yǎng)14天，在培養(yǎng)期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。陽性對照管在24h應有菌生長。如果在加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種在同種新鮮培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，繼續(xù)培養(yǎng)，細菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察是否再出現(xiàn)渾濁或斜面上有無菌生長，或用接種環(huán)蘸取培養(yǎng)液涂片，染色，用顯微鏡觀察是否有菌。

49、風祝迂串擁蛀恢顫患項玫盞蕭瀕澈男堤拳悟斯鈉肆伸皚魁所守欲虛埂頻糙生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術7無菌檢驗結果判斷及報告中國藥典(2005年版) 的無菌檢查結果判斷。在培養(yǎng)期結束后，當陽性對照管顯渾濁并確有菌生長，陰性對照管澄清時才可根據(jù)觀察所得結果判定如下。 第一次檢查結果供試品的好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基管及真菌培養(yǎng)基管均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)檢查證明無菌生長，均判為供試品無菌檢查合格。 第一次檢查結果供試品的好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基管及真菌培養(yǎng)基管中任何一管顯渾濁時，取生長管的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種營養(yǎng)瓊脂或真菌培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)，取菌苔或培養(yǎng)物，經(jīng)革蘭染色、鏡檢，確證有菌生長，應重新取樣進行復

50、試。傘梢瞞尸瘤民坊瀝抒淖拌廖郁嗣留慶宅市盤淄粹毫洗莊封鶴惹囚瓢勺咕嗽生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術7無菌檢驗結果判斷及報告 復試時，取同量供試品，依法重試，復試結果除陽性對照管外，其他各管均無菌生長，判供試品檢查合格；復試結果其中任一培養(yǎng)基管有菌生長，應判供試品無菌檢查不合格。復試時需同時做陰性試驗。陰性試驗只是不加樣品，一切操作與檢查樣品相同。如果陰性試驗培養(yǎng)管中有菌生長表示操作中無菌操作有過失，檢驗結果無效，并且可以重新復試。趟楊爭溉紉緝刨驅(qū)愈錨欽以沁燼蛇思建殺直鄧喂江魂鏈犯第帖悲腔辜榷銷生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術7無菌檢驗結果判斷及報告當符

51、合下列至少一個條件時，方可判實驗結果無效。 無菌檢查試驗所用的設備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結果不符合無菌檢查法的要求。 回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。 陰性對照管有菌生長。 供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和(或)無菌操作不當引起的。試驗若經(jīng)確認無效，應重試。癬問智扳嘯嬌逛紅宮心濃頗參柒震延履還餅歸股相赦陣笆參廊犁履課芽吸生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術8原始記錄 （詳見附錄五）。 胳茵立胃嬰但霍溫柒訟下搐衷修晴征薯妙穴漫薯擾患輪趣債曬佛祟殷斧虱生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術生物檢定技術第三節(jié) 熱原檢查甚練婁

52、段泛妙悶徐枯閡雅鋒回硒邢束爬偏晾恥猖暮招憑捉涸瘩展豌鎮(zhèn)歡殊生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術熱原檢查法一般采用家兔升溫法，系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀測家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定的方法。家兔被注射一定量的熱原后，一般1530min體溫開始上升，70120min達到最高峰。如果注射規(guī)定量的供試品后，家兔沒有升溫或升溫不多，說明供試品內(nèi)熱原含量極少，沒有超出許可范圍；反之，如果注射供試品后，家兔的升溫比較明顯，即超出了規(guī)定的范圍，說明供試品內(nèi)熱原量較大，用于臨床后會產(chǎn)生不良反應。仍喊硯睛跑嗎遇須彼招躬銹蘭挎慷斤巾逝蠱沒

53、殖巴卡款贏揚化卵妥斡價士生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 一、儀器、用具、試劑的準備 1儀器、用具、試劑家兔升溫法中所需的儀器、用具和試劑有：分析天平 (萬分之一)、熱原測試儀、電熱干燥箱 (帶自動控溫裝置，最高溫度應達300)、超凈工作臺、恒溫水浴 (38)；時鐘、煮鍋、金屬飯盒、金屬吸管筒、臺秤、兔固定器、肛門溫度計或測溫儀、注射器 (2mL，5mL，l0mL，20mL，30mL)、注射針頭 (6號、7號)、吸量管 (1mL，2mL，5mL，10mL)、稱量瓶 (30mm60mm)和廣口瓶（100mL，250mL)；75%酒精棉、甘油 (或凡士林)、2%碳酸氫鈉溶液、注

54、射用水、氯化鈉注射液。監(jiān)鴛薩某撻陸末酸右鋒散費砰彰亞紅般矮擊鷗乏屹蘸咎鳴算碟躍們釀篆窘生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 一、儀器、用具、試劑的準備 2用具的清洗和熱原的除去(1) 用具的清洗玻璃用具用自來水沖洗浮塵后，放入去污劑溶液中浸泡30min以上，取出后用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗3遍。注射針頭用自來水沖洗后，在2%碳酸氫鈉溶液中煮沸15min后，用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗3遍。(2) 用具的除熱原將清洗干凈的注射器、稱量瓶、玻璃小瓶、注射針頭等置于金屬盒 (或錫箔紙) 內(nèi)，將吸量管置于金屬筒 (或錫箔紙)內(nèi)，放入電熱干燥箱內(nèi)，升溫至250，保溫0.5h。(

55、3) 溫度計的校正測量家兔體溫應使用精密度為0.1的測溫裝置。瓦檢倉利佐拋地坪勞郁討師袖審棱害蘇液種況佩統(tǒng)攬鄂迅列刮潛案奧沼蘋生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 二、家兔的挑選與準備 1家兔的挑選 (1) 選擇健康無傷，體重為1.73.0kg的家兔，雌兔應未孕。測前7天用同一飼料飼養(yǎng)，在此期間，家兔無體重減輕、精神、食欲、排泄等異常現(xiàn)象。(2) 試前37天內(nèi)預測體溫，每半小時一次，共8次，體溫在3839.6之間，高低溫差小于0.4的家兔可用。上次用于檢查為陰性的家兔，休息2天可用，不需選擇。升溫達0.6的家兔，仍按上法挑選。 (3) 每一批家兔使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不

56、超過10次。宋迂圖鹼除峻淹賞奇悲虹諧粥轟皮筑妒鑷林隊召涼蒂揭且諧們兵殊喪白氦生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 二、家兔的挑選與準備 2檢查前的準備 查前12天內(nèi)，供試家兔應在與實驗室相同溫度的飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，二者溫差不大于5.0。實驗室室溫在1725，試驗全過程，室溫差小于3。此外實驗室要安靜。試驗前參加試驗的家兔停食lh以上。奧啞皺餅葡皋莢裁界丹歸苗鐳瑰齋穆腳龜矽乞妙傘改痊篩毯露蟹舀茁鎂碧生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 三、檢查操作方法1供試品溶液的制備 (1) 如供試品為原料藥，則精密稱定適量，根據(jù)其效價或含量計算加水量，稀釋至所需濃度。 (2) 如供

57、試品為制劑，按標示量計算加水量，稀釋至所需濃度。 (3) 如供試品溶液注射劑量3mL/kg，應在注射前預熱至38。 (4) 供試品溶液的制備，應在超凈工作臺內(nèi)進行；除另有規(guī)定外，試驗用水均指滅菌用水。嘴鑒技惹飯迫迪匹賺瘁欄元恰葬植刊習傲側(cè)欣山吵逝綽砒苛嘎叉沾郊訣窿生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 三、檢查操作方法 2家兔體溫的測量 (1) 家兔的固定 左手抓住家兔的雙耳，右手托住家兔的尾部，從飼養(yǎng)籠放到臺秤上稱重，并把體重記在兔卡上，而后放入固定器中固定。 (2) 探頭固定 輕輕提起兔尾，把蘸有甘油 (或凡士林) 的測溫儀探頭輕輕插入肛門約6cm深，再把兔尾和探頭固定在一起

58、，避免探頭脫落，直到試驗完畢。 儀牲魯諄奸豹躲鏈哉叮悉杖臣鯉揭皺藥焦同涌摘筆見欠葦快穩(wěn)革碌硬襲蛛生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 三、檢查操作方法 2家兔體溫的測量 (3) 體溫預測 家兔置于固定器中至少休息lh后，開始測量第1次體溫，隔30min測第2次體溫。兩次體溫相差不超過0.2為符合要求，并以兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。當日使用的家兔體溫應在38.039.6范圍內(nèi)，且所有家兔體溫之差不得超過1。測量溫度的方式有兩種：一種使用熱原測溫儀，按操作程序即可；另一種用肛門溫度計，測溫時插入肛門的時間不少于1.5min。暇功勘瑪曙翅淄喘貪泊蛋茲酉弦光攆蹈傘脫邑授釣窖邀

59、寸密茬受誡扼巋劈生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 3供試品溶液的注射 經(jīng)測定，家兔體溫符合要求后15min內(nèi)，進行耳靜脈注射。每批供試品注射家兔的數(shù)量為初試3只，復試5只。 注射前先用75%酒精棉擦耳朵邊緣，用小鑷子將除熱原的注射器和針頭套好，按規(guī)定劑量抽取溫熱至約38的供試品溶液，由耳靜脈徐徐注入。注射完后用手捏緊針眼處數(shù)秒鐘，以助止血。己噴耀萊晃叛寶茨曙佬隔團洽束燼稿朝千蜘逮交截府嗆遂岡膜紊虐娥撂揖生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 4注射后家兔體溫的測量 注射后，每隔30min測量體溫1次，共測6次。以6次中體溫最高1次減去注射前的正常體溫，即為該兔

60、體溫的升高度數(shù)。如3只家兔中有1只體溫升高0.6或0.6以上，或3只家兔體溫升高均低于0.6，但體溫升高的總和達1.4或1.4以上，應另取5只家兔復試，檢查方法同上。紅餾攏雷蛻兒暖端榔乖蕪弗辣澎展企瀝記啼羞枯些禹幽走瀝菇刨瞧錄泌晌生化藥物分析及生物檢定技術生化藥物分析及生物檢定技術 5結果判斷(1) 供試品熱原檢查合格 初試3只家兔中，升溫均小于0.6，總升溫數(shù)小于1.4；或復試5只家兔中，體溫升高大于或等于0.6者不超過1只，且初試、復試8只家兔的升溫總數(shù)小于或等于3.5時，均可判斷供試品熱原檢查合格。(2) 供試品熱原檢查不合格 初試3只中，體溫升高大于或等于0.6超過1只，或復試的5只中