動植物細胞培養(yǎng)產酶 (3)講稿

1、關于動植物細胞培養(yǎng)產酶 (3)第一張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月主要內容植物細胞培養(yǎng)產酶動物細胞培養(yǎng)產酶要求 了解動、植物細胞及其培養(yǎng)的特點；熟悉動、植物細胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制。第三章 動植物細胞培養(yǎng)產酶第二張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月一、概述1.什么是動、植物細胞培養(yǎng)？動植物細胞在體外條件下的存活或生長。2.如何獲得動、植物細胞？動物細胞 ：離心分離、雜交瘤技術、胰蛋白酶消化處理。植物細胞：機械搗碎或酶解、誘導愈傷組織、原生質體細胞 壁再生。3.動、植物細胞培養(yǎng)方式？動物細胞 ：懸浮、貼壁和微載體植物細胞 ：固體、液體淺層和液體懸浮培養(yǎng)。4.動、植物細胞培養(yǎng)目的？動

2、物細胞 ：疫苗、激素、多肽藥物、單克隆抗體、酶、皮膚等人體組織、器官等功能性蛋白質。植物細胞 ：色素、藥物、香精、酶等次級代謝物。第三張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月例：動物細胞培養(yǎng)獲得的產物第四張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月例：植物細胞培養(yǎng)獲得的產物第五張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月動、植物細胞培養(yǎng)和微生物細胞培養(yǎng)比較第六張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月二、植物細胞培養(yǎng)產酶1、從天然植物材料中直接提取2、從大規(guī)模培養(yǎng)的植物細胞中提取第七張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1、從現(xiàn)成植物材料中提取酶的一般步驟取材預處理加提取液搗碎離心或過濾除去固體物，收

3、集粗酶液適當濃縮純化成品加工2、植物細胞培養(yǎng)在離體條件下，將愈傷組織或其他易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中，進行振蕩培養(yǎng)，得到分散成游離的懸浮細胞，通過繼代培養(yǎng)使細胞增殖，從而獲得大量細胞群體的一種技術。第八張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2、植物細胞培養(yǎng)（1）植物細胞培養(yǎng)特點1）提高產率2）縮短周期3）易于管理、減輕勞動強度4）提高產品質量5）其他 對剪切力敏感、生產周期長、生長和代謝需要一定的光照。（2）植物細胞培養(yǎng)的工藝流程外植體的選擇和處理愈傷組織的誘導細胞的獲取細胞培養(yǎng)分離純化產物外植體的選擇與處理： 選擇外植體、切取片段、消毒處理。植物愈傷組織直接分離法機械搗碎發(fā)：動作輕柔酶分

4、解法：纖維素酶、果膠酶等過濾、離心分離愈傷組織誘導法能迅速增殖、無特定結構和功能的薄壁細胞團外植體半固體培養(yǎng)基滅菌、冷卻生長素、分裂素插入培養(yǎng)25愈傷組織1-3周分散、接種原生質體再生去除細胞壁后得到的微球體第九張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3、植物細胞培養(yǎng)產酶的工藝特點培養(yǎng)基（1）植物細胞的生長和代謝需要大量無機鹽；（2）植物細胞需要多種維生素和植物生長激素；（3）植物細胞需求的氮源一般為無機氮源；（4）植物細胞一般以蔗糖為碳源、濃度為2-5%。培養(yǎng)溫度和pH適宜溫度在20-25，酶合成溫度因植物種類而異； 植物細胞培養(yǎng)要求穩(wěn)定的pH，一般控制在pH5.8-6.1最好。通氣和攪拌耗

5、氧速率較慢，細胞比較大，較脆弱，對剪切力敏感，所以，通氣和攪拌不能太強烈。其他光照：對一些植物酶有誘導作用或抑制作用。 刺激物：在酶合成時期，適當添加。第十張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月三、動物細胞培養(yǎng)產酶1、從動物材料中直接提取2、從大規(guī)模培養(yǎng)的動物細胞中提取第十一張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1、動物細胞培養(yǎng)的特點（1）主要用于功能蛋白質和多肽的生產（2）生長較慢，15-100h（3）需要添加抗生素以防染菌（4）無細胞壁，體積較大，對剪切力敏感，要求嚴格控制培養(yǎng)條件如通風、攪拌、pH、滲透壓等（5）大部分動物細胞有錨地依賴性

6、，需要貼壁培養(yǎng)（6）培養(yǎng)基成分復雜，分離純化復雜，成本較高，多用于高價值藥物的生產（7）原代細胞培養(yǎng)50代之后即會退化死亡，需要重新分離細胞第十三張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2、動物細胞培養(yǎng)方式懸浮培養(yǎng) 血液、淋巴組織的細胞貼壁培養(yǎng) 成纖維細胞型（fibroblast） 上皮細胞型(epithilium cell type) 游走細胞型(wondering cell type) 多形性細胞型 (polymorphic cell type)固定化細胞培養(yǎng)第十四張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3、動物細胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制（1）動物細胞獲取過程：體細胞雜交瘤細胞融合淋巴細胞腫瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)過程細胞蛋白酶消化分散培養(yǎng)分離純化（2）動物細胞培養(yǎng)基的組成成分：氨基酸、維生素、無機鹽、葡萄糖、激素、生長因子。（3）動物細胞培養(yǎng)基條件：（1）溫度：一般控制在36.5，允許溫度波動范圍在0.25之內。（2）pH值：一般控制在pH7.0-7.6微堿性范圍內，通常在pH7.4的條件下生長最好。（3）滲透壓：培養(yǎng)液中滲透壓應當與細胞內的滲透壓處于等滲狀態(tài)，一般控制在700-850kPa范圍內。（4）溶解氧：至關重要，供氧不足時，細胞生長受到抑制，供氧過量時，也會對細胞產生毒害。第十五張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于202