HPLC異常問題原因及解決辦法辦法

1、 壓 力 異 常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。、 沒有壓力顯示，沒有流動(dòng)相流動(dòng)原 因3 3、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定b、修理或更換控制器56、補(bǔ)充流動(dòng)相b、更換入口濾頭7、單向閥損壞8、漏液8、擰緊或更換手緊接頭B、 流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒有壓力顯示解決方法1、更換儀表1、儀表損壞2、壓力傳感器損壞2、更換壓力傳感器、 壓力持續(xù)偏高2、在允許情況下反沖色譜柱b、更換篩板7、控制器失常8、保護(hù)柱阻塞9、在線過濾器阻塞7、修理或更換控制器8、清洗或更換保護(hù)柱9、清洗或更換在線過濾器、 壓力持續(xù)偏低2、確定漏液位置并維修3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱4、降

2、低溫度3、色譜柱選擇不當(dāng)4、柱溫過高5、控制器失常5、維修或更換控制器E、 壓力不斷上升解決方法1、見列表C1、見列表CF、 壓力降為零解決方法1、見列表A、B1、見列表、BG、 壓力不斷下降，但不回零解決方法1、見列表D1、見列表DH、 壓力波動(dòng)解決方法1、溶劑脫氣b、從泵中除去氣體2、更換單向閥3、更換泵密封4、溶劑脫氣b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）5、確定漏液位置并維修6、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)6、使用梯度洗脫 漏 液通?？梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題，就必須

3、將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密封表面有雜質(zhì)）；損壞的接頭應(yīng)該更換掉。、 接頭處漏液解決方法3、擰松，再重新擰緊b、更換4、接頭被污染5、部件不匹配4、拆下清洗b、更換5、使用同一品牌的配件B、 泵漏液解決方法1、擰緊單向閥（不必?cái)Q的過緊）b、更換單向閥2、擰緊接頭（不必?cái)Q的過緊）3、更換混合器密封3、混合器密封損壞4、維修或更換泵密封件5、維修或更換壓力傳感器6、更換脈沖阻尼器7、檢查隔膜，如果漏液立即更換b8、擰緊放空閥b、更換放空閥、 進(jìn)樣閥漏液解決方法1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥2、更換定量環(huán)3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適5、廢液管中產(chǎn)生虹吸6、廢液管阻塞4、使用恰當(dāng)

4、的進(jìn)樣針5、保持廢液管高于廢液液面6、更換或疏通廢液管、 色譜柱漏液解決方法2、拆下、清洗卡套、重新安裝3、使用合適的篩板（參考下表）3、篩板厚度不合適篩板選擇指導(dǎo)物質(zhì)粒徑篩板孔徑3-4u0.5u2u5-20uE、 檢測(cè)器漏液解決方法1a降）b、更換墊片2、流通池窗破碎3、手緊接頭漏液4、廢液管阻塞5、流通池阻塞3、擰緊或更換4、更換廢液管5、重新安裝或更換 備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。、 峰拖尾解決方法1、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板2、填充色譜柱3、使用更長的色譜柱b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱4 PH低 PH值更有

5、利于得到對(duì)稱峰4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生 5性修飾劑圖b、更改色譜柱B、 峰前延解決方法2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)3、樣品過載2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑3、降低樣品含量4、見、A24、色譜柱損壞、 峰分叉解決方法1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。、 峰變形原 因解決方法1、樣品過載1、減少樣品載量E、 早出的峰變形解決方法1、減少進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑1、

6、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰解決方法1、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）b、使用小體積的流通池G、 K增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重解決方法1、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c樣品）2、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）cd、試用另一種方法3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì)3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾解決方法1 50-100mM的緩沖液b用 Pka 等于流動(dòng)相PH值的緩沖液、 額外的峰原 因1、樣品中有其他組份2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速3、檢查流動(dòng)相是否純凈b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑c

7、、減少進(jìn)樣體積J、 保留時(shí)間波動(dòng)解決方法2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、 保留時(shí)間不斷變化3、更換合適的流動(dòng)相b、選擇合適的混合流動(dòng)相L、 基線漂移解決方法1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫 1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通 在檢測(cè)器之前使用熱交換器2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件 2、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo) 的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗 1N 的硝酸。（不要用鹽酸）4、檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成 4、取出阻塞物或更換管子。參考流通池窗口破裂

8、，產(chǎn)生噪音基線）檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生 6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì) 7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品溶劑配成 質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8 8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而 樣之間或在分析過程中，定期用表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào) 9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力整。 學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流強(qiáng)溶劑沖洗柱子。動(dòng)相。10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收

9、 10、將波長調(diào)整至最大吸收波長波長處。處M、 基線噪音（規(guī)則的）解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空 1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過高，檢測(cè)器 4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備 5、斷開、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng)6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器、 基線噪音（不規(guī)則的）原 因解決方法1、見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必

10、要，更換密封。檢查流通池是否漏液。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶4記錄儀電子元件的問題 4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污 7、用1N 的硝酸（不能用磷酸）9、更換色譜柱10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器 10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置O、 寬峰原 因解決方法1、重新制備新的流動(dòng)相2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器 3、見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。a、小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是 100ul）

11、以110或 1100的比例稀釋樣品c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長 b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長圖c、使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路7、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較 8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分 10、選擇其它類型的色譜柱以改11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過7512、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、 分離度降低解決方法2、保護(hù)柱或分析柱阻塞2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)

12、行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉Ｈ绻麊栴}仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、 所有的峰面積都太小原 因解決方法1、減少衰減的設(shè)定2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接、 所有的峰面積都太大原 因1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過低2、進(jìn)樣過多3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀 你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你最好養(yǎng)成習(xí)慣，每天花上幾分鐘運(yùn)用你的感官（除了味覺）來“感覺”你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液、 溶劑的氣味2、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、 熱氣味解決方法1、檢