融合蛋白構(gòu)效與安全性備注

1、朗沐融合蛋白分子構(gòu)效解析醫(yī)學(xué)組第1頁(yè)目 錄血管新生與滲漏的機(jī)制康柏西普分子構(gòu)效分析抗VEGF藥物的安全性第2頁(yè)血管新生與滲漏機(jī)制第3頁(yè)血管形成2種主要形式血管新生受到促進(jìn)血管生成因子和抑制血管生成因子調(diào)控，這兩種因子平衡使血管處于正常生長(zhǎng)狀態(tài)，一旦此平衡打破就會(huì)激活血管系統(tǒng)發(fā)芽長(zhǎng)出新生血管血管發(fā)生 Vasculogenesis特征：胚胎發(fā)育時(shí)，由成血管細(xì)胞分化形成原始血管結(jié)構(gòu)血管新生 Angiogenesis特征：從已經(jīng)存在血管中構(gòu)建出來(lái)新血管，毛細(xì)血管基底膜降解，內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖形成管狀結(jié)構(gòu)第4頁(yè)血管新生過程當(dāng)缺氧和炎癥發(fā)生后，相關(guān)細(xì)胞中促血管生成相關(guān)因子表示量上調(diào)，下游信號(hào)蛋白被激活，誘

2、導(dǎo)血管新生過程分為：基底膜降解增殖、出芽融合重排形成管腔分支出芽管腔延伸、血管成熟VEGF參加血管新生全部過程Potente et al., Cell ;146:87387.第5頁(yè)血管滲漏過程缺氧和炎癥情況下，相關(guān)因子表示增加，視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞和RPE細(xì)胞間緊密連接破壞，通透性增加，血管中液體、離子及細(xì)胞滲漏，細(xì)胞本身腫脹過程分為：正常血管連接蛋白降低、消失血管壁渙散、解體視網(wǎng)膜脫離、水腫VEGF參加血管滲漏全部過程Laura Kowalczuk, et al. PLoS ONE 6(3): e17462.MarkE.Kleinman, et al. Ophthalmologica ;224(s

3、uppl 1):1624第6頁(yè)VEGF與VEGFR功效血管新生和血管滲漏過程：VEGF-A、VEGF-B和PlGF發(fā)揮主要作用VEGF-C發(fā)揮次要作用VEGFR-1和VEGFR-2傳遞對(duì)應(yīng)信號(hào)淋巴管生成過程：VEGF-C和VEGF-D發(fā)揮作用VEGFR-3傳遞對(duì)應(yīng)信號(hào)結(jié)合域二聚體域酪氨酸激酶區(qū)血管新生和滲漏淋巴管生成J.S. Penn, et al. Prog Retin Eye Res. , 27(4): 331371第7頁(yè)VEGF-A：最強(qiáng)生成因子Hiroyuki Takahashi, et al. Clinical Science, ,109, 227241 J.S. Penn, et

4、al. Prog Retin Eye Res. , 27(4): 331371Valeria Tarallo, et al. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. ,64: 185189結(jié)合在VEGFR-1D2區(qū)，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移結(jié)合在VEGFR-2D2和D3區(qū)，激活促有絲分裂、血管生成和通透性增加信號(hào)生理病理下最強(qiáng)促血管生成因子第8頁(yè)不一樣疾病中各VEGF表示量不一樣各類眼部疾病臨床表現(xiàn)及預(yù)后存在差異，與各VEGF亞型表示量差異相關(guān)JIAN-PING TONG, et al. Am J Ophthalmol ;14

5、1:456462Hidetaka Noma, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. ;55:38783885Marion Funk, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. ;50:10251032*：相較于白內(nèi)障患者因子含量倍數(shù)第9頁(yè)VEGF-B：病理性存活因子Hiroyuki Takahashi, et al. Clinical Science, ,109, 227241 Xuri Li, et al. Trends in Molecular Medicine. , 18: 119-127Fang Zhang, et al. PNA

6、S, , 106: 6152-6157 Xiufeng Zhong, et al. Molecular Vision ; 17: 492-507 Maija Bry, et al. Physiol Rev , 94: 779794結(jié)合在VEGFR-1D2區(qū)促病理性血管新生和血視屏障破壞，加重滲漏對(duì)病理性血管生成和存活至關(guān)主要第10頁(yè)P(yáng)lGF：病理性增強(qiáng)因子Sandro De Falco. Exp. Mol. Med. , 4(1): 1-9Mieke Dewerchin, Peter Carmeliet. Cold Spring Harb Perspect Med ;2:a011056Dani

7、el C. Hoffmann, et al. J. Biol. Chem. , 288:17976-17989.結(jié)合在VEGFR-1D2區(qū)直接誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)和成熟維持新生血管信號(hào)刺激增強(qiáng)血管新生信號(hào)第11頁(yè)P(yáng)lGF 過表示引發(fā)微血管異常和血視屏障破壞非糖尿病白鼠眼內(nèi)給予PlGF引發(fā)DR特征性改變視網(wǎng)膜下積液微動(dòng)脈瘤形成與DR早期改變相同血管發(fā)芽血管通透性增加Kowalczuk L et al. PLoS One ; 6 (3): e17462.第12頁(yè)P(yáng)lGF敲除后會(huì)降低血管變性、VEGF產(chǎn)生和視網(wǎng)膜血管滲漏，同時(shí)增加視網(wǎng)膜存活Huang H et al. Diabetes ; 64 (1):

8、200212. DR中PlGF 敲除后其它效果降低 視網(wǎng)膜缺氧誘導(dǎo)因子1表示.降低VEGF-A 表示.增加緊密連接蛋白 (ZO-1) 和粘附蛋白 (VE-cadherin)表示, 保持BRB完整性.增加Ang-1 (血管成熟) 表示第13頁(yè)單純抑制VEGF-A誘導(dǎo)VEGF-B和PlGF增加與VEGF對(duì)照組相比，經(jīng)雷珠單抗處理后RPE細(xì)胞中PlGF和NOS表示量顯著增加；貝伐單抗和雷珠單抗都上調(diào)RPE細(xì)胞中VEGF-A基因表示兩種單抗類藥品均可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中VEGFR-2表示增加抗VEGF-A中和抗體可上調(diào)人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF-B表示ROP小鼠注射貝伐單抗后PlGF表示量增加Shani G

9、olan, et al. BMC Research Notes , 7:617Aiyi Zhou, et al. World J Pediatr, , 10:262-270第14頁(yè)康柏西普分子構(gòu)效解析第15頁(yè)康柏西普分子構(gòu)效關(guān)系D2：模擬VEGFR-1與VEGF-A、VEGF-B及PlGF結(jié)合，確保康柏西普含有多靶點(diǎn)高親和能力D3：模擬VEGFR-2與VEGF-A結(jié)合，確保康柏西普與VEGF-A全方面結(jié)合D4：穩(wěn)定二聚化受體與VEGF結(jié)合，增加親和力，延長(zhǎng)有效作用時(shí)間與暴露量Fc片段：穩(wěn)定二聚體樣結(jié)構(gòu)，延長(zhǎng)藥品半衰期Hong Li, et al. Experimental Eye Resear

10、ch, , 97: 154-159Wong TY, et al. Lancet ;370: 204-206第16頁(yè)康柏西普生產(chǎn)體系人VEGFR來(lái)源人IgG來(lái)源全人源蛋白正確蛋白折疊正確充分翻譯后修飾真核蛋白表示體系CHO表示系統(tǒng)生產(chǎn)成本高生產(chǎn)周期長(zhǎng)生產(chǎn)工藝復(fù)雜第17頁(yè)康柏西普多靶點(diǎn)高親和VEGFELISA作為最敏感且經(jīng)典親和力測(cè)定方法之一，其試驗(yàn)結(jié)果顯示，康柏西普不但能夠全方面結(jié)合VEGF-A各亞型、VEGF-B和PlGF，而且親和力高于阿柏西普和貝伐單抗高親和力不但能夠確?？蛋匚髌諒?qiáng)效拮抗VEGF，還能延長(zhǎng)半衰期De-Chao Yu, et al. Molecular Therapy , 2

11、0: 938-947Pasquale Ventrice,et al. J Pharmacol Pharmacother ;4:38-42.FP1: 阿柏西普 FP3: 康柏西普第18頁(yè)康柏西普顯著降低PlGF表示量糖尿病小鼠視網(wǎng)膜中多部位PlGF表示顯著增加，尤其是RPE層康柏西普治療后PlGF顯著降低，而貝伐單抗則沒有效果J. Huang, et al. Diabetes, obesity & metabolism ; 14: 644-53 CTR：正常小鼠D：未治療糖尿病小鼠D+PBS：PBS注射糖尿病小鼠D+A：貝伐單抗注射糖尿病小鼠D+KH：康柏西普注射糖尿病小鼠第19頁(yè)康柏西普：EC

12、50=28 pM 雷珠單抗：EC50=50 pMEC50：半數(shù)有效濃度，即能引發(fā)50%最大效應(yīng)藥品濃度。EC50值越大，說(shuō)明藥品效果越低?？蛋匚髌沼行б种芕EGF誘導(dǎo)HUVEC增殖Ming Zhang, et al. Pharmaceutical Research ; 26:204-10.第20頁(yè)康柏西普維持血管緊密連接糖尿病小鼠組視網(wǎng)膜血管上密封蛋白和閉合蛋白表示降低、分布紊亂，不能保持血管緊密連接，所以發(fā)生血管滲漏康柏西普治療后蛋白表示增加、分布恢復(fù)正常，血管連接緊密，滲漏降低，較貝伐單抗效果愈加顯著正常組 糖尿病小鼠組病鼠+貝伐單抗病鼠+康柏西普紅色： Claudin-5（密封蛋白-5）

13、 綠色： Occludin（閉合蛋白）J. Huang, et al. Diabetes, obesity & metabolism ; 14: 644-53 第21頁(yè)康柏西普對(duì)血管滲漏優(yōu)越療效使用鏈脲霉素誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，眼部發(fā)覺有多處血管滲漏；使用康柏西普治療后滲漏顯著降低，較貝伐單抗效果愈加顯著J. Huang, et al. Diabetes, obesity & metabolism ; 14: 644-53 CTR：正常小鼠D：未治療糖尿病小鼠D+PBS：PBS注射糖尿病小鼠D+A：貝伐單抗注射糖尿病小鼠D+KH：康柏西普注射糖尿病小鼠第22頁(yè)康柏西普對(duì)各類CNV優(yōu)越療效康柏西普

14、單次眼內(nèi)注射可有效抑制ROP小鼠眼部血管滲漏，降低無(wú)灌注區(qū)Fei Wang, et al. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol ; 251:21312139正常組ROP小鼠組ROP小鼠+IgGROP小鼠+康柏西普第23頁(yè)康柏西普對(duì)各類CNV優(yōu)越療效康柏西普單次眼內(nèi)注射可有效抑制激光灼傷恒河猴眼部引發(fā)CNV，減輕血管滲漏Ming Zhang, et al. Molecular Vision ; 14:37-49注射前（激光誘導(dǎo)后20天）注射后第14天注射后第28天第24頁(yè)12例患者存在NVD，進(jìn)行康柏西普0.5mg玻璃體腔注藥，注藥前后采取Angio OCT觀察注藥

15、后第一天NVD開始顯著消退，今后連續(xù)消退聯(lián)合激光患者NVD能夠完全消退康柏西普快速消退新生血管一項(xiàng)研究戴榮平教授. Unpublished data.第25頁(yè)使用OCTA觀察發(fā)覺，康柏西普注射1天后新生血管顯著消退，1周后新生血管繼續(xù)消退。基線注藥1天注藥1周康柏西普快速消退新生血管杜xx，男性，37歲，雙眼DR，左眼NVD戴榮平教授. Unpublished data.第26頁(yè)多項(xiàng)注冊(cè)研究證實(shí)康柏西普多靶點(diǎn)拮抗優(yōu)越療效研究名稱給藥方案研究時(shí)長(zhǎng)BCVA（ETDRS Letter）改進(jìn)Ia期單次注射，劑量爬坡42 days+16.8HOPE3+PRN，0.5mg/2.0mg12 months+1

16、5.6AURORA3+PRN/Q1M，0.5mg/2.0mg12 months+12.9AURORA-PCV亞組3+PRN/Q1M，0.5mg/2.0mg12 months+14.3PHOENIX3+Q3M，0.5mg12 months+10.0LAMP（極低視力）3+PRN，0.5mg6 months+23.3第27頁(yè)抗VEGF藥品安全性第28頁(yè)P(yáng)rotocol T 安全性結(jié)果阿柏西普組發(fā)生APTC事件患者百分比顯著低于雷珠單抗組，與貝伐單抗相近Fc片段不會(huì)影響心血管系統(tǒng)安全性出現(xiàn)最少一個(gè)事件患者百分比阿柏西普(N = 224)貝伐單抗(N = 218)雷珠單抗(N = 218)總P值非致命

17、心梗3%1%3%非致命中風(fēng)1%3%5%血管性死亡1%4%4%任何APTC事件5%8%12%0.047成對(duì)比較（多重比較）：阿柏西普-貝伐單抗：P = 0.34，阿柏西普-雷珠單抗： P = 0.047，貝伐單抗-雷珠單抗：P = 0.20第29頁(yè)VIEW 1 & VIEW 2 安全性結(jié)果抗VEGF藥品眼部和全身安全性相同Jeffrey S. Heier, et al. Ophthalmology ;119:25372548發(fā)生率高于0.5%眼部SAE及其它主要非眼部SAE第30頁(yè)康柏西普無(wú)ADCC效應(yīng)人體免疫被激活后，抗體Fc片段經(jīng)過抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用（Antibody-depende

18、nt cell-mediated cytotoxicity , ADCC）和補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒作用（Complement-Dependent Cytotoxicity, CDC）引發(fā)免疫反應(yīng)依據(jù)FDA要求，檢測(cè)康柏西普對(duì)各種細(xì)胞，如HUVEC、A341、Calu-6、HT-1080及DLD-1ADCC效應(yīng)康柏西普沒有Fc片段介導(dǎo)ADCC效應(yīng)Report for Study No.: 56005-14-022: Antibody Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC) Effect of KH902 on HUVEC, A431, Calu-6, HT-1080 and DLD-1 Cell Lines. S