藥物分析抗生素類藥物詳解演示文稿

1、藥物分析抗生素類藥物詳解演示文稿第一頁，共八十二頁。（優(yōu)選）藥物分析抗生素類藥物第二頁，共八十二頁。一、抗生素類藥物的特點1.化學純度低同系物、異構(gòu)體、降解物；2.活性組分易發(fā)生變異菌株、發(fā)酵條件；3.穩(wěn)定性差活潑基團。第三頁，共八十二頁。 二、抗生素藥物的質(zhì)量分析 抗生素藥物的質(zhì)量控制方法與一般化學藥品一樣，通過鑒別、檢查、含量（效價）測定三個主要方面來判斷其質(zhì)量的優(yōu)劣。 采用生物學法與物理化學法.第四頁，共八十二頁。一）鑒別試驗： 1官能團的顯色反應(yīng) 2光譜法 3色譜法 4生物學法（抑菌能力），已少用。青霉素鈉 鑒別 取本品與已知含量的青霉素適量，分別加水制成每1ml中約含50g的溶液，各

2、取1ml ，加入不少于200 單位的青霉素酶溶液1ml,在37滅活1小時后，取滅菌濾紙片，分別用上述溶液浸濕后，用濾紙吸去多余的液體，置攤布金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003的培養(yǎng)基上，在37培養(yǎng)約16小時后均無抑菌作用，而用同一方法檢查未經(jīng)青霉素酶滅活的溶液均有抑菌作用。 第五頁，共八十二頁。 （二）雜質(zhì)檢查 1影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標（酸堿度、水分） 2控制有機和無機雜質(zhì)的指標（澄清度、殘留溶劑） 3與臨床安全性密切相關(guān)的指標（異常毒性、熱 原、細菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等） 4其他指標（如內(nèi)酰胺類“聚合物”的檢查） 第六頁，共八十二頁。（三）含量測定或效價測定 1微生物檢定法 以抗生素對微生物

3、的殺傷或抑制程度為指標來衡量抗生素效價（potency）的一種方法。 其測定方法有管碟法、濁度法。 對分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜、多組分的抗生素，仍為首選方法。第七頁，共八十二頁。優(yōu)點1、與臨床應(yīng)用一致2、靈敏度高3、適應(yīng)范圍廣缺點1、操作繁瑣2、培養(yǎng)時間長3、測定誤差大第八頁，共八十二頁。2理化方法 根據(jù)抗生素的分子結(jié)構(gòu)特點，利用其特有的化學或物理化學性質(zhì)及反應(yīng)而進行的。優(yōu)點1、準確度高2、簡單、快速1、不一定代表生物效價缺點2、易受雜質(zhì)干擾對所選理化方法的要求： 正確、專屬、省時、用樣少、試劑易得、操作簡單、結(jié)果與生物效價吻合，如HPLC 法。第九頁，共八十二頁。 3、抗生素活性表示方法 抗生素的活性以

4、效價單位表示，即指每毫升或每毫克中含有某種抗生素的有效成分的多少。用單位（u）表示或微克（g）表示。如1mg青霉素鈉為1670單位， 1mg青霉素鉀為： 1M青霉素鈉/M青霉素鉀1670=1598單位第十頁，共八十二頁。三、抗生素分類 內(nèi)酰胺類 氨基糖苷類 四環(huán)素類 氯霉素類 大環(huán)內(nèi)酯類 其他類第十一頁，共八十二頁。第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素 包括青霉素族和頭孢菌素族化學結(jié)構(gòu) ：青霉素類頭孢菌素類6-APA7-ACA1432435126第十二頁，共八十二頁。青霉素（青霉素G、芐青霉素）氨芐西林（氨芐青霉素）第十三頁，共八十二頁。阿莫西林（羥氨芐青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HO

5、CH普魯卡因青霉素第十四頁，共八十二頁。頭孢羥氨芐頭孢氨芐第十五頁，共八十二頁。一、結(jié)構(gòu)特點：1)青霉素和頭孢菌素分子中都有一個游離羧基和酰胺側(cè)鏈。2)氫化噻唑環(huán)或氫化噻嗪環(huán)與-內(nèi)酰胺并合的雜環(huán)，分別構(gòu)成二者的母體：6-APA、 7-ACA。3)青霉素分子中含有三個手性碳原子(C3、C5、C6)，頭孢菌素分子中含有兩個手性碳原子(C6、C7)。 第十六頁，共八十二頁。性質(zhì)1 ：酸性與溶解度分子中游離羧基具有相當強的酸性，能與無機堿或某些有機堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑。第十七頁，共八十二頁。性質(zhì)2 ：旋光性青霉素族分子中含有三個手性碳原子，頭孢菌素族含

6、有兩個手性碳原子，故都具有旋光性。根據(jù)此性質(zhì)，可用于定性和定量分析。第十八頁，共八十二頁。 性質(zhì)3 ：紫外吸收特性2、頭孢菌素類 母核有共軛體系 1、青霉素類 母核無明顯UV 多數(shù)有苯環(huán)取代基 第十九頁，共八十二頁。性質(zhì)4 ： -內(nèi)酰胺環(huán)不穩(wěn)定性 干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液在pH6-6.8時較穩(wěn)定。 -內(nèi)酰胺環(huán)是該類抗生素結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的部分。四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解不穩(wěn)定性因素（某些金屬離子）（溫度）某些氧化劑、羥胺第二十頁，共八十二頁。例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉酸H2OpH2100青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl

7、2例第二十一頁，共八十二頁。1羥肟酸鐵反應(yīng) 青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸；在稀酸中與高鐵離子呈色。 二、鑒別試驗：(一)呈色反應(yīng)+第二十二頁，共八十二頁。例：ChP(2005)頭孢哌酮鑒別 取本品10mg，加水2ml與鹽酸羥胺溶液取34.8%鹽酸羥胺溶液1份，醋酸鈉-氫氧化鈉溶液1份，乙醇4份3ml，振搖溶解后，放置5min，加酸性硫酸鐵銨試液1ml，搖勻，顯紅棕色。第二十三頁，共八十二頁。2類似肽鍵的反應(yīng)（1）某些具有-氨基的本類藥物，如氨芐西林，遇茚三酮即顯藍紫色。 第二十四頁，共八十二頁。-氨基、伯胺某些羥基胺類酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍紫色第二十五頁，

8、共八十二頁。（2）雙縮脲反應(yīng)-內(nèi)酰胺類似肽鍵（開環(huán)分解）紫紅色-內(nèi)酰胺類堿性 銅溶液b第二十六頁，共八十二頁。（1）與重氮苯磺酸呈色反應(yīng) （偶合）3其他顯色反應(yīng)第二十七頁，共八十二頁。（偶合）頭孢哌酮第二十八頁，共八十二頁。（2）硫酸-硝酸呈色反應(yīng) 頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應(yīng)后呈色。此顯色反應(yīng)可區(qū)別某些頭孢菌素族抗生素，因此被一些國家藥典采用供鑒別。 如中國藥典(1995年版)收載的頭孢噻吩鈉呈紅棕色；頭孢氨芐呈黃色；頭孢噻肟鈉呈亮黃色。 第二十九頁，共八十二頁。（3）變色酸-硫酸呈色反應(yīng) 中國藥典(1995年版)采用本法鑒別。如阿莫西林林加變色酸-硫酸試劑混合后，于150加熱2-3min，因

9、分解出甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。 第三十頁，共八十二頁。（二） 沉淀反應(yīng) 溶于過量HCl或有機溶劑第三十一頁，共八十二頁。例 青霉素鈉 青霉素鉀 Ch.P（2000） 【鑒別】（2）取本品約0.1g，加水5ml溶解后，加稀鹽酸2滴，即生成白色沉淀；此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中溶解.第三十二頁，共八十二頁。2. 重氮化-偶合反應(yīng)芳香第一胺類反應(yīng)普魯卡因青霉素重氮化紅色堿性-萘酚（偶合）第三十三頁，共八十二頁。例 普魯卡因青霉素 Ch.P（2000） 【鑒別】（3）本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)（附錄）。第三十四頁，共八十二頁。K+火焰 紫色+0.1%四苯硼鈉+HAc白（三）

10、鉀、鈉離子的焰色反應(yīng)Na+火焰 鮮黃色+醋酸氧鈾鋅第三十五頁，共八十二頁。例 青霉素鈉 Ch.P（2005） 【鑒別】（4）本品顯鈉鹽的火焰反應(yīng)（附錄 ）。 例 青霉素鉀 Ch.P（2005） 【鑒別】（3）本品顯鉀鹽的火焰反應(yīng)（附錄 ）。 第三十六頁，共八十二頁。 頭孢氨芐 max = 262nm青霉素V鈉 A280nm/A264nm = 1.301.50A,Emin ,max ,%cm11光譜圖2、紫外分光光度法(UV)（四）光譜法1、紅外吸收光譜法第三十七頁，共八十二頁。（五）色譜法1、TLC法對照品對照法2、HPLC法和斑點顏色比較供試品對照品相同條件fRRt比較供試品對照品相同條件第

11、三十八頁，共八十二頁。三、特殊雜質(zhì)的檢查 本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等，一般采用HPLC法控制其限量，也有采用測定雜質(zhì)的吸收度來控制雜質(zhì)量的。第三十九頁，共八十二頁。四、含量測定（一）電位配位滴定法汞量法*內(nèi)酰胺類不直接與汞鹽反應(yīng)*內(nèi)酰胺類水解產(chǎn)物可與汞鹽 發(fā)生定量反應(yīng)1. 原理第四十頁，共八十二頁。水解水解青霉胺絡(luò)汞Ch.P（2000）青霉素鉀青霉素鈉苯唑西林鈉普魯卡因青霉素氯唑西林鈉第四十一頁，共八十二頁。NaOHpH4.6脫羧Hg(NO3)2pH4.62:1突躍11:1突躍2Hg(NO3)2pH4.6青霉胺絡(luò)汞第四十二頁，共八十二頁。 青霉胺與硝酸汞發(fā)生絡(luò)合

12、反應(yīng)。先按2分子青霉胺與1分子汞離子的比例絡(luò)合，發(fā)生第一次滴定突躍，但突躍范圍很小，變化比較平緩，不宜用于做終點，繼續(xù)用硝酸汞滴定時，青霉胺分子與汞離子按1:1的比例絡(luò)合，生成穩(wěn)定的絡(luò)合物青霉胺絡(luò)汞，發(fā)生第二次滴定突躍。其突躍范圍較大，變化較急劇，宜于確定終點。第四十三頁，共八十二頁。2. 方法醋酸鹽緩沖液滴定水解pH4.6pH4.6滴定第四十四頁，共八十二頁。3. 討論（1）電位法指示終點，以第二次滴定 突躍為終點 反應(yīng)摩爾比1:1 （2）空白試驗 用未降解樣品測定（3）優(yōu)點 不需標準品第四十五頁，共八十二頁。例 青霉素鈉 Ch.P（2000） 【含量測定】取本品約50mg，精密稱定，加水5

13、ml溶解后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻,放置15分鐘，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸鹽緩沖液（pH4.6）20ml及水20ml，搖勻，照電位滴定法（附錄 A）, 用鉑電極為指示電極，汞-硫酸亞汞電極為參比電極，在3540，用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）緩慢滴定，（控制滴定過程約為15分鐘），不計第一個等當點，計算第二個等當點時消耗滴定液的量。第四十六頁，共八十二頁。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的總青霉素（按C16H17N2NaO4S計算）。 另取本品約0.5g，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完全溶解，在室溫下,立即用硝

14、酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定，滴定終點判斷方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的降解物（按C16H17N2NaO4S計算）。每1mg的C16H17N2NaO4S相當于1670青霉素單位。第四十七頁，共八十二頁。（二）RP-HPLC法特點 快速 高效 靈敏度高 專屬性強 重現(xiàn)性好 一法多用(鑒別、檢查、含測)Ch.P第四十八頁，共八十二頁。第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素鏈霉素 雙氫鏈霉素新霉素 卡那霉素慶大霉素 巴龍霉素第四十九頁，共八十二頁。鏈霉素鏈霉胍 + 鏈霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺 苷元鏈霉雙糖胺鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺鏈霉胍第五十頁，共八

15、十二頁。慶大霉素 糖 苷元絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺 糖 絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第五十一頁，共八十二頁。慶大霉素C復(fù)合物 慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 慶大霉素C2b R=R1=H R2=CH3第五十二頁，共八十二頁。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素 3個慶大霉素 5個堿性中心（一）堿性水溶性（二）溶解性（四） UV（三）苷的水解與穩(wěn)定性鏈霉素 pH57.5慶大霉素 pH212 穩(wěn)定鏈霉素在230nm

16、處有吸收，慶大霉素、奈替米星無吸收第五十三頁，共八十二頁。坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)第五十四頁，共八十二頁。二、 鑒別試驗 茚三酮反應(yīng)（一）羥基胺結(jié)構(gòu)硫酸慶大霉素鑒別 取本品約5mg ，加水1ml 溶解后，加0.1 茚三酮的水飽和正丁醇溶液1ml 與吡啶 0.5ml，在水浴中加熱5 分鐘，即顯紫藍色。 第五十五頁，共八十二頁。鏈霉胍特有反應(yīng)（或-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（二） -萘酚第五十六頁，共八十二頁。 麥芽酚反應(yīng)（三） 鏈霉糖特征反應(yīng)H+分子重排擴環(huán)第五十七頁，共八十二頁。紫紅麥芽酚第五十八頁，共八十二頁。N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（四） 乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物 對二甲氨基苯

17、甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）H+第五十九頁，共八十二頁。（五）反應(yīng)H+光譜法（七）慶大霉素無UV吸收色譜法（六）第六十頁，共八十二頁。三、 雜質(zhì)檢查鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素B（甘露糖鏈霉素） 方法 TLC中的對照品法 （BP）1. 來源 反應(yīng)中間體第六十一頁，共八十二頁。四、 含量測定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法 本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。第六十二頁，共八十二頁。離子交換色譜法離子對色譜法RP-HPLC法HPLC法第六十三頁，共八十二頁。第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素1234

18、56789101112第六十四頁，共八十二頁。四環(huán)素（TC）tetracycline金霉素 (CTC) chlortetracycline第六十五頁，共八十二頁。土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四環(huán)素多西環(huán)素 (DOTC) doxycycline脫氧土霉素第六十六頁，共八十二頁。第六十七頁，共八十二頁。一、 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)兩性（一）酚羥基、烯醇型羥基 弱酸性二甲胺基 弱堿性1.與酸、堿均能成鹽，臨床多用鹽酸鹽2.強酸或強堿中溶解度 第六十八頁，共八十二頁。 吸濕性（二）多含結(jié)晶水生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ 旋光性、UV、熒光（三） 與金屬離子絡(luò)合（四）pH3 7.5 熒光 第六十九頁，共八十二頁。第七十頁，共八十二頁。不穩(wěn)定性（五）（1） 差向異構(gòu)化淡黃黑藍色熒光第七十一頁，共八十二頁。（土霉素、多西環(huán)素不易發(fā)生差向異構(gòu)化）第七十二頁，共八十二頁。（2） 降解反應(yīng)（1）酸性下降解max = 445nmmax = 4