液相色譜柱維護(hù)保養(yǎng)及儀器沖洗

1、液相色譜柱維護(hù)保養(yǎng)及儀器沖洗注意色譜柱維護(hù)保養(yǎng)就是很重要得,關(guān)系到色譜柱得使用壽命與檢測結(jié)果得準(zhǔn)確性,所以任何人用過色譜柱之后 ,一定要對色譜柱進(jìn)行保養(yǎng),管理人員與使用者互相監(jiān)督。輕拿輕放,避免損壞填料;另外沒有使用得情況下,一總得原則就是色譜柱要定要保證、對于具體得色譜柱 下面列出常用色譜柱維護(hù)保養(yǎng)得,具體方法與注意事項(xiàng),以便使用者參考。C18柱包括預(yù)柱)對于未啟用得新得色譜柱,先用甲醇或乙腈以小流速0.2m/min緩慢升高到0.5ml/mi不接檢測器沖洗色譜柱 30 分鐘后,將色譜柱與檢測器連上,流速調(diào)為1。0 ml/min 沖洗色譜柱60 分鐘,然后不斷降低有機(jī)相得比例如 80%、5、1

2、甲醇或乙腈各沖洗至少0 ,則將色譜柱保存在高比例有機(jī)相中(如0%甲醇或乙腈,或者參考該色譜柱使用說明書中建議得溶劑中);色譜柱使用時(shí)應(yīng)用與分析流動相相同比例得有機(jī)溶劑(將緩沖鹽溶液換成水)沖洗色譜柱5 分鐘,然后再換成流動相進(jìn)行樣品分析。樣品分析完后,色譜柱維護(hù)與保養(yǎng)方法:,則要先用 10%甲醇或乙腈沖洗,1l/in 得流速沖洗至少 30min,再用 8甲醇或乙腈沖洗至少 30in,柱子保存在80甲醇或乙腈里(,再換成流動相。,如柱子長時(shí)間未用 則柱子保存在 10得甲醇或乙腈里。對于含有離子對試劑得流動相如庚烷磺酸鈉與十二烷基磺酸鈉等 ,柱子應(yīng)采用梯度洗脫,一般用乙腈-水系統(tǒng)(水:0-0;乙腈

3、:1090)沖洗時(shí)間要稍長些,然后保存于 90乙腈。,目前所有得C18(柱均不能用純水進(jìn)行長時(shí)間 1小時(shí)以上)沖洗,除非有專門耐水得專用柱,否則,用純水長時(shí)間沖洗色譜柱,會導(dǎo)致色譜柱得固定相流失與相塌陷,損壞色譜柱。大多數(shù)反相色譜柱得 pH 穩(wěn)定范圍就是8,有得穩(wěn)定范圍會寬,具體pH穩(wěn)定范圍參照色譜柱說明書,當(dāng)分析條件得 pH 值偏小或偏大時(shí),可選擇 pH穩(wěn)定范圍寬得柱子進(jìn)行分析,否則,會損壞色譜柱。在每次進(jìn)行樣品分析時(shí),要保證流動相與色譜系統(tǒng)及柱內(nèi)得保存液要互溶,如不能互溶,則需要用一定比例得有機(jī)溶劑不低于 10或與分析流動相相當(dāng)?shù)糜袡C(jī)溶劑對柱子進(jìn)行過渡,否則,流動相中得鹽會在系統(tǒng)與柱內(nèi)析出

4、,影響樣品分析或損壞柱子。硅膠柱、正相手性色譜柱【包括 AS-HAH系列,DMB5TBB系列,O系列如 O3100、OA330】對于未啟用得新得色譜柱,在保證系統(tǒng)就是正相得情況下,可先用異丙醇小流速流速為 0103ml/mn)沖洗色譜柱約 15分鐘,然后換上正相流動相平衡進(jìn)行色譜分析。硅膠柱及正相手性柱不能過水相對于sepax系列得硅膠柱,可以過低比例得水相有機(jī)相不低于接上色譜柱之前要保證液相色譜系統(tǒng)中得所有管路為如水/乙腈;水/甲醇),先用異丙醇沖洗所有管路,然后用正相流動相沖洗所有管路 ,最后再接上色譜柱;若反相流動相中含有緩沖鹽如緩沖鹽乙腈;緩沖鹽甲醇),先用純水沖洗HPL系統(tǒng),然后用異

5、丙醇沖洗所有管路,最后用正相流動相沖洗,先用異丙醇沖洗色譜系統(tǒng)與色譜柱,再用色譜級得正己烷沖洗色譜柱,(或者直接用正己烷-異丙醇(90:10)沖洗,并保存在正己烷異丙醇(90:0)中。如長時(shí)間未用,則保存在正己烷中。需要特別強(qiáng)調(diào)得就是,沖洗硅膠柱時(shí),不能用純水或含水得有機(jī)溶劑或緩沖鹽體系沖洗色譜柱,只能用純有機(jī)溶劑沖洗色譜柱對于sepax系列得硅膠柱可以用不低于 50%有機(jī)相沖洗色譜柱),最后保存在純得有機(jī)溶劑中、在進(jìn)行樣品分析前,一定要保證流動相與色譜系統(tǒng)及色譜柱柱內(nèi)得保存液要互溶,如不互溶,則需要用異丙醇過度,否則,會影響色譜系統(tǒng)與損壞柱子。反相手性色譜柱如CEL O):同 C 柱1陰離子

6、柱與陽離子柱:目前常見得陰子柱有waters PTM anon,陽離子柱有磺酸基陽離子柱與 rs陽離子交換柱鈣型。對于water IC-PakTM anio 與waters鈣型),新柱子使用前用高純水小流速(0、mi緩慢升高到.5mmi沖洗約 30 分鐘,然后再換成流動相平衡色譜柱。在沖洗色譜柱之前,要保證整個(gè)色譜系統(tǒng)為純水相。對于磺酸基陽離子柱(含有硅膠基柱得),使用前用甲醇或乙腈小流速沖洗0分鐘,然后高純水替換系統(tǒng)沖洗,然后接上色譜柱。分析完樣品后,對于 waers ICPaTM anion 與 waters 陽離子交換柱(鈣型)用高純水沖洗色譜柱,色譜柱最后保存在純化水中。對于磺酸基陽離

7、子柱,用0%得乙腈或甲醇沖洗色譜柱 3分鐘,最后保存在甲醇或乙腈中(參照柱子說明書。沖洗所用流速根據(jù)柱子耐壓情況進(jìn)行調(diào)整、需要特別強(qiáng)調(diào)得就是wats IC-PTM ao與waters陽離子交換柱鈣型就是不能過有機(jī)相純有機(jī)溶劑或有機(jī)溶液),否則會損壞色譜柱。氨基柱、氰基柱、苯基柱及 C8柱目前所使用得氨基柱、氰基柱、苯基柱及 C8 柱基本都就是使用反相系統(tǒng),其操作方法與維護(hù)保養(yǎng)與 C1相同。對于新碰到得別得型號得色譜柱,如本規(guī)程沒有說明時(shí),要參照色譜柱說明書具體問題具體分析。液相儀器得沖洗1、沖洗色譜系統(tǒng)具體情況具體分析,可針對緩沖鹽濃度較高得流動相)一般做完試驗(yàn)沖洗完色譜柱后,換上兩通,將各通

8、道放于 10%乙腈中沖洗至少30 分鐘若原色譜系統(tǒng)中流動相含鹽,則用高純水 有時(shí)候用溫水效果更好沖洗至少30分鐘后再用10%,則將儀器保存于乙腈中。、清洗進(jìn)樣針、柱塞桿洗針液應(yīng)選擇能較好溶解樣品得溶劑(如該樣品在 7甲醇中溶解,則洗針液應(yīng)選擇 甲醇或更高比例得甲醇);清洗柱塞桿得溶劑(為了清洗流動相中析出得鹽),一般選擇低比例得有機(jī)相,如 1甲醇或乙腈、3、儀器得鈍化包括進(jìn)樣器與檢測池若被污染,系統(tǒng)應(yīng)做清洗與鈍化處理。一般采用 30%磷酸水溶液作為清洗劑,用 6mol/L 硝酸作為鈍化劑,先清洗再鋼管路得內(nèi)表面形成光滑均勻得氧化膜。30%磷酸水溶液制備:取5濃磷酸 3ml 與 65ml 水混勻。6ml/L硝酸得制備:取濃硝酸 4ml 與0ml水混勻。方法:將色譜柱取下,用兩通連接進(jìn)樣器與檢測器,將所有吸濾頭放入高純水中,以1.ml/n至少30分鐘待管路中