宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)乙酰肝素酶的表達(dá)及臨床意義-畢業(yè)答辯

宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)乙酰肝素酶的表達(dá)及臨床意義

研究生指導(dǎo)老師目錄研究背景與目的研究方法研究結(jié)果主要結(jié)論討論展望致謝

2研究背景與目的（1）宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，其最主要的轉(zhuǎn)移途徑是淋巴轉(zhuǎn)移，淋巴轉(zhuǎn)移是目前明確的可導(dǎo)致臨床治療失敗和死亡的主要原因。有研究發(fā)現(xiàn)[1]宮頸癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者5年生存率為80%～90%，當(dāng)淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移時(shí)生存率下降至45%，盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素。研究背景與目的（2）有報(bào)道指出[2,3]，宮頸癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，約60%為多組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中有53%的病例出現(xiàn)了跳躍性轉(zhuǎn)移。如能在術(shù)前準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況，即可準(zhǔn)確的了解腫瘤的范圍，選擇合適的治療方案，避免不必要的根治性手術(shù)及術(shù)后相應(yīng)并發(fā)癥的發(fā)生，但目前對(duì)于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷，尚缺乏有效的手段。

研究背景與目的（3）乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是一種β-D-葡萄糖醛酸內(nèi)切酶，它能在數(shù)個(gè)位點(diǎn)降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖，破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基膜的完整性，同時(shí)釋放VEGF、b-FGF、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子等生物活性因子，從而有利于腫瘤細(xì)胞穿越細(xì)胞外基質(zhì)和血管壁，促進(jìn)腫瘤的局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。乙酰肝素酶作用機(jī)制模式圖[4]研究背景與目的（4）我們的前期研究及一些國(guó)外的研究均已證實(shí)HPA在宮頸癌原發(fā)灶中的表達(dá)顯著增高，是宮頸癌的重要生物標(biāo)志物。本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)宮頸鱗癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中HPA的表達(dá)情況，分析宮頸鱗癌淋巴結(jié)HPA的表達(dá)與臨床預(yù)后因素間的關(guān)系，以期為宮頸鱗癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移診斷提供一新的分子指標(biāo)。研究方法（1）收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科2007年1月—2012年12月病理確診且臨床資料完整的宮頸鱗癌石蠟標(biāo)本102例，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者53例（A組），淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者49例（B組）。A組取原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)3個(gè)部位B組取原發(fā)灶和淋巴結(jié)2個(gè)部位，用于免疫組織化學(xué)染色研究方法（2）采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)HPA在宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（A組）和淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者（B組）的表達(dá)情況。分別行常規(guī)HE染色和HPA、CK19免疫組織化學(xué)標(biāo)記，CK19為鱗狀上皮標(biāo)記。結(jié)合圖像分析技術(shù)檢測(cè)各組中HPA表達(dá)的平均灰度值和陽性單位。研究方法（3）圖1

研究技術(shù)路線研究方法（4）所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，圖像分析數(shù)據(jù)采用χ±s表示，各組間比較采用方差分析，HPA表達(dá)率采用卡方檢驗(yàn)。生存曲線采用Kaplan-Meier方法，生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox回歸分析法。檢驗(yàn)水平α=0.05。研究結(jié)果（1）1.宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中HPA的陽性表達(dá)情況圖2宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中的HPA陽性表達(dá)率研究結(jié)果（3）3.宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中HPA的表達(dá)情況表1宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中HPA的表達(dá)水平比較分組例數(shù)平均灰度值FP陽性單位FP

A組原發(fā)灶53102±8*30.5210.0005.0±3.96.3510.021轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)53119±3#4.7±4.4未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)53136±5▽1.3±0.7B組原發(fā)灶49113±321.3970.0004.7±3.14.827

0.037淋巴結(jié)49143±41.1±0.812研究結(jié)果（4）4.淋巴結(jié)HPA表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系圖4宮頸鱗癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移與患者生存分析圖5

宮頸鱗癌淋巴結(jié)HPA表達(dá)水平與患者生存分析研究結(jié)果（5）5.宮頸鱗癌中HPA的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系

研究結(jié)果（6）6.宮頸鱗癌預(yù)后的Cox模型多因素分析主要結(jié)論1.HPA在宮頸鱗癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)均顯著增高，可作為宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)；2.宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)OS明顯低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌的獨(dú)立預(yù)后因素；3.淋巴結(jié)HPA陽性表達(dá)者M(jìn)OS明顯低于淋巴結(jié)HPA陰性表達(dá)者，提示淋巴結(jié)HPA陽性患者預(yù)后差。1.HPA在宮頸癌中的研究討論（1）我們的前期研究及一些國(guó)外的研究均已證實(shí)HPA在宮頸癌原發(fā)灶中的表達(dá)顯著增高，是宮頸癌的重要生物標(biāo)志物。本課題對(duì)宮頸鱗癌淋巴結(jié)HPA的表達(dá)情況進(jìn)行了全面的研究，證實(shí)宮頸癌原發(fā)灶HPA的陽性表達(dá)率明顯增高，與我們前期研究結(jié)果相同。討論（2）本研究中，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)表達(dá)率高達(dá)92.6%，提示HPA的異常表達(dá)在宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用，可能參與宮頸鱗癌腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程。Dafni等[6]在檢測(cè)HPA表達(dá)對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移效應(yīng)的研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)生物素標(biāo)記后，HPA高表達(dá)的淋巴瘤小鼠的腘窩淋巴結(jié)較HPA低表達(dá)的小鼠腘窩淋巴結(jié)的MRI顯像強(qiáng)度明顯增加，說明HPA表達(dá)對(duì)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有影響。討論（3）

淋巴結(jié)清掃的范圍一直是宮頸癌患者手術(shù)爭(zhēng)論的熱點(diǎn)，術(shù)前若能通過宮頸癌特異性分子標(biāo)志物，對(duì)宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況進(jìn)行評(píng)估，則可針對(duì)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)行相應(yīng)淋巴結(jié)清掃以減少手術(shù)創(chuàng)傷，對(duì)術(shù)后是否輔以放療也起到了關(guān)鍵性的指導(dǎo)作用。討論（4）2.淋巴結(jié)中HPA表達(dá)的研究現(xiàn)況國(guó)內(nèi)外都在尋找轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)特異性和敏感性的生物分子指標(biāo)?；谖覀兊那捌谘芯抗ぷ?，本研究是國(guó)內(nèi)外首次以HPA為靶分子的宮頸癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的研究。本研究對(duì)我們下一步進(jìn)行的研究，宮頸癌PET成像診斷研究的靶分子的選擇提供了依據(jù)，尤其是鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)無創(chuàng)傷PET成像診斷的研究。展望

HPA的研究經(jīng)歷了一個(gè)漫長(zhǎng)的時(shí)期，其作用機(jī)制也逐漸清晰。HPA不僅是宮頸癌的生物標(biāo)志物，也有望成為宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)診斷的生物標(biāo)志物。在我們下一步要進(jìn)行的宮頸癌PET成像診斷的研究中，HPA作為宮頸癌示蹤劑，是對(duì)其作用的進(jìn)一步開發(fā)，同樣擁有廣闊的前景和更加深遠(yuǎn)的意義。[1]AokiY,SasakiM,WatanabeM,etal.High-riskgroupinnode-positivepatientswithstageⅠB,ⅡA,andⅡBcervicalcarcinomaafterradicalhysterectomyandpostoperativepelvicirradiation[J]．Gynecoloncol,2000,77(2):305-309.[2]馮淑瑜,張彥娜,劉建剛,等.宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素及預(yù)后分析[J]．癌癥,2005,24(10):1261-1266.[3]張秀珍,付玉蘭,趙西俠,等.宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分析[J]．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2005,13(2):232-234.[4]Expressionandanalysisofheparanase、VEGFandβ-FGFinprostatecancer[J].OncolRes,2006,61(3):219-234.[5]ParishCR,FreemanC,HulettMD,etal.Heparanase:akeyenzymeinvolvedincellinvasion[J].BiochimBiophysActa,2001,1471:99-108.[6]DafniH,CohenB,ZivK,etal.