蛋白質(zhì)多重標記

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MultipleLabelingofProteinsDesignof3-(4-Carboxybenzoyl)-2-quinolinecarboxaldehydeasaReagentforUltrasensitiveDeterminationofPrimaryAminesbyCapillaryElectrophoresisUsingLaserFluorescenceDetectionKineticsandapparentactivationenergyofthereactionofthefluorogenicreagent5-furoylquinoline-3-carboxaldehydewithovalbumin目錄contents1234論文主題研究內(nèi)容如何支持主題層次和邏輯研究方法

5分析實驗數(shù)據(jù)6存在不足論文主題TOPICNO.1論文主題毛細電泳法測定的蛋白質(zhì)往往都需要熒光標記,實驗發(fā)現(xiàn)多重標記的熒光蛋白電泳譜帶較天然蛋白的電泳譜帶而言明顯變寬。NO.1論文主題本文通過觀察比較區(qū)帶電泳法測得天然綠色熒光蛋白和FQ標記的綠色熒光蛋白的譜帶，證明多重熒光標記導致譜帶變寬并分析其原因。研究內(nèi)容支持主題

NO.2研究內(nèi)容如何支持主題?文中提出大多數(shù)標記蛋白無法區(qū)分結(jié)合在賴氨酸殘基上N末端的胺和組胺，實驗通過跟蹤綠色熒光蛋白和FQ的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)在10min反應(yīng)下，標記分子和有多個標記物附著，即多重標記，導致譜帶展寬。層次邏輯

NO.3層次&邏輯開頭--摘要：介紹了文章的基本內(nèi)容介紹了實驗研究的背景知識（如毛細管電泳，熒光標記以及它們可能出現(xiàn)的誤差）引出論文的關(guān)鍵詞和大概內(nèi)容敘述實驗的過程與數(shù)據(jù)對數(shù)據(jù)進行分析和討論例舉本文得到的肯定，增強文章的說服力NO.3層次&邏輯

文章脈絡(luò)清晰，邏輯清楚。

研究方法④NO.4研究方法

熒光標記通常用于提高毛細管電泳蛋白質(zhì)分析的靈敏度。然而，與天然蛋白質(zhì)的吸收檢測法比較，柱前標簽經(jīng)常導致不良的電泳分辨率。普遍認為，這一峰展寬來自多個蛋白質(zhì)標記。大多數(shù)標簽反應(yīng)依賴于攻擊伯胺的試劑。這些試劑不能有效區(qū)分結(jié)合在賴氨酸殘基上的N末端胺和其他區(qū)胺。標簽通常可能會去完成一個產(chǎn)生復雜混合物的標記反應(yīng)，使得蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化，然后異構(gòu)反應(yīng)產(chǎn)物有不同的遷移率，在電泳過程中蛋白質(zhì)能帶增寬。NO.4研究方法

為證明文章所述，通過控制變量來進行試驗。NO.4研究方法

1、用5mM硼酸鹽和3.7*10-5M溶解的GFP、1.5mm氰化鈉加入100nmol干FQ配成10微升，分別進行三組然后室溫孵化1、5、10分鐘。2、立即稀釋4個數(shù)量級，以熄滅這個反應(yīng)。3、在加上無處理GFP共四種溶液通過氬離子激光然后通過帶有硼酸緩沖液未涂覆的毛細管的毛細管帶電泳分析。4、進行分析圖譜證明本文觀點

分析實驗數(shù)據(jù)⑤NO.5分析實驗數(shù)據(jù)運用FQ標記的蛋白，通過不同反應(yīng)時間（分別為1min，5min，10min）的光譜圖可知，1min時，分出五個峰，其他時間峰聚集在一起，沒有分析意義。在一分鐘的光譜圖中，還檢測發(fā)現(xiàn)檢測物流動性與標記物數(shù)量呈線性負相關(guān)。NO.5分析實驗數(shù)據(jù)綜上，得到兩點結(jié)論:一、物質(zhì)敷浴的時間是導致峰變寬的一個因素，此次實驗中一分鐘時最佳敷浴時間。二、標記物的數(shù)量會影響蛋白質(zhì)數(shù)量的檢測，是導致峰帶變寬又一因素

存在不足⑥NO.6存在不足1、沒有給出有效解決熒光標記蛋白的多重附著導致峰展寬的辦法。2、用了單一的FQ染色而沒有對其他標記物進行考慮和探究。

基本原理

遷移時間：HPCE具有電化學的特性和色譜分析的特性有關(guān)色譜理論均適用V：外加電壓；L：毛細管總長度；μapp：表觀淌度；

Ld：毛細管有效長度；分離效率（理論塔板數(shù)N）在空心HPCE中，僅存在縱向擴散評價峰展寬（柱效）衡量CE系統(tǒng)性能N與E成正比，E越大，柱效越高由于溶質(zhì)在較高的電壓下，以較快的速度通過柱子，縱向擴散?。ò偃f）M↑，D↓，N↑HPCE適合于分離分析生物大分子（擴散系數(shù)?。╇娪咎识圈蘣p（electrophoreticmobility，遷移率）：單位電場下離子的電泳速度表述物質(zhì)電泳特性的參數(shù)，與粒子電荷、大小、介質(zhì)粘度等有關(guān)分離度影響分離度的主要因素；工作電壓；毛細管有效長度與總長度比Ld/L；表觀淌度差。分離度可按譜圖直接由下式計算：

反應(yīng)條件

FQ:FQ用來做什么？檢測蛋白質(zhì)時大多需要衍生FQ是一種用于標記蛋白質(zhì)的化學物質(zhì)文獻針對FQ對熒光蛋白（GFP）的標記進行研究FQ如何標記GFP？＋FQ與氨基酸的反應(yīng)實際是與伯胺的反應(yīng)一個蛋白質(zhì)分子中存在伯胺基團有哪些？蛋白質(zhì)中除N端伯胺外還存在大量賴氨酸殘基

從而使標記反應(yīng)可能發(fā)生賴氨酸的ε-氨基一個N端的伯胺+20個賴氨酸殘基對于GFP來說238個氨基酸FQ如何標記GFP？如果標記GFP中所有的伯胺基團？理論上可行而且如果能同時快速標記所有就不會存在展寬嚴重問題但實際這實際非常復雜在賴氨酸上百個的蛋白質(zhì)中這種方法難度太大無法做到只標記一個或幾個伯胺基團？產(chǎn)物會非常多N個標記位點會產(chǎn)生2n-1種標記產(chǎn)物在電泳時自然泳動速度有差異譜帶展寬非常嚴重不確定性?。?！FQ+蛋白質(zhì)→FQ蛋白質(zhì)復合物FQ蛋白質(zhì)復合物+FQ→2FQ蛋白