標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 34777-2017 中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品殘留DNA檢測(cè) 熒光定量PCR法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范使用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)由中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系生產(chǎn)的生物制品中可能存在的宿主細(xì)胞DNA殘留量的方法。該標(biāo)準(zhǔn)適用于采用CHO細(xì)胞作為宿主細(xì)胞生產(chǎn)重組蛋白、抗體等生物制品過程中產(chǎn)生的最終產(chǎn)品或中間產(chǎn)物中的殘留DNA含量測(cè)定。

標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了實(shí)驗(yàn)所需材料與設(shè)備，包括但不限于：樣品處理所需的試劑耗材；用于提取DNA的試劑盒；熒光定量PCR儀及其配套軟件；以及特異性針對(duì)CHO細(xì)胞基因組DNA設(shè)計(jì)的引物和探針等。此外，還提供了具體的實(shí)驗(yàn)步驟，如樣本前處理、DNA提取純化、熒光定量PCR反應(yīng)體系建立及循環(huán)條件設(shè)定等內(nèi)容，并強(qiáng)調(diào)了每一步操作中需要注意的關(guān)鍵點(diǎn)以確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

對(duì)于質(zhì)量控制方面，《GB/T 34777-2017》規(guī)定了陽性對(duì)照品、陰性對(duì)照品以及內(nèi)參的選擇要求，同時(shí)給出了最低檢出限、線性范圍、精密度和特異性等方面的性能指標(biāo)。通過這些措施保證了不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果的一致性和可靠性。

最后，標(biāo)準(zhǔn)還介紹了數(shù)據(jù)處理方法，如何根據(jù)Ct值計(jì)算出樣品中CHO細(xì)胞DNA的具體濃度，并對(duì)可能出現(xiàn)的問題提供了解決方案。這為從事相關(guān)領(lǐng)域研究和技術(shù)人員提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)，有助于提高我國在生物制藥行業(yè)內(nèi)的產(chǎn)品質(zhì)量控制水平。


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  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實(shí)施
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文檔簡介

ICS07080

A40.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34777—2017

中國倉鼠卵巢CHO細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品

()

殘留DNA檢測(cè)熒光定量PCR法

DetectionofresidualDNAinbiologicalproductwhichexpressedfrom

ChinesehamsterovarCHOcell—

y()

Fluorescentquantitativepolymerasechainreactionassay

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

中國倉鼠卵巢CHO細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品

()

殘留DNA檢測(cè)熒光定量PCR法

GB/T34777—2017

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

201711

*

書號(hào)

:155066·1-58352

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T34777—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位信達(dá)生物制藥蘇州有限公司中國測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所

:()、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人孫左宇周李華李雪峰黃曉剛袁志軍郭燕紅

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T34777—2017

中國倉鼠卵巢CHO細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品

()

殘留DNA檢測(cè)熒光定量PCR法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了檢測(cè)殘留宿主的熒光定量法

DNAPCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于中國倉鼠卵巢細(xì)胞宿主細(xì)胞系表達(dá)的生物制品的殘留宿主的檢測(cè)

CHO()DNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

Ct值cyclethreshold

每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

中國倉鼠卵巢

CHO:(ChineseHamsterOvary)

5原理

以真核細(xì)胞基因組中具有高拷貝數(shù)的為目的基因設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增該基因的引

16SrRNA,PCR

物包括正向引物和反向引物

,:ForwardPrimer(5'-CCAGGCATTGGTGGCAC-3'):ReversePrimer

(5'-AGACAGGGTTTCTCTGT-3')。

采用熒光定量法采集熒光繪制出的擴(kuò)增曲線值與擴(kuò)增體系中起

SYBRPCR(FQ-PCR),PCRCt,

始目的基因模板的對(duì)數(shù)值呈反比以起始模板對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)值為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

,DNA,Ct,。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品的殘留量從而達(dá)到定量檢測(cè)樣品殘留的含量目的

DNA,DNA。

6儀器設(shè)備

61熒光定量儀含有熒光染料檢測(cè)通道

.PCR:SYBR。

62紫外可見分

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