標準解讀

《GB/T 35911-2018 偽狂犬病病毒熒光PCR檢測方法》是一項國家標準，旨在提供一種用于檢測動物樣本中偽狂犬病病毒（PRV）核酸的方法。該標準詳細規(guī)定了使用熒光定量聚合酶鏈反應技術進行PRV核酸檢測的操作流程、試劑要求、儀器設備配置以及結果分析與報告等內容。

根據(jù)標準，首先需要準備相應的實驗材料和試劑，包括但不限于DNA提取試劑盒、Taq酶混合液、特異性引物及探針等，并確保所有使用的試劑都在有效期內且按照制造商提供的說明正確儲存。接著，從疑似感染或攜帶PRV的動物體內采集樣品，如血液、組織液或其他體液等，并通過適當?shù)姆椒◤闹刑崛〕隹侱NA作為后續(xù)PCR擴增的目標模板。

在正式開始PCR反應之前，應先設置好對照組以驗證整個實驗系統(tǒng)的有效性，通常包括陽性對照、陰性對照以及內參對照等。隨后，將待測樣品與上述已準備好的各種成分按一定比例混合，在特定條件下進行循環(huán)加熱降溫處理，促使目標序列得到指數(shù)級放大。此過程中利用熒光標記探針對產物進行實時監(jiān)測，從而實現(xiàn)對PRV核酸的存在與否及其含量水平的準確判斷。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T35911—2018

偽狂犬病病毒熒光PCR檢測方法

Real-timePCRmethodfordetectionofpseudorabiesvirus

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T35911—2018

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業(yè)部提出

。

本標準由全國動物衛(wèi)生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所中華

:、、

人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學研究院湖南圣湘生物科技有限公司

、、。

本標準主要起草人張強童光志李健熊煒趙和平李樹清王艷李國新楊忠蘋花群義林穎崢

:、、、、、、、、、、、

王巧全蔡開妹喻正軍吳紹強林祥梅

、、、、。

Ⅰ

GB/T35911—2018

偽狂犬病病毒熒光PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了偽狂犬病病毒熒光檢測的操作方法

PCR。

本標準適用于偽狂犬病病毒核酸檢測

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

豬常溫精液生產與保存技術規(guī)范

GB/T25172

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

熒光熒光聚合酶鏈式反應

PCR(real-timepolymerasechainreaction)

Ct值每個反應管內的熒光信號量達到設定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

(cyclethreshold)

脫氧核糖核酸

DNA(deoxyribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶Taq

DNA(DNApolymerase)

緩沖液緩沖液

TETris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)

偽狂犬病病毒

PRV(pseudorabiesvirus)

4儀器

41熒光檢測儀

.PCR。

42高速臺式冷凍離心機可控溫至離心速度可達以上

.:4℃、12000r/min。

43組織研磨器或者研缽

.。

44普通冰箱

.:2℃~8℃。

45普通冰柜以下

.:-20℃。

46超低溫冰箱可控溫至以下

.:-70℃。

47微量移液器并

.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1000μL,

配備與移液器匹配的吸頭

。

48高壓滅菌鍋

.。

5耗材

51

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