GB/T 41799-2022限制性核酸內切酶雜質檢測方法

ICS07080

CCSC.27

中華人民共和國國家標準

GB/T41799—2022

限制性核酸內切酶雜質檢測方法

Assaymethodofrestrictionendonucleaseimpurity

2022-10-12發(fā)布2023-05-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標準化管理委員會

GB/T41799—2022

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術語和定義

3………………1

原理

4………………………1

試劑或材料

5………………1

儀器設備

6…………………2

試驗步驟

7…………………2

附錄規(guī)范性瓊脂糖凝膠電泳

A()………………………4

Ⅰ

GB/T41799—2022

前言

本文件按照標準化工作導則第部分標準化文件的結構和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任

。。

本文件由全國工具酶標準化工作組提出并歸口

(SAC/SWG11)。

本文件起草單位福建南生科技有限公司通用生物安徽股份有限公司夏禾深圳生物技術有

:、()、()

限公司廈門銀祥集團有限公司蘇州坤琪生物科技有限公司廈門中集信檢測技術有限公司上海鷹姿

、、、、

生命科技有限公司雷谷廈門生物醫(yī)藥有限公司北京化工大學山東大學安琪酵母股份有限公司

、()、、、、

復旦大學武漢科技大學北京中天標科標準化技術研究院有限公司廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限

、、、

公司

。

本文件主要起草人黃發(fā)燦雍金貴鄭登忠張志剛陳勁春陳秀蘭江鋒趙毅鐘江朱力姚娟

:、、、、、、、、、、、

楊忠華李超許文來王永成

、、、。

Ⅲ

GB/T41799—2022

引言

限制性核酸內切酶是一類識別雙鏈中特定核苷酸序列的水解酶以內切方式水解

DNADNA,

產生和末端限制性核酸內切酶的作用底物是脫氧核糖核酸其他核酸

DNA,5'-PO33'-OH。(DNA),

內切酶或核酸外切酶的污染會導致底物的降解或消失降低其他核酸內切酶或核酸外切酶的污染是限

,

制性核酸內切酶最重要的質量保證制定限制性核酸內切酶雜質檢測方法國家標準用以推動該類工

。,

具酶的產業(yè)化對于限制性核酸內切酶的生產和使用具有重要的意義

,。

Ⅳ

GB/T41799—2022

限制性核酸內切酶雜質檢測方法

1范圍

本文件描述了限制性核酸內切酶中污染其他核酸內切酶或核酸外切酶等雜質的檢測方法

。

本文件適用于限制性核酸內切酶雜質的檢測

。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件

。

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

限制性核酸內切酶restrictionendonuclease

以內切方式水解產生和末端識別雙鏈中特定核苷酸序列的水

DNA,5'-PO33'-OH,DNADNA

解酶

。

32

.

雜質impurity

影響核酸底物存在的其他核酸內切酶和核酸外切酶

。

4原理

由于無Bam酶切位點有個Bam酶切位點完全酶解后產生條譜

ФX174DNAHI,λDNA5HI,6

帶它們的大小及核苷酸順序均為已知樣品中無其他核酸內切酶污染酶解產物在電泳板上形成的譜

,。,

帶與酶解時間過長用酶過多無關

、。

由于Bam切開雙鏈產生一對黏性末端其各有個堿基失去互補堿基形成突出單鏈其

HIDNA,5,

易受核酸外切酶作用丟失若干個堿基乃至形成平末端如果將此連接后再用Bam酶切結果

;DNAHI,

是無法切開如果該位點是在外顯子區(qū)或編碼區(qū)即意味其對應的氨基酸序列發(fā)生變化乃至某些生物

。,,

性狀發(fā)生改變例如質粒所含Bam識別位點是在其抗四環(huán)素基因上如果使用被核酸外

。pBR322HI,

切酶污染的樣品Bam過量長時程切割然后再連接閉環(huán)后重新轉化受體菌該菌在含四環(huán)

HIpBR322,,

素培養(yǎng)基上無法生長而沒有這樣酶切的