第三代基因測(cè)序原理及應(yīng)用

第三代測(cè)序原理現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五什么是DNA？DNA是英文Deoxyribonucleicacid的縮寫，中文含義為脫氧核糖核酸。

脫氧核糖核苷酸的類型：

腺嘌呤（A）=胸腺嘧啶（T）胞嘧啶（C）=鳥嘌呤（G）DNA分子的排列順序是可以檢測(cè)

的，從而可以解讀遺傳信息，即測(cè)序。DNA結(jié)構(gòu)（視頻）現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五什么是基因？

基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA分子片段，由許多脫氧核苷酸按照一定的

堿基順序構(gòu)成的長(zhǎng)鏈聚合物。

基因身高膚色智商胖瘦現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五基因組：一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的全套染色體為一個(gè)基因組，或是一個(gè)細(xì)胞中的全部DNA為一個(gè)基因組什么是基因組？

基因組>染色體>基因現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五測(cè)序技術(shù)發(fā)展史現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五第一代測(cè)序原理-Sanger測(cè)序法雙脫氧鏈終止法（Sanger法）：

1977年，英國(guó)人FredSanger發(fā)現(xiàn)，如果在DNA復(fù)制過程中摻入ddNTP，就會(huì)產(chǎn)生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過電泳按長(zhǎng)度分辨。不同末端終止DNA鏈的長(zhǎng)度是由摻入到新合成鏈上隨機(jī)位置的ddNTP決定的?，F(xiàn)在是6頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五復(fù)制叉（Replicationfork）DNAligase：DNA連接酶；DNAgyrase：DNA旋轉(zhuǎn)酶；DnaBhelicase：解旋酶SSB：?jiǎn)捂溄Y(jié)合蛋白；現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五DNA連接酶（DNAligase）功能：連接DNA鏈3‘-OH末端和另一DNA鏈的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連成完整的鏈。DNA復(fù)制現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五Sanger測(cè)序法現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五第一代測(cè)序成果：人類基因組2001年2月份同時(shí)發(fā)表，從此有了人類基因組模板?，F(xiàn)在是10頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五ATCGAACTTCCATTGCACCAATATAGGTACGTAAATCGAACTTCCTTGCACCTATATAGGTGTACGTAA

參考序列：測(cè)序所得序列：堿基缺失堿基突變堿基重復(fù)特點(diǎn)：測(cè)序長(zhǎng)度700-1000bp；通量小，一次96個(gè)樣本，每個(gè)樣本1條序列臨床應(yīng)用：?jiǎn)位虿z測(cè)，如血友病、白化病、地中海貧血等現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五第二代測(cè)序原理-高通量測(cè)序NextSeq500–靈活通量廢液槽緩沖液化學(xué)試劑FlowCell現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五CAGTCATCACCTAGCGTA5’GTGTCAGTCAGTCA3’5’測(cè)序基礎(chǔ)原理：邊合成邊測(cè)序(SBS)

如何理解邊合成邊測(cè)序？用不同顏色的熒光標(biāo)記四種dNTP，在聚合酶作用下，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（A與T配對(duì)，C與G配對(duì)）進(jìn)行鏈的延伸，每延伸一個(gè)堿基，堿基釋放熒光。通過光學(xué)系統(tǒng)捕獲熒光，從而獲得堿基信息?，F(xiàn)在是13頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五MiSeq建庫(kù)2HOURSCluster1HOURS測(cè)序4HOURS信息分析0.5

HOURS一體化進(jìn)行：上樣后，測(cè)序儀自動(dòng)化完成擴(kuò)增和測(cè)序二代測(cè)序法現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五第三代測(cè)序原理-單分子測(cè)序第三代測(cè)序方法與現(xiàn)在的測(cè)序技術(shù)相比之下的優(yōu)點(diǎn)：1）更高的通量；2）更短的測(cè)序時(shí)間；3）更長(zhǎng)的讀取長(zhǎng)度；4）更高的精確性，可以檢測(cè)出極少的變異；5）需要很少的起始量；6）低成本?，F(xiàn)在是18頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五HelicoBioScience單分子測(cè)序技術(shù)現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五PacificBioscienceSMRT技術(shù)現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五OxfordNanoporeTechnologies的納米孔單分子測(cè)序技術(shù)現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有22頁(yè)\編輯于星期五第三代測(cè)序原理-單分子測(cè)序第三代測(cè)序方法與現(xiàn)在的測(cè)序技術(shù)