一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法

一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法專利01專利背景權利要求榮譽表彰發(fā)明內(nèi)容實施方式目錄03050204基本信息《一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法》是廣州科方生物技術股份有限公司于2016年10月31日申請的專利，該專利的公布號為CNA，授權公布日為2017年5月10日，發(fā)明人是孫子洪、何明深。該發(fā)明涉及生物技術領域。《一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法》包括盒體和設置于盒體內(nèi)的阻斷劑，所述阻斷劑包括生物阻斷劑和化學阻斷劑，所述生物阻斷劑和化學阻斷劑分開設置于所述盒體中。該發(fā)明還公開了該阻斷劑試劑盒的使用方法。該發(fā)明的用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，充分發(fā)揮了生物阻斷劑和化學阻斷劑在不同濃度的內(nèi)源干擾因素下的阻斷作用，能有效預防、控制樣本中內(nèi)源干擾因素對免疫層析檢測的影響，提高免疫層析定量檢測結果的準確性，具有更好的適用性。2021年11月，《一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法》獲得第八屆廣東專利獎優(yōu)秀獎。專利背景專利背景隨著社會的進步，醫(yī)學的發(fā)展，醫(yī)院功能任務發(fā)生了重大的改變，由過去單純的治療型，轉向集預防、保健、治療和康復等多項功能于一體的綜合型，為社會提供全方位的優(yōu)質(zhì)服務。醫(yī)院工作也從單一的院內(nèi)醫(yī)療拓展到院外社區(qū)，甚至是邊遠山區(qū)等更廣范圍。為了更好地實現(xiàn)醫(yī)院的職能，由此需要準確，靈敏，便捷的即時檢驗測試（Pointofcaretest，POCT）。免疫層析法（Immunochromatography）是八十年代初發(fā)展起來的一種新型的免疫診斷技術。其檢測原理是借助毛細作用，樣本在分析膜上沿特定方向流動，通過免疫標記技術，實現(xiàn)對樣本中待測物的標記，并結合在特定檢測線上，實現(xiàn)對標本的快速檢測。免疫層析技術融合了傳統(tǒng)的免疫分析技術、層析技術、單克隆抗體技術和免疫標記技術的優(yōu)點，不僅具有良好的靈敏度和特異性，而且無需復雜的分離洗滌步驟和昂貴的檢測儀器，操作簡單，廉價易得。因此，近年來，免疫層析技術在即時檢驗方面得到了飛速的發(fā)展，并呈現(xiàn)出良好的發(fā)展前景。與傳統(tǒng)的免疫分析技術一樣，免疫層析檢測也易于受到可能存在與測試樣本的各種因素的干擾。而隨著單克隆抗體技術的發(fā)展和免疫學檢測技術的發(fā)展，免疫層析檢測方法更加靈敏，因此溶血、黃疸和脂血的干擾顯得微乎其微。相對而言，包括嗜異性抗體（HA）、人抗動物抗體（HAAA）、類風濕因子（RF）以及自身抗體等因素的內(nèi)源干擾在免疫檢驗中帶來的影響越發(fā)引人重視。據(jù)研究證實，在健康人群中，約有3%-15%的人體含有內(nèi)源干擾因素。在飼養(yǎng)寵物的人群和接受過抗體治療的人群中，其比例更加高?？偠灾?，內(nèi)源干擾是造成醫(yī)學免疫檢驗結果不確定性的重要因素之一。發(fā)明內(nèi)容專利目的有益效果技術方案發(fā)明內(nèi)容專利目的為了克服2016年10月之前技術的不足，《一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法》的目的在于提供一種用于免疫層析的阻斷劑試劑盒，該阻斷劑試劑盒充分發(fā)揮了生物阻斷劑和化學阻斷劑在不同濃度的內(nèi)源干擾因素下的阻斷作用，能有效預防、控制樣本中內(nèi)源干擾因素對免疫層析檢測的影響，提高免疫層析定量檢測結果的準確性，具有更好的適用性。該發(fā)明的另一目的在于提供該阻斷劑試劑盒的使用方法。

技術方案《一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法》所述阻斷劑試劑盒，包括盒體和設置于盒體內(nèi)的阻斷劑，所述阻斷劑包括生物阻斷劑和化學阻斷劑，所述生物阻斷劑和化學阻斷劑分開設置于所述盒體中。優(yōu)選的，所述生物阻斷劑包括如下組分：第一緩沖溶液5-200毫摩爾/升，NaCl150-1500毫摩爾/升，第一防腐劑0.05-0.1wt%，動物免疫蛋白100-500毫克/毫升，小牛血清5-20vol%。優(yōu)選的，所述化學阻斷劑包括如下組分：第二緩沖溶液5-200毫摩爾/升，NaCl150-1500毫摩爾/升，第二防腐劑0.05-0.1wt%，PEG0.05-10.0wt%，巰基試劑0.01-0.5摩爾/升和蛋白變性劑0.05-1.0wt%，所述PEG的分子量為2000-。優(yōu)選的，所述動物免疫蛋白為小鼠IgG、小鼠IgM、兔IgG、山羊IgG、牛IgG、馬IgG中的至少一種。優(yōu)選的，所述水溶性PEG為PEG8000、PEG6000、PEG4000、PEG2000、PEG1500中的至少一種。優(yōu)選的，所述巰基試劑為β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇。優(yōu)選的，所述蛋白變性劑為十二烷基硫酸鈉、尿素、鹽酸胍中的至少一種。優(yōu)選的，所述第一防腐劑和第二防腐劑均為疊氮化鈉和Proclin300中的一種。優(yōu)選的，所述第一緩沖溶液和第二緩沖溶液為三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液（Tris-HCl），磷酸鹽緩沖溶液（PBS）和3-（N-嗎啉基）丙磺酸鹽緩沖溶液（MOPS）中的一種，所述第一緩沖溶液和第二緩沖溶液的pH值均為7.4-7.6。有益效果相比2016年10月之前的技術，《一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒及其使用方法》的有益效果在于：1.該發(fā)明的用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，包括生物阻斷劑和化學阻斷劑兩個部分，兩部分分開有利于高濃度阻斷試劑的長期穩(wěn)定。使用時，通過把生物阻斷劑和化學阻斷劑按照特定的比例加入樣本稀釋液或樣本墊處理液中使用，能有效預防、控制樣本中內(nèi)源干擾因素對免疫層析檢測的影響，提高免疫層析定量檢測結果的準確性。2.該發(fā)明的復合阻斷劑中，化學阻斷劑主要針對過高濃度的內(nèi)源干擾因素，一方面通過沉聚作用將過高濃度的內(nèi)源干擾因素控制到一定范圍，也就是生物阻斷劑能充分阻斷干擾的范圍內(nèi)，避免出現(xiàn)由于個別標本中內(nèi)源干擾因素過高而導致阻斷失效的情況。另一方面，內(nèi)源干擾因素多為多重特異性抗體，相對于分析用單克隆抗體，其結合能力較弱。基于兩者親和力強弱的差異，通過在化學阻斷劑中加入適量的蛋白變性劑，可以在保證試劑檢測能力的前提下，減小內(nèi)源干擾因素對免疫層析檢測的影響。3.該發(fā)明的復合阻斷劑中，生物阻斷劑包含了針對嗜異性抗體、抗動物抗體、類風濕因子等干擾的多種動物免疫蛋白物質(zhì)，對常規(guī)含量的內(nèi)源干擾因素具有良好的阻斷效果，能有效減少由于內(nèi)源干擾造成免疫層析檢測的假性結果。4.該發(fā)明復合阻斷劑廣泛適用于多種免疫層析檢測試劑，包括肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶MB、心肌肌鈣蛋白I、糖化血紅蛋白、降鈣素原、心型脂肪酸結合蛋白等項目的免疫層析檢測試劑。權利要求權利要求1.一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，包括盒體和設置于盒體內(nèi)的阻斷劑，其特征在于，所述阻斷劑包括生物阻斷劑和化學阻斷劑，所述生物阻斷劑和化學阻斷劑分開設置于所述盒體中。2.如權利要求1所述的用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，其特征在于，所述生物阻斷劑包括如下組分：第一緩沖溶液5-200毫摩爾/升，NaCl150-1500毫摩爾/升，第一防腐劑0.05-0.1wt％，動物免疫蛋白100-500毫克/毫升，小牛血清5-20vol％。3.如權利要求1所述的用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，其特征在于，所述化學阻斷劑包括如下組分：第二緩沖溶液5-200毫摩爾/升，NaCl150-1500毫摩爾/升，第二防腐劑0.05-0.1wt％，PEG0.05-10.0wt％，巰基試劑0.01-0.5摩爾/升和蛋白變性劑0.05-1.0wt％，所述PEG的分子量為2000-。4.如權利要求2所述的用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，其特征在于，所述動物免疫蛋白為小鼠IgG、小鼠IgM、兔IgG、山羊IgG、牛IgG、馬IgG中的至少一種；所述第一防腐劑為疊氮化鈉或Proclin300；所述第一緩沖溶液為三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液，磷酸鹽緩沖溶液和3-（N-嗎啉基）丙磺酸鹽緩沖溶液中的一種。5.如權利要求3所述的用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，其特征在于，所述PEG為PEG8000、PEG6000、PEG4000、PEG2000、PEG1500中的至少一種；所述巰基試劑為β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇；所述蛋白變性劑為十二烷基硫酸鈉、尿素、鹽酸胍中的至少一種。實施方式實施方式以下實施方式中，所述小牛血清購自gibco有限公司。一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，包括盒體和設置于盒體內(nèi)的阻斷劑，所述阻斷劑包括生物阻斷劑和化學阻斷劑，所述生物阻斷劑和化學阻斷劑分開設置于所述盒體中。其中生物阻斷劑和化學阻斷劑中各成分的含量如表1所示。一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，一種用于免疫層析測定的阻斷劑試劑盒，包括盒體和設置于盒體內(nèi)的阻斷劑，所述阻斷劑包括生物阻斷劑和化學阻斷劑，所述生物阻斷劑和化學阻斷劑分開設置于所述盒體中。其中生物阻斷劑和化學阻斷劑中各成分的含量如表2所示。實驗例1：用于心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的熒光免疫層析定量測定選取8例已證實存在明顯內(nèi)源干擾的人血清標本（實驗樣本，標本號1-8）以及2例已證實無明顯內(nèi)源干擾的人血清樣本（對照樣本，標本號9-1