器官移植及免疫學(xué)檢驗(yàn)（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

第二十七章器官移植及免疫學(xué)檢驗(yàn)

目的：

救治末期器官衰竭、惡性血液病、腫瘤以及某些遺傳病。要求：

盡可能讓移植物能在受者體內(nèi)生存或暫存常時(shí)間。問題：排斥反應(yīng)。移植的目的和要求腿移植油畫器官移植的歷史——第一次成功1954年12月23日，23歲的同卵雙生的赫里克兄弟，進(jìn)行了成功的腎移植手術(shù)。諾貝爾獎(jiǎng)：約瑟夫·默里JosephE.Murray(1/2)NobelPrizeinPhysiologyorMedicine1990Discoveriesconcerningorgantransplantationinthetreatmentofhumandisease

與移植免疫發(fā)展有關(guān)的諾貝爾獲獎(jiǎng)?wù)邔?shí)施第一例人同卵孿生兄弟間的腎移植如果采用藥物抑制免疫系統(tǒng)，在非親緣關(guān)系的人之間進(jìn)行器官移植是可能的In1954,thefirstsuccessfulhumankidneytransplantwasperformedbetweentwinsinBoston.Transplantswerepossibleinunrelatedpeopleifdrugsweretakentosuppressthebody'simmunereaction器官移植的歷史臨床發(fā)展階段1963年，美國的醫(yī)學(xué)家進(jìn)行人類歷史上的第一例肝移植1963年，美國另一位醫(yī)生做了第一例肺移植1967年，南非完成了第一例心臟移植（存活18天）1968年，美國幾位科學(xué)家又進(jìn)行了第一例心肺聯(lián)合移植截止到2009年底全球器官移植已突破兩百萬例，包括腎、肝、心、肺、骨髓、小腸、關(guān)節(jié)、甲狀旁腺、胰腺等33種器官或組織。我國器官移植始于60年代，目前我國器官移植數(shù)量居世界第2位。腎移植1960年吳階平院士率先實(shí)行第一例腎移植，腎移植5萬多例，目前每年完成超過5000例，數(shù)量僅次于美國；截止07年我國肝移植14613多例。心臟移植取得突破，還開展了胰腎聯(lián)合移植、肝腎聯(lián)合移植、心肺聯(lián)合移植等高難度手術(shù)2005年12月21日，衛(wèi)生部正式公布《人體器官移植技術(shù)臨床應(yīng)用管理暫行辦法》。器官移植已成為治療各種器官和造血系統(tǒng)終末期疾病

的重要手段之一

指應(yīng)用異體或自體正常器官、組織、細(xì)胞置換病變或功能缺損的器官、組織、細(xì)胞，以維持和重建機(jī)體生理功能的治療方法。第一節(jié)器官移植的基本知識一、移植的概念移植物（graft）：被移植的細(xì)胞、組織或器官供者(donor)

：提供移植物的個(gè)體受者（recipient）或宿主（host）：接受移植物的個(gè)體自體移植（autograft）同系移植/同基因移植（syngraft）同種（異體/異基因）移植（allograft）異種移植（xenogeneicgraft）二、移植的類型自體移植(autologoustransplantation)

同系移植(isograft)同卵雙生間、純系動物間的移植同種異體移植(isogeneictransplantation)同種間不同個(gè)體的移植，具遺傳基因、MHC差異異種移植(heterogoustransplantation)異種動物間的移植：種間差異性更大移植排斥反應(yīng)（graftrejection）

指移植后，受者免疫系統(tǒng)識別移植物抗原或移植物中免疫細(xì)胞識別受者抗原，產(chǎn)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致移植物功能喪失或受者機(jī)體損害的過程。三、移植排斥反應(yīng)有關(guān)排斥反應(yīng)的研究醫(yī)學(xué)免疫學(xué)器官移植難題――免疫排斥反應(yīng)的發(fā)現(xiàn)彼得·梅達(dá)沃的皮膚移植實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了在組織器官移植過程中的確存在免疫排斥。移植排斥反應(yīng)特點(diǎn)：區(qū)分“自己”與“非己”特異性記憶性移植排斥反應(yīng)——特異性免疫應(yīng)答

異種之間的移植無一例外地要失??；同一種系內(nèi)不相關(guān)的個(gè)體之間的移植常常要失?。煌N異體的受體對首次移植物排斥時(shí)間較長，但再次接受同一供體的移植物，則迅速被排斥；自體移植總是能成功；受體與供體間的血緣關(guān)系愈近，移植愈可能成功。移植排斥反應(yīng)的規(guī)律

主要組織相容性抗原（MHA）

次要組織相容性抗原（mHA）

ABO血型抗原系統(tǒng)組織特異性抗原（一）誘導(dǎo)移植排斥反應(yīng)的抗原1、主要組織相容性抗原（MHA）

進(jìn)行個(gè)體移植是，引起移植排斥反應(yīng)最強(qiáng)的是HLA。在三類HLA中，I、II類分子是引發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原，尤其是HLA－DR位點(diǎn)的抗原分子。HLA-DR、HLA-A、HLA-B3.移植物存活與HLA配型的關(guān)系供、受者HLA-A和HLA-B相配位點(diǎn)與移植物存活率正相關(guān)；供、受者HLA-DR/Q位點(diǎn)相配更重要：HLA-DR和HLA-DQ基因有很強(qiáng)的連鎖不平衡；2、次要組織相容性抗原（mHA）

排斥反應(yīng)的程度輕，速度慢

性染色體編碼的mHA：Y染色體上。女性受者對

男性供者的排斥

常染色體編碼的mHA：

主要和次要組織相容性抗原引起排斥反應(yīng)3、人類紅細(xì)胞血型抗原：

分布于幾乎所有人體組織器官的血管內(nèi)皮細(xì)胞表面

ABO血型系統(tǒng)(供受者必須一致?。?/p>

Rh血型系統(tǒng)4、組織特異性抗原血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原、腎特異性抗原、肝臟特異性抗原、骨髓特異性抗原等。極強(qiáng)的抗原性同種排斥反應(yīng)主要抗原mHC引起較弱的排斥反應(yīng)，H-Y抗原內(nèi)皮細(xì)胞抗原、皮膚SK抗原等。同種異基因移植排斥反應(yīng)的抗原mHC組織特異性抗原MHC紅細(xì)胞和肝腎組織及血管內(nèi)皮細(xì)胞血型抗原引起同種移植排斥反應(yīng)的抗原同種異基因抗原的識別2.間接識別途徑indirectrecognition1.直接識別途徑directrecognition（二）T細(xì)胞識別同種異型抗原的機(jī)制受者T細(xì)胞識別供者APC所提呈的同種異型MHC抗原。1、直接識別途徑過客白細(xì)胞（passengerleukocyte）：存在于移植物中的供者APC和淋巴細(xì)胞。過客白細(xì)胞中的DC是直接識別途徑的主要APC。直接識別的特點(diǎn)1.速度快、強(qiáng)度大，在急性排斥反應(yīng)中起主要作用。2.參與的T細(xì)胞約占總數(shù)的1%－10%。3.對免疫抑制藥物敏感。受者APC對供者M(jìn)HC抗原進(jìn)行處理，并提呈給受者T細(xì)胞，使之活化，引起排斥反應(yīng)。2、間接識別途徑受者APC介導(dǎo)間接識別途徑。1.引起的排斥反應(yīng)出現(xiàn)較晚，急性排斥中晚期和慢性排斥反應(yīng)中起主要作用。2.參與的T細(xì)胞約占總數(shù)的0.01%~0.1%。3.對免疫抑制藥相對不敏感。間接識別的特點(diǎn)

1．細(xì)胞免疫應(yīng)答效應(yīng)2.體液免疫應(yīng)答效應(yīng)3．非特異性免疫應(yīng)答效應(yīng)

（三）移植排斥反應(yīng)的效應(yīng)機(jī)制

供體移植物的抗原可被受體免疫系統(tǒng)識別，介導(dǎo)宿主抗移植物反應(yīng)（hostversusgraftrejection,HVGR），另一方面受者組織抗原也可刺激移植物中的免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，引起移植物抗宿主反應(yīng)（graftversushostrejection,GVHR)。

（四）移植排斥反應(yīng)的類型宿主抗移植物反應(yīng)(host-versus-graftReaction,HVGR)，見于一般器官移植，包括超急性、急性、慢性排斥反應(yīng)移植物抗宿主反應(yīng)(hraft-versus-hostReaction,GVHR)，主要發(fā)生在骨髓移植和其他免疫細(xì)胞移植根據(jù)排斥反應(yīng)發(fā)生的時(shí)間強(qiáng)度、發(fā)病機(jī)理、臨床表現(xiàn)及病理變化，分為：超急性排斥反應(yīng)急性排斥反應(yīng)慢性排斥反應(yīng)1、宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR）超急性排斥反應(yīng)（hyperacuterejection）：指移植器官與受者的血管接通后立即或1～2天內(nèi)發(fā)生的排斥反應(yīng)。見于：術(shù)前多次輸血長期血液透析再次移植的個(gè)體發(fā)生時(shí)間：移植器官與受者血管接通后數(shù)分鐘至1～2天內(nèi)發(fā)生。1.超急性排斥反應(yīng)

免疫學(xué)基礎(chǔ)：以體液免疫為主受者體內(nèi)預(yù)存的IgM抗體：ABO、血小板、HLA及VEC等；血型相配者由IgG介導(dǎo)；補(bǔ)體或后續(xù)活性物質(zhì)致血管內(nèi)皮損傷;病理變化

血管內(nèi)凝血缺血、變性和壞死應(yīng)避免，且可避免急性排斥反應(yīng)（acuterejection）：最常見的類型指在移植后數(shù)天至兩周左右出現(xiàn)的免疫排斥反應(yīng)，一旦發(fā)生進(jìn)展迅速

發(fā)生時(shí)間

移植后數(shù)天至2周左右出現(xiàn)，80%～90%發(fā)生于移植后一個(gè)月內(nèi)2.急性排斥反應(yīng)可使用免疫抵制劑免疫學(xué)基礎(chǔ)：以細(xì)胞免疫為主。CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)、CTL、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞及抗體。①移植物血管損傷針對血管內(nèi)皮細(xì)胞表面同種異型抗原的IgG抗體補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用②實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害CD4+Th1介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)CD8+Tc直接殺傷表達(dá)同種異型抗原的移植物細(xì)胞慢性排斥反應(yīng)（chronicrejection）：指發(fā)生于移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年的免疫排斥反應(yīng)

發(fā)生時(shí)間移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年發(fā)生病理變化：正常組織結(jié)構(gòu)的喪失和纖維化以及慢性血管病變：移植物內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞增生，血管硬化。3.慢性排斥反應(yīng)使用免疫抑制劑無效免疫學(xué)基礎(chǔ)：體液免疫和細(xì)胞免疫共同作用（具體尚不完全清楚）①急性排斥反應(yīng)細(xì)胞壞死的延續(xù)和結(jié)果②炎癥性CD4+T細(xì)胞/MΦ相關(guān)的慢性炎癥③反復(fù)多次抗體或細(xì)胞介導(dǎo)的內(nèi)皮損傷細(xì)胞損傷誘發(fā)持續(xù)分泌多種生長因子(如胰島素樣生長因子、血小板源性生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子等）導(dǎo)致血管壁增厚、間質(zhì)纖維化。④非免疫學(xué)因素誘發(fā)組織器官的退行性病變：局部缺血、再灌注損傷、免疫抑制劑毒副作用、感染、高血壓、糖尿病等。

移植排斥反應(yīng)的分類和特點(diǎn)類型反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)機(jī)制超急性術(shù)后數(shù)分鐘至幾小時(shí)受者體內(nèi)事先存在的天然抗體加急性1~5天T淋巴細(xì)胞急性7~14天T淋巴細(xì)胞慢性數(shù)月至數(shù)年抗體、補(bǔ)體、內(nèi)皮細(xì)胞增生

移植物抗宿主反應(yīng)（Graft-versus-hostreaction，GVHR）是由移植物中的抗原特異性淋巴細(xì)胞識別宿主組織抗原而發(fā)生的一種排斥反應(yīng)

發(fā)生條件①宿主與移植物之間組織相容性不合②移植物中含有足夠數(shù)量的免疫細(xì)胞③宿主處于免疫無能或免疫功能嚴(yán)重缺陷狀態(tài)移植物抗宿主病4.移植物抗宿主反應(yīng)GVHR發(fā)生情況一旦發(fā)生一般難以逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致移植失敗，嚴(yán)重?fù)p傷患者，甚至死亡

主要見于：骨髓移植（主要）、胸腺移植、脾移植、新生兒接受大量輸血

1.

供者T細(xì)胞識別宿主MHC，介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，并活化NK，Mφ等。2.細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡受者自身因素導(dǎo)致的細(xì)胞因子異常；供者T細(xì)胞被激活，分泌細(xì)胞因子；直接毒性+激活供者T淋巴細(xì)胞；GVHR發(fā)生機(jī)制3.移植物抗白血病反應(yīng)植物中供者免疫細(xì)胞向受者殘留的白血病細(xì)胞發(fā)動免疫攻擊，從而防止白血病的復(fù)發(fā)——GVHR的一種特殊類型。原因：

mHC

相對特異性的血細(xì)胞抗原白血病特異性抗原在白血病時(shí)增高的正常抗原1、急性GVHD供受者HLA不相配或未對受者進(jìn)行預(yù)防性處理時(shí)移植后數(shù)天，最遲在術(shù)后2個(gè)月內(nèi)即可發(fā)生皮膚、肝臟、腸道等多個(gè)靶器官上皮細(xì)胞的壞死皮膚瘙癢性斑丘疹、厭食、惡心、腹瀉、血清膽紅素增高等由移植物中成熟T細(xì)胞介導(dǎo)，也可能與NK細(xì)胞有關(guān)Acutegraft-versus-hostreactionwithvividpalmarerythema

移植物抗宿主病2、慢性GVHD一個(gè)或多個(gè)器官的纖維化和萎縮最終可導(dǎo)致所累及器官的功能喪失血清學(xué)分型細(xì)胞學(xué)分型基因分型

第二節(jié)組織配型及配型方法一、HLA分型（一）血清學(xué)分型：

補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗(yàn)：SD抗原HLA-ABCHLA-DRDQ原理：利用各種已知的HLA標(biāo)準(zhǔn)血清中的HLA抗體與待測淋巴細(xì)胞表面的HLA抗原結(jié)合，并激活補(bǔ)體，觀察細(xì)胞損傷效應(yīng)。技術(shù)內(nèi)容：分離待測淋巴細(xì)胞，與一系列已知抗HLA標(biāo)準(zhǔn)分型血清混合，抗體會特異性結(jié)合表達(dá)相應(yīng)HLA抗原的淋巴細(xì)胞，添加補(bǔ)體，在補(bǔ)體的作用下，引起細(xì)胞死亡，死亡的細(xì)胞被臺盼藍(lán)染色，而活細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整不著色，根據(jù)死亡細(xì)胞的百分比，判定其HLA的型別。記數(shù)、判斷結(jié)果。結(jié)果判斷讀數(shù)計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)死亡細(xì)胞（100%）計(jì)分臨床意義0未試驗(yàn)或無法計(jì)數(shù)0－101陰性11－202陰性可疑21－404陽性可疑41－806陽性反應(yīng)>808強(qiáng)陽性反應(yīng)（二）細(xì)胞學(xué)分型——LD抗原：HLA-D和DP

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)原理：兩個(gè)無關(guān)個(gè)體的淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)，可互相刺激，向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。這種反應(yīng)主要有HLA-D抗原的不同引起的。如果兩種淋巴細(xì)胞同型，就不發(fā)生轉(zhuǎn)化，否則就發(fā)生轉(zhuǎn)化?？赏ㄟ^形態(tài)學(xué)或3H-TdR滲入試驗(yàn)來檢測淋巴細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)度，從而判定其HLA型別。成熟（靜息）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞

雙向MLC—受、供體淋巴細(xì)胞混合體外培養(yǎng)，彼此作用，觀察細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞增殖。內(nèi)容—分離計(jì)數(shù)彼此淋巴細(xì)胞，共孵育，染色計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞。評價(jià)—用于移植前的交叉配合試驗(yàn)，但不能對HLA-D進(jìn)行進(jìn)一步分型。

單向MLC1)MLC——滴血認(rèn)親RFLP:限制性片段長度多態(tài)性分析PCR-SSOP：序列特異性寡核苷酸探針-PCRPCR-SSP：序列特異性引物-PCRPCR-SSCP：單鏈構(gòu)象特異性-PCRSBT分型法：基于序列的HLA分型法多熒光微珠免疫分析基因芯片（三）基因分型

不同個(gè)體間的HLA復(fù)合體存在核苷酸堿基序列的差異，這種差異造成限制性內(nèi)切酶識別位置及酶切位點(diǎn)數(shù)目的不同，用一組限制性內(nèi)切酶消化、識別、切割這些位點(diǎn)，產(chǎn)生數(shù)量和長度不一的DNA酶解片段，經(jīng)瓊脂糖電泳或用特異性探針與酶解片段進(jìn)行雜交即可確定HLA的基因型別。也可先對DNA片段進(jìn)行體外PCR擴(kuò)增，然后再進(jìn)行RFLP分析，即PCR-RFLP。PCR-RFLP

先對HLA基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后將擴(kuò)增片段轉(zhuǎn)移至NC膜或尼龍膜上，然后與用放射性核素或酶、地高辛等標(biāo)記的寡核苷酸探針進(jìn)行雜交，若待檢DNA與探針序列互補(bǔ)，則兩者結(jié)合，從而確定HLA的基因型別。PCR-SSOP

根據(jù)各型別HLA核苷酸堿基序列差異，設(shè)計(jì)出一套HLA等位基因的序列特異性引物，對待測DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因TaqDNA聚合酶沒有3′→5′核酸內(nèi)切酶活性，引物3′端最后一個(gè)堿基是否與模板配對決定著能否擴(kuò)增出產(chǎn)物。若將引物的3′端最后一個(gè)堿基設(shè)計(jì)在正好有差異的那個(gè)堿基序列上，則擴(kuò)增產(chǎn)物僅需常規(guī)瓊脂糖電泳，根據(jù)特異產(chǎn)物存在與否即可直接對HLA進(jìn)行分型。

用PCR擴(kuò)增特定的靶序列,經(jīng)變性使之成為兩條單鏈,然后在無變性劑的中性聚丙烯酰胺凝膠中電泳。單鏈DNA如果存在堿基差異,即使一個(gè)堿基的不同,也會表現(xiàn)出電泳遷移率的不同,據(jù)此可將不同型別的HLA區(qū)分開,達(dá)到分型的目的。PCR-SSCP

首先用PCR擴(kuò)增HLA的DNA片段，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化和測序，將此序列與HLA基因庫的DNA已知序列進(jìn)行比較，即可獲得HLA的基因型別。最可靠也最徹底的基因分型方法。

用標(biāo)記有生物素的特異性引物分別擴(kuò)增HLA-A、B、DR等基因座位的特異性片段，擴(kuò)增產(chǎn)物與已知的寡核苷酸探針（事先包被在不同顏色的磁珠上）進(jìn)行雜交，洗脫沒有結(jié)合的DNA片段，再與熒光素標(biāo)記的親和素結(jié)合，多熒光微珠在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行結(jié)果判讀，若擴(kuò)增的DNA片段能與探針結(jié)合則發(fā)熒光，不結(jié)合則無熒光。多熒光微珠免疫分析

首先用PCR擴(kuò)增獲得HLA的DNA片段，用放射性核素或熒光素標(biāo)記擴(kuò)增的DNA分子，再與預(yù)先點(diǎn)在固相支持物表面的成千上萬個(gè)代表不同基因的寡核苷酸探針進(jìn)行雜交，通過放射自顯影或熒光檢測，雜交結(jié)果通過計(jì)算機(jī)軟件處理分析后獲得雜交信號的強(qiáng)度及分布模式圖，從而反映樣品中HLA的基因型別。基因芯片三、交叉配型試驗(yàn)

檢測受者體內(nèi)是否存在抗供者的特異性抗體以及受者對供者HLA抗原的相容程度，防止發(fā)生超急性排斥反應(yīng)。

原理：交叉微量細(xì)胞毒試驗(yàn)

內(nèi)容：供者淋巴細(xì)胞+受者血清

T/B淋巴細(xì)胞毒性交叉配型、自身交叉配型、流式細(xì)胞術(shù)交叉配型。（一）供者的選擇（二）移植物和受者預(yù)處理（三）正確合理的組織配型（四）免疫抑制措施第三節(jié)避免移植排斥反應(yīng)的免疫學(xué)檢驗(yàn)及意義（一）選擇組織相匹配的供者1、一般情況（器官、全身情況、年齡）2、ABO血型相容（擬輸血）3、受者血清中預(yù)存抗體的檢測4、HLA配型（受、供者HLA等位基因相合的數(shù)目越多越好）1、ABO血型要求ABO血型必須相同或至少符合輸血原則。

2、HLA型別骨髓移植要求HLA必須匹配。腎臟、心臟、小腸、胰腺移植時(shí)HLA-DR配型較HLA-A，HLA-B重要。肝、肺移植要求ABO血型配合，對HLA配型要求不高。

移植排斥反應(yīng)相關(guān)抗原的檢測

供、受者淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)4、mH抗原分型應(yīng)盡可能選擇同性別的供者。3、交叉配合試驗(yàn)（二）移植物和受者預(yù)處理1、供者的處理清除移植物中過客白細(xì)胞清除骨髓移植物中的T細(xì)胞2、受者的處理血漿置換術(shù)去除受者的抗A或抗B凝集素對受者進(jìn)行脾切除、免疫抑制療法輸供者特異性血小板1、淋巴結(jié)照射2、免疫抑制劑的應(yīng)用（1）化學(xué)性免疫抑制劑（2）生物性免疫抑制劑（3）中草藥：雷公騰、冬蟲夏草、落新婦（三）免疫抑制措施CsA，F(xiàn)K506：抑制活化的T細(xì)胞合成IL-2硝基咪唑硫嘌呤：抑制嘌呤合成，抑制T細(xì)胞增殖雷帕霉素：封閉IL-2受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)存在的問題無選擇性抑制全身免疫功能，不能誘導(dǎo)耐受常具有毒副作用化學(xué)性免疫抑制劑生物性免疫抑制劑

抗淋巴細(xì)胞抗體抗黏附分子、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體抗體反義核酸：針對細(xì)胞因子、黏附分子、共刺激分子等五、移植排斥反應(yīng)的免疫學(xué)監(jiān)測（一）受者對移植物特異性免疫反應(yīng)的監(jiān)測（二）受者其它免疫學(xué)指標(biāo)監(jiān)測（一）受者對移植物特異性免疫

反應(yīng)的監(jiān)測體液免疫監(jiān)測－抗供者抗體的監(jiān)測-CDC試驗(yàn)

1.抗供者HLA抗體

2.ABO血型抗體

3.抗內(nèi)皮、單核細(xì)胞抗體

3.抗供者組織細(xì)胞抗體

細(xì)胞免疫監(jiān)測

1.T細(xì)胞亞群檢測：CD4+/CD8+,CD30/CD69CD4+↑提示易發(fā)生排斥反應(yīng)，CD8+細(xì)胞則相反；CD4+/CD8+>1.2，則預(yù)示急性排斥反應(yīng)的發(fā)生。

2.特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞檢測

CD4+——Th0-Th43.特異性Th細(xì)胞檢測

CTL(CD8+CD28+)和Ts（CD8+CD28-）

4.CD30和CD69（二）受者其它免疫學(xué)指標(biāo)監(jiān)測E花環(huán)試驗(yàn)淋巴細(xì)胞增殖能力檢測NK細(xì)胞功能監(jiān)測細(xì)胞因子及其受體監(jiān)測:IL-2，TNF等黏附分子監(jiān)測：ICAM-1,VCAM-1.ELAM-1共激分子B7-CD28/CTLA-4，CD40/CD40L;其它：CRP、β2-m等器官免疫排斥問題的突破――環(huán)孢素的發(fā)現(xiàn)

1978年10月，劍橋大學(xué)羅伊·卡恩教授通過實(shí)驗(yàn)證明了環(huán)孢素的神奇效果。這種藥物使器官移植的生存率從20%多變成了80%多，它能夠控制絕大部分的移植器官躲開正常的排斥反應(yīng)。

器官移植存在的問題排斥反應(yīng)：免疫抑制藥物供體短缺：目前，我國人體器官移植數(shù)量僅次于美國，但隨之而來的器官來源問題成為目前的最大障礙。全球器官捐獻(xiàn)率最高的是西班牙，平均每百萬居民中有34名捐獻(xiàn)者，我國內(nèi)地只有0.03名，兩者相差1000倍。僅1%患者能等到器官

我國目前的器官移植主要還是依靠死囚捐獻(xiàn)，移植死囚的器官占到總量的60%到70%左右，而公民間的自愿捐獻(xiàn)目前只占極少的一部分。

觀念

+腦死亡立法組織工程異種移植腦死亡對于臨床上雖有心跳但無自主呼吸，腦功能已經(jīng)永久性喪失，最終必致死亡的病人，稱之為腦死亡。我國一直把“心跳停止”、“呼吸消失”和“血壓為零”作為死亡的標(biāo)準(zhǔn)。但隨著醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展，病人的心跳、呼吸、血壓等生命體征都可以通過一系列藥物和先進(jìn)設(shè)備加以逆轉(zhuǎn)或長期維持。但是如果腦干發(fā)生結(jié)構(gòu)性損傷破壞，無論采取何種醫(yī)療手段最終發(fā)展為心臟死亡。因此，與心臟死亡相比，腦死亡顯得更為科學(xué)，標(biāo)準(zhǔn)更可靠。

供體短缺1.思想觀念身體發(fā)膚，受之于父母，不敢毀損，為孝之始者也。得全尸葬；科學(xué)教育及觀念宣傳滯后；2.立法腦死亡立法第一人——陳忠華同濟(jì)醫(yī)院器官移植研究院院所長長江學(xué)者特聘教授亞洲移植醫(yī)學(xué)會常務(wù)理事中華醫(yī)學(xué)會器官移植學(xué)分會副主任委員主要專著《腦死亡》、《移植免疫學(xué)》參與我國80多位腦死亡患者捐獻(xiàn)器官移植移植免疫的前沿研究誘導(dǎo)受者產(chǎn)生針對移植物的免疫耐受

——最理想的途徑2.異種移植3.組織工程誘導(dǎo)免疫耐受

誘導(dǎo)同種異基因嵌合體供者特異性抗原輸入可誘導(dǎo)移植耐受阻斷T細(xì)胞活化的共刺激信號途徑過繼調(diào)節(jié)性T細(xì)胞——CD4+/CD25+誘生或過繼“耐受性DC”供者特異性輸血

Donor-specifictransfusion，DST促進(jìn)Th2細(xì)胞活化，抑制Th1細(xì)胞功能；誘導(dǎo)受者產(chǎn)生供者組織特異性的封閉抗體；刺激機(jī)體產(chǎn)生同種抗原特異性TCR的獨(dú)特型抗體，阻斷輕微的移植物抗宿主反應(yīng)；異體淋巴細(xì)胞可誘導(dǎo)受者產(chǎn)生移植物抗宿主樣反應(yīng)，殺傷受者體內(nèi)的同種反應(yīng)性T細(xì)胞。CTLA-4-IgblockedB7/CD28interaction

同種異型移植排斥反應(yīng)的防治原理：組織配型、抑制受者的免疫應(yīng)答、誘導(dǎo)免疫耐受、加強(qiáng)移植后的免疫檢測。供者選擇紅細(xì)胞血型檢查受者血清中細(xì)胞毒性預(yù)存抗體測定HLA分型（HLA-DRHLA-BHLA-A）移植物或受者的預(yù)處理移植物預(yù)處理：移植物中的過客白細(xì)胞，骨髓中成熟的T細(xì)胞受者預(yù)處理：輸入供者特異性血小板；借助血漿置換去除受者體內(nèi)天然抗A或抗B凝集素；受者脾切除；免疫抑制治療。抑制受者免疫應(yīng)答為目前的常規(guī)治療：抑制代謝的藥物和激素；抑制T細(xì)胞活化的藥物；抗體或其他生物制劑。誘導(dǎo)受者對移植物的免疫耐受骨髓移植中建立同種異基因嵌合體（建立同種異基因造血干細(xì)胞嵌合體、混合嵌合體）阻斷共刺激通路誘導(dǎo)同種異型反應(yīng)性細(xì)胞失能（CTLA-4Ig融合蛋白、抗CD40L單抗）借助樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞失能人工誘導(dǎo)免疫耐受實(shí)驗(yàn)受精卵DNA表達(dá)人MHC“基因工程豬”的制備異種移植體外自體胚胎定向誘導(dǎo)干細(xì)胞胚胎工程

定義：具有自我復(fù)制的能力，在一定條件下能夠分化成各種功能細(xì)胞。分類：包括：胚胎干細(xì)胞（embryonicstemcells,ES細(xì)胞）

生殖干細(xì)胞（embryonicgermcells,EG細(xì)胞）

具有全能性，能夠分化成全身200多種細(xì)胞類型，進(jìn)一步形成機(jī)體的任何組織和器官。干細(xì)胞的基本概念（1）全能干細(xì)胞（totipotent）

具有分化成多種細(xì)胞和組織的潛能，但卻失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力。只能向一種或密切相關(guān)的兩種類型的細(xì)胞分化。（2）多能干細(xì)胞（pluripotent）（3）專能干細(xì)胞

患有糖尿病、進(jìn)行性老年性癡呆、嚴(yán)重的心力衰竭或其他疾病，如果從他身上任何部位取下一些體細(xì)胞，通過核移植技術(shù)，將其體細(xì)胞的細(xì)胞核顯微注射至去核的人卵細(xì)胞中，這種包含與病人完全相同的遺傳物質(zhì)的雜合卵細(xì)胞在體外培養(yǎng)發(fā)育成囊胚。

獲得的囊胚中分離并擴(kuò)增所謂的“人胚胎干細(xì)胞”(ES)，并體外誘導(dǎo)它們分化成胰島細(xì)胞、神經(jīng)元、心肌細(xì)胞等，將這些細(xì)胞移植至發(fā)病部位，則能夠修復(fù)病人的組織或器官。

由于移植細(xì)胞與病人的基因完全相同，不會產(chǎn)生通常器官移植中的免疫排斥反應(yīng)，修復(fù)的組織或器官將良好地履行職責(zé)，無需使用免疫抑制劑。

體外成熟卵子建立胚胎干細(xì)胞系定向分化各種干細(xì)胞(血細(xì)胞,骨細(xì)胞)定向分化克隆組織和器官

胚胎干細(xì)胞在體外具有無限增殖能力，可以發(fā)育為成體的各種組織細(xì)胞，因此，以胚胎干細(xì)胞作為“種子”細(xì)胞，將其在體外大量擴(kuò)增并誘導(dǎo)分化為特定的組織細(xì)胞，如造血細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、胰島素分泌細(xì)胞等，或直接發(fā)育為某種組織器官，可以廣泛用于器官移植、組織工程、細(xì)胞替代和基因治療。移植后的免疫檢測淋巴細(xì)胞亞群百分比及其功能移植物浸潤細(xì)胞的功能特征移植物內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)水平習(xí)題1.某人燒傷后，取未受損的皮膚為其進(jìn)行移植屬于A．自體移植B．同系移植C同種移植D．異種移植E胚胎組織移植2.健康人與患者間腎臟移植屬于A．自體移植B．同系移植C同種移植D．異種移植E胚胎組織移植3．將狒狒的心臟移植給患者，稱為A．自體移植B．同系移植C同種移植D．異種移植E胚胎組織移植4．同卵雙生間的移植屬于A．自體移植B．同系移植C同種移植D．異種移植E胚胎組織移植5.HLA分型的臨床應(yīng)用最重要的是A.疾病的確定診斷B．尋找與某些疾病的相關(guān)性C.器官移植前的組織配型D.輸血前的檢查E．疾病預(yù)后的判斷6.HLA分型多采用A.沉淀法B．凝集法C.分子生物學(xué)方法D．金標(biāo)法E．酶免法7.排斥反應(yīng)的免疫檢驗(yàn)中，體液免疫水平檢測不包括A．ABO血型B．HLA抗體