一份很有參考價(jià)值的浙江自然基金標(biāo)書重點(diǎn)資助

助ZZ206510同同行評議組別藥物化學(xué)與生化藥學(xué)項(xiàng)目編號浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目名稱:電話:依托單位:通信地址:E-mail:申申請者信息項(xiàng)目基本信息基本信息領(lǐng)域潘遠(yuǎn)江性別男博士獲學(xué)位年份職稱教授證件類型身份證證件號碼地名稱抗腫瘤藥物先導(dǎo)的快速識別研究 (BulbophyllumkwangtungenseSchlecht)與細(xì)莖石斛()為研究對象，對其中分進(jìn)行研究,重點(diǎn)關(guān)注這些植物中含量低微，結(jié)構(gòu)新穎的c過高分辨質(zhì)譜以及液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分析手段進(jìn)行這些成分的分析確定，發(fā)展并建立微量水平上的天然來源新型抗腫瘤藥物先導(dǎo)的快速識別新途徑，并在此基礎(chǔ)上，結(jié)合其他波譜手段結(jié)合新型藥物先導(dǎo),為創(chuàng)制具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗癌新藥的研究提供科學(xué)依據(jù).關(guān)鍵詞(不超過4個(gè))項(xiàng)目組主要成員1 (月)898999116師0期22男女男男女男12345670.高級、中級、初級、博士后、博士生、碩士生及參加單位數(shù)由申請者負(fù)責(zé)填報(bào)，總?cè)藬?shù)自動生成；入。個(gè)人介紹：—蘭州大學(xué)化學(xué)系理學(xué)學(xué)士—蘭州大學(xué)化學(xué)系理學(xué)碩士西北產(chǎn)藏藥翠雀花中二萜生物堿研究導(dǎo)師：陳耀租院士—蘭州大學(xué)化學(xué)系理學(xué)博士生物活性分子的質(zhì)譜研究導(dǎo)師：陳耀租院士—浙江大學(xué)化學(xué)系博士后—瑞士伯爾尼大學(xué)化學(xué)與生物化學(xué)系博士后江大學(xué)化學(xué)系有機(jī)與藥物化學(xué)研究所江大學(xué)化學(xué)系有機(jī)與藥物化學(xué)研究所教授杭州師范學(xué)院兼職教授主持的主要研究項(xiàng)目有：1)質(zhì)譜在天然來源抗腫瘤活性成分快速篩選中的分析研究2)冠心II號組成原理基礎(chǔ)研究3)質(zhì)譜在天然抗腫瘤活性成分靶向篩選與分析中的應(yīng)用4)生物活性植物多酚的逆流色譜分離新方法研究5)中藥活性成分快速篩選的現(xiàn)代組合化學(xué)研究-省自然科學(xué)基金委人才基金6)浙江傳統(tǒng)中藥抗癌生物活性成分快速篩選與結(jié)構(gòu)測定-省自然科學(xué)基金項(xiàng)目nArticle.申請經(jīng)費(fèi)預(yù)算萬元金金額(萬名稱費(fèi)注：開支范圍和標(biāo)準(zhǔn)參見《浙江省省級科技項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)管理暫行辦法》(浙財(cái)教字[2002]20號)。申請者承諾：我保證： (1)申請書內(nèi)容是真實(shí)的； (2)恪守科學(xué)道德，倫理道德的基本原則； (3)項(xiàng)目組成員知曉申請書內(nèi)容，并自愿參與研究工作； (4)已如實(shí)填報(bào)申請者正在主持的國家和省部資助經(jīng)費(fèi)在20萬元及以上的研究項(xiàng) (5)如果獲得資助，我將履行項(xiàng)目負(fù)責(zé)人職責(zé)，嚴(yán)格遵守浙江省自然科學(xué)基金委員有關(guān)材料。項(xiàng)目依托單位承諾:已按規(guī)定對申請人的資格和申請書內(nèi)容進(jìn)行了審核。申請項(xiàng)目如獲資助，我單位保江省自然科責(zé)人和本單位項(xiàng)目管理部門按照規(guī)定及時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。依托單位公章.正文撰寫提綱型抗腫瘤藥物先導(dǎo)的快速識別研究意義中草藥(藥用植物)有效成分研究是發(fā)現(xiàn)與創(chuàng)制新藥的一條重要途徑，一直令人關(guān)究獲得了許多極具應(yīng)用價(jià)值的新型藥物如紫杉醇等或其他藥物先導(dǎo)在中草藥有效成分的研進(jìn)步，也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，為天然藥物的創(chuàng)新研究奠定了良好的基礎(chǔ)。然而，由于中草藥化學(xué)成分一般都十分復(fù)雜，傳統(tǒng)的研究模式(科技條件限制)豐富的主要化學(xué)成分，且其有效成分的分離提取與藥效驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)往傳統(tǒng)研究模式的制約，加大尋找與發(fā)現(xiàn)新型藥物先導(dǎo)的可能性。在藥物(西藥)的研究中，曾發(fā)展通過篩選化學(xué)庫(組合庫、化合物庫)來尋找及藥有效成分(天然的復(fù)雜的化合物庫中的某些特定化合物)的研究提供了新思路。在快速篩選化合物庫的新技術(shù)中，基于生物親合等分子間相互作用(力)分析的靶分子而被研究；這種基于靶標(biāo)分子與藥物分子(配體或抑制劑)的相互作用的體外生物功應(yīng)用除一是要選擇合適靶標(biāo)分子，二是要尋求與之匹配的活性分子定性檢測的高靈敏度的分析方法，飛速發(fā)展的現(xiàn)代質(zhì)譜技術(shù)如電噴霧電離結(jié)合高分辨技術(shù)質(zhì)譜(ESI-HRMS)等因其具有快速，靈敏度高以及易與分離手段(如HPLC)聯(lián)用等特點(diǎn)正成為手段之一[3-4]?？鼓[瘤藥物的研究與創(chuàng)制是關(guān)系到人類健康的重大課題之一，而從中草藥出發(fā)尋求與發(fā)現(xiàn)高效低毒的新型抗腫瘤藥物一直是醫(yī)藥行業(yè)極為關(guān)注的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域；如前所述，在傳統(tǒng)的中草藥有效成分研究基礎(chǔ)上，盡快開展微量水平上的生物活性成分的研究，將大大豐富抗腫瘤藥物先導(dǎo)的新源泉，在我們前期的研究中，本課題組曾以拓?fù)洚悩?gòu)酶以及微管蛋白作為靶分子，結(jié)合質(zhì)譜分析對一些抗癌藥物分子進(jìn)行了成功的篩選與分析[5-6]，然而由于拓?fù)洚悩?gòu)酶，微管蛋白的活性保持較為困難，因此基于這些靶標(biāo)分子的活性成分篩選的應(yīng)用受到很大的限制，為了探討并建立更具應(yīng)用前景的微量新型天然來源抗腫瘤活性成分篩選與分析一體化的新途徑，合適靶標(biāo)分子的選擇與應(yīng)用一直是我們極為關(guān)注的問題。近年來癌基因蛋白產(chǎn)達(dá)和活性異常是某些腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因之一，而v-Src蛋白本身就能誘導(dǎo)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與腫瘤的發(fā)生；因而研究開發(fā)Src蛋白抑制劑作為強(qiáng)效腫瘤抑制劑已成為目前國際醫(yī)藥界廣為關(guān)注的亮點(diǎn)[7-8]。為此，本項(xiàng)目擬以基因工程獲得的具有激酶活性的病毒癌基因表達(dá)蛋白-v-Src作為蛋白質(zhì)靶標(biāo)分子,在分子水平上對中草藥中的一些新的微量抗腫瘤活性分子進(jìn)行靶向篩選,結(jié)合高分辨質(zhì)譜及液質(zhì)聯(lián)用分析手段，對這些活性分子進(jìn)行分析確定，從而發(fā)展并建立微量水平上的天然來源新型抗腫瘤藥物先導(dǎo)的快速識富，對這些藥物，除需要充分發(fā)揮傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物新藥奠定扎實(shí)基礎(chǔ)并提供一條可行的捷徑。本項(xiàng)目研究途徑，為促進(jìn)我省乃至我國醫(yī)藥事業(yè)的振興與發(fā)展做出貢長期目標(biāo)的關(guān)系；項(xiàng)目研究目標(biāo)：c來源抗腫瘤活性分子進(jìn)行快速篩選，結(jié)合高分辨質(zhì)譜及液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對這些分子進(jìn)行分析確定，以建立微量天然來源抗腫瘤藥物先導(dǎo)的快速識別新途徑，并應(yīng)用該途徑尋找發(fā)與申請者研究工作長期目標(biāo)的關(guān)系：研純化的研究中，其成果在《Journalof金“抗氧化植物多酚的逆流色譜分離方法研究”(2005-2007)項(xiàng)目；應(yīng)用質(zhì)譜及其聯(lián)用技家自然科學(xué)基金“質(zhì)譜在天然抗腫瘤活性成分快速篩選與分析中的應(yīng)用”(1999-2001)與“天然來源抗腫瘤活性成分靶向篩選與質(zhì)譜分析”(2004-2006)項(xiàng)目。4)課題組通過綠效的新型蛋白靶標(biāo)的原則，近期與從事生命科學(xué)研究的相關(guān)課題組開展了合作研究，并對其研究必將大大促進(jìn)天然藥物化學(xué)(有機(jī)結(jié)構(gòu)分析)研究技術(shù)與方法的發(fā)展與更新，既可豐富天然有機(jī)(藥物)化學(xué)理論內(nèi)容，更重要的是對這類活性成分的深入研究可大抗腫瘤活性分子的相互作用進(jìn)行中草藥中抗腫瘤活性成分的靶向篩選，結(jié)合/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對上述篩選出的成分進(jìn)行在線分離分析與鑒定，從而發(fā)展與研究內(nèi)容： (BulbophyllumkwangtungenseSchlech)t與細(xì)莖石斛()等幾種植物根莖的乙醇提取物在體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，對人卵巢癌HO-8910細(xì)胞，人宮頸富含成分中分離得到一系列9,10-二氫二苯并[b,f]氧雜卓類化合物與單體毛蘭素(Erianin)、毛蘭菲(Confusarin)bf類本項(xiàng)目即以這幾種植物為研究對象，重點(diǎn)關(guān)注這些植物中含量低微，結(jié)構(gòu)新穎的有效成分的研究，擬以基因工程獲得的具有激酶活性的病毒癌基因表達(dá)蛋白v-Src作為蛋白質(zhì)靶標(biāo)分子,在分子水平上對上述一系列新的微量抗腫瘤活性分子進(jìn)行靶向篩選,通過高分辨質(zhì)譜分析及其聯(lián)用手段進(jìn)行分析確定，發(fā)展并建立微量水平上的天然來源新型抗腫瘤藥物先導(dǎo)的快速識別新途徑，并在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)若干具有應(yīng)用前景的新型藥物先導(dǎo)，研究方案1)運(yùn)用傳統(tǒng)色譜方法得到富含成分有效部位分離提取，所獲得化合物多為已知結(jié)構(gòu)的化合物；對新結(jié)構(gòu)化合物，通過現(xiàn)代波譜技術(shù)(1D,2D-NMR等)確定結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行抗腫瘤活性驗(yàn)證。該過程可去除有效部位的富含成分，富集有效部位的微量成分。成份的分離分析—發(fā)展新的研究途徑溶液分別置于由關(guān)鍵膜隔離的上下兩個(gè)篩選池中，由于靶標(biāo)具有親水膠體的性質(zhì)始終被截留在一個(gè)篩選池中，隔離膜對天然化合物小分子保于生物親合作用，具有抗腫瘤活性的藥物分子(v-Src的抑制劑)與靶標(biāo)分子結(jié)合形成比較這兩類指紋圖譜差異后，發(fā)現(xiàn)新的活性成份。由于該研究中所應(yīng)用的高分辨質(zhì)譜可給出有機(jī)分子的元素組成(分子NMR技術(shù)(微量探頭)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定。polyGlu:Try(4:1)為底物的ELISA法鑒定其免疫原性和酪氨酸激酶活性。(該實(shí)驗(yàn)程序已白v-Src的免疫原性和酪氨酸激酶活性，可以直接作為靶標(biāo)蛋白)。1)對廣東石豆蘭與細(xì)莖石斛等幾種植物根莖部分粉碎，用70%酒精浸泡提取，通過得若干有效部位。)運(yùn)用逆流色譜技術(shù)，大孔吸附樹脂及正反相柱層析對有效部位進(jìn)行分段分離，得3)對上述分離得到的未知結(jié)構(gòu)的單體成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定并進(jìn)行藥理驗(yàn)證。集與分段，得到若干含有多組分(微量成分)部位，體外藥理跟蹤得到系列有效部位。1)制備并組裝含靶標(biāo)分子的篩選池，探討快速篩選的最佳條件。等若干已知抗癌成分為對3)在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對若干含多種微量成分的有效部位進(jìn)行快速識別研究，在靶成復(fù)合物而被截留，未被篩選化合物分子游離分4)鎖定篩選出的活性成分，通過高分辨質(zhì)譜可提供元素組成(分子式)的功能，結(jié)合5)對在線分析并結(jié)合檢索確定結(jié)構(gòu)的復(fù)雜新結(jié)構(gòu)成分，通過多次富集并結(jié)合半微量制6)運(yùn)用體外腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)等常規(guī)藥理方法對一些具有新穎結(jié)構(gòu)的成分進(jìn)行藥理驗(yàn)分MS或蛋白進(jìn)度安排成具體實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，藥用植物的采集，有效部位的提取分段，微量有效成分2)~完成各種藥用植物中富含化學(xué)成份的分離提取與結(jié)構(gòu)確定，同時(shí)建立微量或超微速識別的試驗(yàn)方法；完成多種的微量抗腫瘤活性成份的快速結(jié)報(bào)告。rc互作用進(jìn)行中草藥中抗腫瘤活性成分的靶向篩選，結(jié)合高分辨質(zhì)譜及其聯(lián)用技術(shù)對上述篩選出的成分進(jìn)行在線分離分析與鑒定，其創(chuàng)新之處在于：(1)靶蛋白對藥物分子的靶向篩選以及高分辨質(zhì)譜分析均是極其靈敏超微量生物活性成分的分析研究，為從天然來源(藥用植物)中發(fā)現(xiàn)一些含量低微的抗腫瘤活性成分提供新手段，該研究(2)本項(xiàng)目關(guān)于生物活性成分的靶向篩選與分析鑒定可在線一體化實(shí)施，豐富了天然有機(jī)(藥物)化學(xué)研究方法，可大大提高了天然有機(jī)化學(xué)及 (3)靶標(biāo)與抗腫瘤活性分子的相互作用用于中草藥(藥用植物)中微量的抗腫瘤活 (4)本項(xiàng)目重點(diǎn)進(jìn)行多種藥用植物中微量成分的研究，以發(fā)現(xiàn)大量的擁有新結(jié)構(gòu)的生物活性成分，該研究可大大豐富抗癌藥物先導(dǎo)的源泉(為藥物合成提供靶標(biāo))從而為 (5)上述途徑也可適用于其他天然來源生物活性微量成分的快速識別.多y雜果共獲省部級及其他部門科技獎三項(xiàng)。(2)課題申請者近幾年來負(fù)責(zé)承擔(dān)了的三項(xiàng)國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目，其中兩項(xiàng)課題“親合超濾-質(zhì)譜分析在天然來源抗腫瘤活性成分快速篩選中的應(yīng)用”與“質(zhì)譜在天然來源抗腫瘤活性成分靶向篩選中應(yīng)用”分別以拓?fù)洚悩?gòu)酶以及微管蛋白等作為靶標(biāo)分子，對一些抗腫瘤活性的物質(zhì)進(jìn)行了篩選分析研究，取得的結(jié)果可為本課題的實(shí)施提供有益的經(jīng) (3)我們在近期的相關(guān)研究中，從一些藥用植物中分離得到的一系列具有抗腫瘤活性發(fā)展微量水平上快速識別的新途徑非常必500MHz超導(dǎo)核磁儀一臺，該儀器帶有微量探頭(Nano-probe)，可用于本研究中一些新料，擁有了各型常規(guī)正相柱色譜、中壓色譜、各型葡聚糖凝膠色譜(SephdexLH-20)、反相層析色譜(RP-4、RP-18