T-CAS 947-2024 類器官在化學品毒性測試中的應用規(guī)范

T/CAS947—2024Specificationsfortheuseoforganoidsinchemicalt 2 2 2 4 7 9請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。物科技有限公司、北京實安科技有限公司、北京市眼科研究所、北京醫(yī)學檢驗學會、北京整合醫(yī)學技術(shù)有限公司、河北省食品檢驗研究院、黑玉星巖國際科學技術(shù)（北京）有限公司、洛陽華清天木生物科技有限公司、清華大學、清華大學深圳國際研究生院、山東第一醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院、蘇浙江霍德生物工程有限公司、中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院、國軍標（北京）標準化技術(shù)研究院、通標本文件主要起草人：顧愛華、蔣兆彥、徐進、翁振坤、劉倩、周勇、楊楊、梁靜佳、邵文濤、趙鵬、胡佳、陳力群、聶國輝、黃衛(wèi)人、張巖、楊菁喆、鄧博文、李娜、金子兵、穆紅、陳澤新、王恒、徐冰、吳春生、范靖、周一鳴、戴其全、王慶國、王類器官在化學品毒性測試中的應用規(guī)范下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用由干細胞或前體細胞體外培養(yǎng)形成，由組織器官特異性的多種細胞組成，具有特定組織器官關(guān)2a)DMEM/F12培養(yǎng)基、Neurobasal培養(yǎng)基、mTeSR1培養(yǎng)基、STEMdiffAPEL2培養(yǎng)基、小鼠肺類器官培養(yǎng)基、小鼠腸類器官培養(yǎng)基、小鼠肝類器官培養(yǎng)基；b)Matrigel基質(zhì)膠、Vi）；g)磷酸鹽緩沖液（PBS）、紅細胞裂解液、DNAh)T25培養(yǎng)瓶（poly-HEMA包被）、96孔板（超低吸附）、細胞培養(yǎng)皿37.1.1.5置于37℃5%CO2細胞培養(yǎng)箱中的低速圓周搖床上搖動培養(yǎng)，每3d～5d半量換液，第7.1.2.1心臟類器官宜采用人誘導多能干細胞（hPSCs）構(gòu)建5μMIWP-2、0.5μM視黃），7.1.3.1肺類器官宜采用小鼠肺組織構(gòu)建，置min～60min。培養(yǎng)基混勻，4℃300g離心5min，棄上清；重復上述步驟2次，直至細胞沉淀變白。7.1.3.7按照2×107/mL7.1.4.1腸類器官宜采用小鼠腸組織構(gòu)建，置7.1.4.3將腸段縱向切開，用預冷的PBS輕輕47.1.5.9按照2×107/mL7.1.6.1腎類器官宜采用人誘導7.1.6.324h后，更換STEMdi5個細胞轉(zhuǎn)移到transwell小室，并置于STEMdiffAPEL2培養(yǎng)基（含5μM），釋液（不少于3個梯度）。小心吸出培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基（不要觸碰膠滴基（每個濃度梯度不少于3個平行樣）進行培養(yǎng)。根據(jù)類器b)參考附錄B的方法，檢測腦類器官標志物表達水1)神經(jīng)元標志物，如微管相關(guān)蛋白2（2)膠質(zhì)細胞標志物，如膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和S100b。b)參考附錄B的方法，檢測心類器官標志物表達水）；b)參考附錄B的方法，檢測肺類器官分子標志物變化水平，包括：1)上皮標志物，如角蛋白14（Krt14）、上皮細胞粘附分b)參考附錄B的方法，檢測腸類器官分子標志物變化水平，包括：）；b)參考附錄B的方法，檢測肝類器官分子標志物變化水平，包括：6b)參考附錄B的方法，檢測腎類器官標志物表達水3)足細胞標志物，如突觸足蛋白（SYNPO）。7A.1儀器設備）；A.3試驗方法b)采用巴氏管上下吹打，使類器官和Matrigel基質(zhì)膠分離；8）；c)采用TRIzol試劑盒提取d)采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補脫氧核糖核酸（cDNA（GAPDH）作為內(nèi)參，2-ΔΔCt值反映標志物d)Hank's平衡鹽溶液（Hank'sbad)將腦類器官培養(yǎng)板放置在37℃5