實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠細(xì)小病毒檢驗(yàn)方法 編制說(shuō)明

《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》編制說(shuō)明（一）工作簡(jiǎn)況，包括任務(wù)來(lái)源、協(xié)作單位；1.任務(wù)來(lái)源：TC281（全國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)）歸口，主管部門為科學(xué)技術(shù)部，20232755-T-306項(xiàng)目。2.牽頭單位：中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)3.協(xié)作單位：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所中國(guó)食品藥品檢定研究院廣東省生物技術(shù)研究院（廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)中心）江西省職業(yè)病防治研究院（二）主要工作過(guò)程、標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做的工作等；1.工作過(guò)程：1.12023年12月通過(guò)立項(xiàng)1.22024年1月17日，進(jìn)行了全體會(huì)議，參加成員對(duì)包括小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法在內(nèi)的14項(xiàng)國(guó)標(biāo)修訂提出意見并討論。會(huì)后進(jìn)行了任務(wù)分工。1.32024年1月-4月，通過(guò)查閱資料和前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，開始初步起草《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》修訂標(biāo)準(zhǔn)。1.42024年5月13日，標(biāo)準(zhǔn)修訂推進(jìn)會(huì)，對(duì)國(guó)標(biāo)修訂中遇到的問(wèn)題進(jìn)一步提出意見并探討。會(huì)后成立編制修訂小組。1.52024年6月6日，MVM檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)修訂小組會(huì)，對(duì)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》初步稿進(jìn)行了意見討論。1.62024年6月-8月，完成新增實(shí)時(shí)熒光PCR方法的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證（見隨附報(bào)告《小鼠細(xì)小1.72024年8月-9月，MVM檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)修訂小組進(jìn)行了第二輪意見修改。1.82024年11月-12月，準(zhǔn)備和發(fā)放新增熒光PCR方法第三方實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證用樣品及試劑，委托中國(guó)食品藥品檢定研究院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、廣東省生物技術(shù)研究院（廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)中心）三家第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了驗(yàn)證工作。1.92025年1月-2025年2月，進(jìn)行了全體會(huì)議，再一次確定國(guó)標(biāo)修訂中的問(wèn)題；完成《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》征求意見稿和修訂說(shuō)明并提交。2.主要起草人及工作申屠芬琴：標(biāo)準(zhǔn)起草、實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案韓雪：標(biāo)準(zhǔn)修訂小組成員，標(biāo)準(zhǔn)修訂指導(dǎo)向志光：GB/T14926、GB/T18448修訂任務(wù)主要負(fù)責(zé)人、標(biāo)準(zhǔn)修訂指導(dǎo)熊莉娟、劉忠華：標(biāo)準(zhǔn)修訂小組成員，標(biāo)準(zhǔn)修訂指導(dǎo)王吉星：工作安排協(xié)調(diào)王雪妹、劉敏、周倩、連亞靜：標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證（三）標(biāo)準(zhǔn)編寫背景；隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制能力的提升，GB/T14926.28-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》已不能滿足實(shí)際檢測(cè)需求。GB/T14926.28中涉及的檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫酶試驗(yàn)（IEA）和免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等血清學(xué)方法，未涉及分子生物技術(shù)的核酸檢測(cè)方法，與國(guó)際水平脫節(jié)。本次國(guó)標(biāo)修訂，為對(duì)原有標(biāo)準(zhǔn)的更新，以增加標(biāo)準(zhǔn)的普適性。（四）標(biāo)準(zhǔn)編制原則；目前有1個(gè)強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)和1個(gè)推薦性技術(shù)方法標(biāo)準(zhǔn)，分別為：1個(gè)強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)GB14922《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》，修訂于2022年，規(guī)定了小鼠細(xì)小病毒為實(shí)驗(yàn)小鼠的必須檢測(cè)項(xiàng)目，但未涉及具體檢測(cè)技術(shù)方法。1個(gè)推薦性技術(shù)方法標(biāo)準(zhǔn)GB/T14926.28《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》，更新于2001年，采用血清學(xué)方法，包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫酶試驗(yàn)（IEA）和免疫熒光試驗(yàn)（IFA是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，停留于21世紀(jì)初技術(shù)水平。因此，需要建立和更新國(guó)內(nèi)適用，與國(guó)際水平接軌的檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)。隨著科技的發(fā)展，核酸檢測(cè)技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，為了拓寬檢測(cè)方法，增加標(biāo)準(zhǔn)的適用性，本標(biāo)準(zhǔn)新增實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法，用以檢測(cè)病毒核酸。本標(biāo)準(zhǔn)按照“科學(xué)性、規(guī)范性、可行性”的原則，依據(jù)中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則—第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》（GB/T1.1-2020）規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法，包括標(biāo)準(zhǔn)的范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑及儀器、檢測(cè)方法與結(jié)果判定等。（五）確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容（如技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等）的論據(jù)（包括試驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)修訂標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)增列新舊標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比；與原標(biāo)準(zhǔn)相比，修訂標(biāo)準(zhǔn)中因新增了實(shí)時(shí)熒光PCR方法，在范圍、規(guī)范性引用文件、原理以及檢測(cè)方法內(nèi)容上均有增加。新增實(shí)時(shí)熒光PCR方法適用于免疫缺陷小鼠篩查、血清轉(zhuǎn)化的早期檢測(cè)、血清學(xué)陽(yáng)性或疑似結(jié)果小鼠種群情況的確認(rèn)、隔離檢疫、設(shè)施環(huán)境監(jiān)測(cè)、飼料墊料水監(jiān)測(cè)、動(dòng)物接種物（如腫瘤、細(xì)胞）及生物制品篩查等，樣品類型可包括動(dòng)物組織、糞便、環(huán)境拭子、飼料墊料水、動(dòng)物接種物及生物制品等。新增方法參考了國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，挑選了針對(duì)3個(gè)不同位點(diǎn)的3組引物探針進(jìn)行了比較篩選，選擇最佳引物探針組作為新增方法的引物探針。通過(guò)驗(yàn)證顯示，本方法線性良好，R2為0.998，靈敏度可達(dá)1cps/μL，敏感性、特異性和重復(fù)性良好，方法可行。方案驗(yàn)證報(bào)告見附件《20232755-T-306實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒qPCR檢測(cè)方法的驗(yàn)證》。（六）主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）的分析、綜述報(bào)告，技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效果；至少三家第三方驗(yàn)證報(bào)告經(jīng)濟(jì)效益：在原有小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，新增與國(guó)際接軌、國(guó)內(nèi)適用的實(shí)時(shí)熒光PCR方法，更符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理要求，可減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活體使用數(shù)量，無(wú)需血清學(xué)方法中抗體轉(zhuǎn)化等待時(shí)間，能夠高效快速的對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。對(duì)生物制品和飼料墊料中小鼠細(xì)小病毒的檢測(cè)，更能提前控制MVM從這些途徑感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的風(fēng)險(xiǎn)，降低生產(chǎn)繁育和科研損失。第三方實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證：委托了中國(guó)食品藥品檢定研究院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、廣東省生物技術(shù)研究院（廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)中心）三家實(shí)驗(yàn)室對(duì)新增實(shí)時(shí)熒光PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證樣品為含有和不含滅活MVM病毒的糞便混懸液、環(huán)境拭子浸泡液和組織混懸液，檢測(cè)結(jié)果均符合預(yù)期。三家驗(yàn)證報(bào)告見附件《20232755-T-306MVM驗(yàn)證報(bào)告-中檢院》、《20232755-T-306MVM比對(duì)報(bào)告及原始記錄-動(dòng)研所》和《20232755-T-306MVM驗(yàn)證報(bào)告及原始記錄-廣東動(dòng)監(jiān)所》。（七）采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度，以及與國(guó)際、國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比情況，或與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況；（八）與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系；GB14922-2022《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》規(guī)定了小鼠細(xì)小病毒為實(shí)驗(yàn)小鼠的必須檢測(cè)項(xiàng)目，本標(biāo)準(zhǔn)可以作為GB14922-2022的配套技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)內(nèi)現(xiàn)行的法律、法規(guī)沒(méi)有沖突，是對(duì)現(xiàn)有法律、法規(guī)的有益補(bǔ)充。（九）重大分歧意見的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)；（十）標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的建議；本標(biāo)準(zhǔn)是GB/T14926.28-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠細(xì)小病毒檢測(cè)方法》的修訂標(biāo)準(zhǔn)