實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 皮膚病原真菌檢測(cè)方法 征求意見稿

GB/T14926.4—2024實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚病原真菌檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚病原真菌的檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴等動(dòng)物皮膚病原真菌的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用適用于本文件。GB/T14926.42-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)標(biāo)本采集GB/T14926.43-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)染色法、培養(yǎng)基和試劑GB14922.2-2011《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》3原理皮膚病原真菌在培養(yǎng)基上有特定的生長(zhǎng)、形態(tài)和生理生化特征；寄生于毛發(fā)上可見明顯的感染孢子。4主要設(shè)備和材料4.1接種刀。4.2無菌接種罩。4.328℃恒溫培養(yǎng)箱。4.4生物顯微鏡。5培養(yǎng)基和試劑5.1葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(SDA)。5.2皮膚癬菌鑒別瓊脂(DTM)。5.3氫氧化鉀二甲基亞砜液。5.4乳酸酚棉藍(lán)染色液。6檢驗(yàn)程序圖1皮膚病原真菌檢驗(yàn)程序7操作步驟取皮毛、鱗屑。7.2直接檢查取標(biāo)本置于載玻片并加氫氧化鉀二甲基亞砜液一滴，蓋上蓋玻片，置10-15min后，輕壓蓋玻片，吸去周圍液體，置顯微鏡下觀察。7.3分離培養(yǎng)將標(biāo)本分三點(diǎn)接種于葡萄糖蛋白胨瓊脂斜面，放置28℃恒溫箱中培養(yǎng)，7-14d觀察菌落形態(tài)。7.4涂片鏡檢取載玻片并加乳酸酚棉藍(lán)染色液一滴，用接種針（環(huán)）取培養(yǎng)物置染色液中，然后加蓋玻片，鏡檢。7.5鑒定7.5.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚病原真菌主要屬于毛廯菌屬和小孢子菌屬真菌，可在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成絲狀菌落。根據(jù)菌落形態(tài)、顏色和所產(chǎn)生的大分生孢子，可對(duì)皮膚病原真菌作表1皮膚病原真菌的主要特征皮膚侵犯部位形態(tài)特征菌絲毛發(fā)指（趾）甲大分生孢子小分生孢子毛癬菌屬+++細(xì)長(zhǎng)，棒形壁薄，少見梨形，棒形小孢子菌屬++—紡錘形，壁較厚，較多見棒形，卵圓形較少見球拍狀梳狀根據(jù)菌落形態(tài)及鏡檢結(jié)果，參照以下皮膚病原真菌形態(tài)特征，可確定菌種。引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚癬病的病原真菌主要有以下九種，菌種鑒定可依據(jù)菌落和鏡檢特征，它們的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)是:7.5.1.1須廯毛癬菌(Trichophytonmentagrophytes)在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)，生長(zhǎng)迅速。菌落平坦，質(zhì)地顆粒狀到粉末狀，白色到淡黃色，有時(shí)淡粉紅色、灰色或黃色，背面為淡黃色到暗褐色，常有輻射狀褐色條紋。鏡檢可見大量小分生孢子，一些大分生孢子和螺旋狀菌絲，小分生孢子主要為圓形，在多層分支菌絲的側(cè)邊和末端產(chǎn)生，形成大的簇狀。大分生孢子比較常見，圓柱形，為(20～50)μm×(7~10)μm，外壁薄而光滑，大多有3-4個(gè)分隔。7.5.1.2趾間毛癬菌(Trichophytoninterdigitale)本菌在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)，生長(zhǎng)迅速。菌落平坦，有時(shí)有皺褶，質(zhì)地粉末狀至絨毛狀，白色，中心奶油色，有時(shí)粉紅色或灰色，背面為奶油色至暗褐色。鏡檢可見大量小分生孢子，大分生孢子和螺旋狀菌絲很少見到，小分生孢子主要為圓形，在多層分支菌絲的側(cè)邊和末端產(chǎn)生。大分生孢子稀疏，若有為圓柱形，外壁薄而光滑，3-4個(gè)分隔。7.5.1.3石膏樣小孢子菌(Microsporumgypsium)本菌在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)，生長(zhǎng)快，菌落初呈白色，漸變?yōu)榈S色至棕黃色粉末狀菌落。培養(yǎng)基背面呈棕色。鏡檢可見很多大分生孢子，4-6隔，(12～13)μm×(40～60)μm大小，呈紡錘形，壁薄，粗糙有刺。菌絲較少?？梢娚贁?shù)小分生孢子，單細(xì)胞，(3～5)μm×(2.5～3.5)μm，呈棍棒狀、亦可見球拍狀菌絲、破梳狀菌絲、結(jié)節(jié)狀菌絲及厚壁孢子。菌種鑒定主要依據(jù)菌落形態(tài)，大分生孢子等。菌落應(yīng)與石膏樣毛癬菌鑒別。7.5.1.4犬小孢子菌(Microsporumcanis)本菌在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)，生長(zhǎng)快，菌落開始為絨毛狀，2周后呈羊毛狀并充滿斜面，菌落中央趨向粉末狀。菌落顏色由白色漸變?yōu)榈攸S色，反面呈桔黃或紅棕色。鏡檢可見直而有隔的菌絲體，以及很多中央寬大，兩端稍尖的紡錘形大分生孢子，大小為(15～20)μm×(60～125)μm、壁厚、表面粗糙有棘狀突起，尤其是孢子的尖端部分，多隔，一般5～15隔。小分生孢子較少，單細(xì)胞，呈棍棒狀，(2.5～3.5)μm×(4～7)μm?？梢娗蚺臓罹z、破梳狀菌絲、結(jié)節(jié)菌絲和厚壁孢子。在米粉培養(yǎng)基上室溫培養(yǎng)、菌絲較密，日久變?yōu)榉勰罹?，培養(yǎng)基呈棕黃色，鏡檢可見很多大分生孢子。菌種鑒定主要依據(jù)菌落狀態(tài)及大分生孢子的形態(tài)。7.5.1.5猴類毛癬菌(Trichophytonsimii)在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基室溫培養(yǎng)生長(zhǎng)快。菌落表面平或稍有皺褶和隆起，快速生長(zhǎng)，顆粒狀至粉末狀，正面白色至黃色，背面黃色或棕紅色。鏡檢可見較多棒狀大分生孢子，薄壁而光滑，約5-10個(gè)分隔，每隔大小不等，間隔處收縮明顯，后期大分生孢子內(nèi)的個(gè)別細(xì)胞擴(kuò)大，壁增厚，形成厚壁孢子，又稱內(nèi)生厚壁孢子。內(nèi)生厚壁孢子兩側(cè)的細(xì)胞常常變空破裂。游離的厚壁孢子呈凸透鏡狀，常帶有破裂細(xì)胞