天然藥物化學(xué)(改)-2省公開課一等獎(jiǎng)全國(guó)示范課微課金獎(jiǎng)?wù)n件

第二章糖和苷

SaccharidesandGlycosides

第1頁(yè)概述一、糖(saccharides)：碳水化合物(carbohydrates)，是自然界存在一類主要天然產(chǎn)物，是生命活動(dòng)所必需一類物質(zhì)。糖、核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)一起稱為生命活動(dòng)所必需四大類化合物。按照其聚合程度可分為單糖、低聚糖（寡糖）和多糖等。第2頁(yè)二、苷類又稱配糖體(glycosides)，是由糖或糖衍生物等與另一非糖物質(zhì)經(jīng)過半縮醛或半縮酮羥基與苷元脫水形成化合物。非糖體－X－糖（X＝C、O、S、N）非糖體：黃酮類、蒽醌類、生物堿類、萜類等第3頁(yè)三、糖和苷生理活性糖類占植物干重80～90％，在天然藥品治療疾病中，能夠看作是藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)運(yùn)載體。糖含有生理活性，如香菇多糖、豬苓多糖、黃芪多糖含有抗腫瘤活性，成為當(dāng)今研究領(lǐng)域熱點(diǎn)。苷類種類繁多，結(jié)構(gòu)不一，其生理活性也各種多樣成為當(dāng)今研究天然藥品中不可忽略一類成份。許多常見中藥比如人參、甘草、柴胡、黃芪、黃芩、桔梗、芍藥等都含有苷類。第4頁(yè)單糖結(jié)構(gòu)表示方法：

Fischer式Haworth式優(yōu)勢(shì)構(gòu)象式一、單糖結(jié)構(gòu)式表示方法單糖是多羥基醛或酮，是組成糖及其衍生物基本單元。第一節(jié)單糖立體化學(xué)第5頁(yè)第6頁(yè)

單糖在水溶液中形成半縮醛環(huán)狀結(jié)構(gòu)，即成呋喃糖和吡喃糖。α-D-Glcβ

-D-Glc含有六元環(huán)結(jié)構(gòu)糖——吡喃糖（pyranose）含有五元環(huán)結(jié)構(gòu)糖——呋喃糖（furanose）第7頁(yè)１．Fischer式:距離羰基最遠(yuǎn)手性碳原子上羥基在右側(cè)稱為D型糖，在左側(cè)稱為L(zhǎng)型糖。D-葡萄糖L-鼠李糖二、糖絕對(duì)構(gòu)型：D，L第8頁(yè)

L-鼠李糖（L-Rha）D-葡萄糖(D-Glc)２．Haworth式:

1)甲基五碳、六碳吡喃型糖，五碳呋喃型糖，看那個(gè)手性碳原子上取代基朝向，取代基向上-D型；取代基向下-L型。D-核糖（D-Rib）第9頁(yè)２）五碳吡喃型糖：C4-OH在面下為D型糖，在面上

為L(zhǎng)-型糖。D-木糖（D-Xyl）D-甘露糖D-半乳糖舉例

第10頁(yè)（一）原因：

單糖成環(huán)后形成了一個(gè)新手性碳原子，稱為端基碳。該碳原子形成一對(duì)異構(gòu)體為端基差向異構(gòu)體，有α、β兩種構(gòu)型。三、糖相對(duì)構(gòu)型：α、β

端基碳上H被稱為端基H，OH被稱為端－OH第11頁(yè)1、Fischer投影式：新形成羥基與距離羰基最遠(yuǎn)手性碳原子上羥基在同側(cè)時(shí)為α構(gòu)型，在異側(cè)時(shí)為β構(gòu)型。α-構(gòu)型β-構(gòu)型（二）表示：第12頁(yè)甲基五碳、六碳吡喃型糖：C5-R與端基羥基在同側(cè)為β構(gòu)型，異側(cè)為α構(gòu)型。α-D-葡萄糖β-D-葡萄糖2、Haworth投影式第13頁(yè)五碳呋喃型糖：C4-R與端基羥基在同側(cè)為β型，異側(cè)為α型。β-D-核糖α-D-核糖第14頁(yè)五碳吡喃型糖：C4-OH與端基碳上羥基在同側(cè)為α型，在異側(cè)為β型。β-D-木糖α-D-木糖第15頁(yè)一、單糖類（monosaccharide）天然單糖以五碳糖、六碳糖最多，多數(shù)在生物體內(nèi)呈結(jié)合狀態(tài)，只有葡萄糖、果糖等少數(shù)單糖游離存在。糖類物質(zhì)依據(jù)其能否水解和分子量大小分為單糖、低聚糖和多糖（一）五碳醛糖（aldopentose）

L-阿拉伯糖（L-arabinose,Ara)D-核糖（D-ribose,Rib）

D-木糖（D-xylose,Xyl）第二節(jié)糖和苷分類

ClassifyofSaccharidesandGlycosides

第16頁(yè)（二）六碳醛糖（aldohexoses）

D-葡萄糖（D-glucose,Glc）D-甘露糖（D-mannose,Man）

D-半乳糖（D-allose,All）

D-果糖（D-fructose,Fru）L-山梨糖（L-sorbose）（三）六碳酮糖（ketohexose,hexulose)第17頁(yè)（四）甲基五碳醛糖L-鼠李糖（L-rhamaose,Rha）L-夫糖（L-fucose）（五）支碳鏈糖

D-芹糖（D-apiose）

L-鏈酶糖(L-rhamaose,Rha）第18頁(yè)（六）氨基糖（aminosugar）NH32-氨基-2-去氧-D-葡萄糖（D-glucosaming）（七）去氧糖（deoxysugars）

碳霉糖（L-mycarose）第19頁(yè)（八）糖醛酸：?jiǎn)翁侵胁蓟谎趸婶然衔铩-葡萄糖醛酸（D-glucuronicacid）D-半乳糖醛酸（D-galactocuronic）（九）糖醇：?jiǎn)翁侵恤驶贿€原成羥基化合物。

D-山梨醇（D-mannitol)D-甘露醇（D-mannitol）第20頁(yè)二、低聚糖（oligosaccharides）

1.按含有單糖個(gè)數(shù)分為二糖、三糖、四糖等。2.按是否含有游離醛基和酮基分還原糖和非還原糖。含有游離醛基或酮基糖為還原糖。由半縮醛或半縮酮上羥基經(jīng)過脫水縮合而成聚糖沒有還原性，為非還原糖。由2～9個(gè)單糖經(jīng)過苷鍵結(jié)合而成直鏈或支鏈聚糖。第21頁(yè)槐糖（還原糖)蔗糖（非還原糖)β-D-Glcp-(1→2)-D-glcpα-D-Fruf-(1→1)-α-D-Glcp化學(xué)命名：把除末端糖之外叫糖基，并標(biāo)明連接位置和苷鍵構(gòu)型。第22頁(yè)植物中三糖大多是以蔗糖為基本結(jié)構(gòu)再接上其它單糖而成非還原性糖，四糖和五糖是三糖結(jié)構(gòu)再延長(zhǎng)，也是非還原性糖。二糖：蔗糖三糖：棉子糖四糖：水蘇糖五糖：毛蕊糖第23頁(yè)由十個(gè)以上單糖經(jīng)過苷鍵連接而成糖稱為多聚糖。三、多聚糖類（polysaccharides）3：按起源：植物多糖；動(dòng)物多糖分類：1、按功效：不溶于水作為動(dòng)植物支持組織多糖；溶于水作為動(dòng)植物貯存養(yǎng)料多糖。

2、按單糖組成：均多糖(homosaccharide)

（由同種單糖組成）和雜多糖(heterosaccharide)（由各種單糖組成）第24頁(yè)雜多糖：幾個(gè)糖名按字母次序排列后，再加字尾-an，

如葡萄甘露聚糖為glucomannan.系統(tǒng)命名：均多糖：在糖名后加字尾-an，如葡聚糖為glucan。常見植物多糖1.淀粉（starch）2.纖維素（cellulose）3.果聚糖（fructans)4.半纖維素（hemicellucose）5.樹膠（gum）6.粘液質(zhì)（mucilage）第25頁(yè)（一）定義：苷是由糖及其衍生物半縮醛或半縮酮羥基與非糖物質(zhì)（苷元）脫水形成一類化合物。新生成化學(xué)鍵為苷鍵。四、苷類(glycoside)(又稱配糖體)（二）組成：苷元(配基)：非糖物質(zhì)，常見有黃酮，蒽醌，三萜等。苷鍵：將二者連接起來化學(xué)鍵，可經(jīng)過O,N,S等原子或直接經(jīng)過N-N鍵相連。糖(或其衍生物，如氨基糖，糖醛酸等)苷類化合物命名：以-in或–oside作后綴。苷類第26頁(yè)1、依據(jù)苷元化學(xué)結(jié)構(gòu)類型：分為黃酮苷、蒽醌苷、苯丙素苷等。2、依據(jù)苷一些特殊性質(zhì)或生理活性：分為皂苷、強(qiáng)心苷等。3、依據(jù)在生物體內(nèi)是原生還是次生：分為原生苷（在植物體內(nèi)原存在苷）和次生苷（從原生苷中脫掉一個(gè)以上單糖苷）。4、依據(jù)連接單糖基個(gè)數(shù)：1個(gè)糖—單糖苷2個(gè)糖—雙糖苷3個(gè)糖—叁糖苷（三）分類：第27頁(yè)5、依據(jù)苷元連接糖基位置數(shù)：

1個(gè)位置成苷—單糖鏈苷2個(gè)位置成苷—雙糖鏈苷6、按端基碳構(gòu)型：分α苷，多為L(zhǎng)型；β苷，多為D型。7、依據(jù)苷鍵原子不一樣：分為氧苷（O－苷）、氮苷（N－苷）、硫苷（S－苷）、碳苷（C－苷）等。在天然界中最常見為O－苷。第28頁(yè)依據(jù)苷元成苷官能團(tuán)不一樣將氧苷分為以下幾類：

醇苷、酚苷、氰苷、酯苷、吲哚苷。（1）氧苷①醇苷：苷元上醇羥基與糖或糖衍生物半縮醛或半縮酮羥基脫一分子水縮合而成化合物。紅景天苷甘草酸第29頁(yè)②酚苷：苷元上酚羥基與糖或糖衍生物半縮醛或半縮酮羥基脫一分子水縮合而成化合物。天然藥品中為數(shù)很多,如：天麻苷第30頁(yè)③氰苷：是一類羥基腈與糖分子端基羥基間縮合衍生物，依據(jù)羥基與腈基位置不一樣有：主要有α-羥腈苷,如：苦杏仁苷亞麻氰苷α-羥基腈很不穩(wěn)定易在酸和酶催化作用下水解得到α-羥腈苷元，它性質(zhì)不穩(wěn)定很快就分解為醛或酮和氫氰酸，氫氰酸是止咳有效成份，也輕易引發(fā)人和動(dòng)物中毒。第31頁(yè)④酯苷（酰苷）：苷元上羧基與糖或糖衍生物半縮醛或半縮酮羥基脫一分子水縮合而成化合物。山慈菇苷A⑤吲哚苷：是吲哚醇羥基與糖脫水生成苷。靛苷菘藍(lán)苷第32頁(yè)苷元上巰基與糖或糖衍生物半縮醛或半縮酮羥基脫一分子水縮合而成化合物。蘿卜苷（2）硫苷第33頁(yè)苷元上氨基與糖或糖衍生物半縮醛或半縮酮羥基脫一分子水縮合而成化合物。腺苷巴豆苷（3）氮苷第34頁(yè)

苷元碳上氫與糖或糖衍生物半縮醛或半縮酮羥基脫一分子水縮合而成化合物。異牡荊素蘆薈苷（4）碳苷碳苷類化合物含有溶解度小、難以水解特點(diǎn)。第35頁(yè)一、溶解性

多OH：親水性，苷比對(duì)應(yīng)苷元水溶性強(qiáng)。糖分子中OH降低，親水性下降。如去氧糖、甲基糖、甲氧基糖苷水溶性均小于非去氧糖。

二、氧化反應(yīng)

糖分子中醛基、酮基、醇羥基，易被氧化，天然藥品中糖多形成苷，故有應(yīng)用意義主要是醇羥基氧化，尤其是選擇性作用于鄰二羥基氧化反應(yīng)將有利于糖立體結(jié)構(gòu)推斷。

第三節(jié)糖化學(xué)性質(zhì)第36頁(yè)

基本方式：作用緩解，選擇性高，限于同鄰二醇、α-氨基醇、α-羥基醛(酮)、鄰二酮和一些活性次甲基上，基本反應(yīng)以下：（一）過碘酸氧化反應(yīng)

是緩解而選擇性極高糖鄰二羥基氧化反應(yīng)，尤其是開裂1，2-二元醇反應(yīng)幾乎是定量進(jìn)行。

第37頁(yè)第38頁(yè)糖裂解第39頁(yè)過碘酸氧化反應(yīng)速度

反應(yīng)速度順式大于反式，這是由其反應(yīng)機(jī)理決定。

可見順式五元環(huán)狀酯中間體形成，同時(shí)該反應(yīng)速度也受介質(zhì)pH影響。過碘酸反應(yīng)終產(chǎn)物甲醛、甲酸均較穩(wěn)定，可被定量測(cè)定，用以推測(cè)糖結(jié)構(gòu)。

第40頁(yè)（二）糠醛形成反應(yīng)第41頁(yè)糠醛及衍生物與α-萘酚縮合物Molish反應(yīng)：試劑：濃H2SO4，α－萘酚Molish反應(yīng)用途：用來判別糖和苷，區(qū)分苷和苷元?？啡┭苌铮及坊蚍宇惪s合顯色（苯酚、萘酚、苯胺、蒽酮等）樣品＋濃H2SO4＋α－萘酚棕色環(huán)（單糖、低聚糖、多糖、苷）第42頁(yè)第四節(jié)苷鍵裂解

苷鍵裂解反應(yīng)就是使苷鍵切斷，從而更方便地了解苷元結(jié)構(gòu)、所連糖種類和組成、苷元與糖連接方式、糖與糖連接方式。３．按照所用催化劑不一樣可分為酸催化水解、堿催化水解、酶水解和過碘酸裂解等。苷鍵裂解方法有以幾個(gè)分類方法：１．按裂解程度可分為：全裂解和部分裂解；２．按所用方法可分為均相水解和雙相水解；第43頁(yè)一、酸催化水解苷鍵屬于縮醛結(jié)構(gòu)，易為稀酸催化水解。反應(yīng)普通在水或稀醇溶液中進(jìn)行。慣用酸有HCl,H2SO4,乙酸和甲酸等。苷鍵原子先質(zhì)子化，然后斷裂生成苷元和陽(yáng)碳離子或半椅式中間體，在水中溶劑化成糖。（一）反應(yīng)機(jī)理：第44頁(yè)以氧苷為例，其機(jī)理為：脫質(zhì)子質(zhì)子化脫苷元互變?nèi)軇┗?yáng)碳離子半椅型第45頁(yè)這主要包含兩個(gè)方面原因：(1)苷鍵原子上電子云密度(2)苷鍵原子空間環(huán)境

由上述機(jī)理能夠看出，影響水解難易程度關(guān)鍵原因在于苷鍵原子質(zhì)子化是否輕易進(jìn)行，有利于苷鍵原子質(zhì)子化原因，就可使水解輕易進(jìn)行。第46頁(yè)N-苷＞O-苷＞S-苷＞C-苷1、苷鍵原子不一樣，酸水解難易程度不一樣，其水解易難次序?yàn)椋海ǘ┧崴怆y易程度規(guī)律：2、糖部分：1）呋喃糖苷＞吡喃糖苷2）酮糖苷＞醛糖苷3）吡喃糖苷中：①吡喃環(huán)C5上取代基越大越難水解，水解速度為：五碳糖>甲基五碳糖>六碳糖>七碳糖②C5上有-COOH取代時(shí)，最難水解③去氧糖水解難易次序

2,6-二去氧糖苷＞2-去氧糖苷＞6-去氧糖苷＞羥基糖苷＞2-氨基糖苷第47頁(yè)3、苷元部分：1）芳香屬苷>脂肪屬苷如：酚苷>萜苷、甾苷2）當(dāng)苷元為小基團(tuán)時(shí),橫鍵苷鍵易水解；當(dāng)苷元為大基團(tuán)時(shí),豎鍵苷鍵易水解。(三）不足1、有時(shí)會(huì)造成苷元結(jié)構(gòu)改變2、不能反應(yīng)糖和糖連接位置（四）兩相水解法對(duì)酸不穩(wěn)定苷元，為了預(yù)防水解引發(fā)苷元結(jié)構(gòu)改變，可用兩相水解反應(yīng)。在水解液（稀H＋/H2O）中加入與水不相混溶有機(jī)溶劑（如苯等），使水解產(chǎn)生苷元馬上進(jìn)入有機(jī)相，防止苷元與酸長(zhǎng)時(shí)間接觸而遭到破壞。第48頁(yè)通常苷鍵對(duì)堿穩(wěn)定，不易被堿水解。而酯苷、酚苷、與羰基共軛烯醇苷、苷鍵β位有吸電子基團(tuán)苷易被堿水解。二、堿催化水解C2-OH與苷鍵成反式易于堿水解，得到1,6-糖酐；成順式則得到正常糖。第49頁(yè)慣用苷鍵水解酶：轉(zhuǎn)化糖酶－水解β-果糖苷鍵麥芽糖酶－水解α-D-葡萄糖苷鍵纖維素酶－水解β-D-葡萄糖苷鍵杏仁苷酶－水解β-六碳醛糖苷鍵

芥子苷酶－水解芥子苷鍵（S－苷鍵）三、酶催化水解反應(yīng)1、反應(yīng)條件溫和。特點(diǎn)：2、用酶水解苷鍵能夠獲知苷鍵構(gòu)型。3、可保持苷元結(jié)構(gòu)不變真正苷元。4、酶專屬性高，選擇性地催化水解某一構(gòu)型苷。第50頁(yè)特點(diǎn)：1、反應(yīng)條件溫和、易得到原苷元；2、可經(jīng)過產(chǎn)物推測(cè)糖種類、糖與糖連接方式以及氧環(huán)大小。四、過碘酸裂解反應(yīng)（Smith降解法）所用試劑為：NaIO4、NaBH4、稀酸適用范圍：苷元不穩(wěn)定苷和碳苷（得到連有一個(gè)醛基苷元）不適合：苷元上有鄰二醇羥基或易被氧化基團(tuán)苷。第51頁(yè)應(yīng)用于碳苷情況:第52頁(yè)

（一）化學(xué)位移規(guī)律：

端基質(zhì)子：4.3～6.0ppm

特點(diǎn):比較輕易識(shí)別，能確定糖基種類和個(gè)數(shù)

甲基質(zhì)子：～1.0ppm

特點(diǎn):比較輕易識(shí)別能確定甲基五碳糖種類和個(gè)數(shù)

糖上其余質(zhì)子信號(hào)：3.2～4.2ppm

特點(diǎn):信號(hào)集中,難以解析第五節(jié)糖NMR特征一、糖1H-NMR特征第53頁(yè)（二）苷鍵相對(duì)構(gòu)型判斷（α，β）1、利用（1-H/2-H）偶合常數(shù)（J）判斷：二面角90度J＝0Hz；二面角0或180度J＝6～8Hz；二面角60度J＝2～4Hz(1)當(dāng)2-H為直立鍵（a鍵）時(shí)，1位苷鍵取向不一樣，1-H與2-H兩面角不一樣，偶合常數(shù)亦不一樣：β-D-和α-L-型糖：1-H和2-H鍵為雙直立鍵，φ=180°，J＝6～8Hzα-D-和β-L-型糖：1-H為平伏鍵，2-H雙直立鍵，φ＝60°，J＝2～4Hz第54頁(yè)可經(jīng)過C1-H與C2-H偶合常數(shù)，來判斷苷鍵構(gòu)型（α、β）

β－苷J(rèn)H1－H2＝6～8Hz

α－苷J(rèn)H1－H2＝2～4Hz第55頁(yè)D-葡萄糖第56頁(yè)(2)當(dāng)2-H為平伏鍵（e鍵）情況下，1-H不論處于平伏鍵還是直立鍵，與2-H兩面夾角均約60度，故不能用該法判斷苷鍵構(gòu)型。β-D-甘露糖苷α-D-甘露糖苷第57頁(yè)

2、利用門控偶技術(shù)能夠得到端基質(zhì)子和端基碳偶合常數(shù)，即1JC1-H1來區(qū)分。如吡喃糖苷當(dāng)1-H是橫鍵質(zhì)子(α-苷鍵)時(shí)，J=170Hz，當(dāng)1-H是豎鍵質(zhì)子(β-苷鍵)時(shí)，J=160Hz。第58頁(yè)二、糖13C-NMR特征

１、糖上碳信號(hào)可分為幾類，大致范圍為：

CH3→δ18(甲基五碳糖C6)；CH2OH→δ62(C5或C6)；CHOH→δ70∽85(C2\C3\C4)；端基碳→δ95∽110（α-型為97～101，而β-型為103～106ppm）；

糖上甲氧基碳→δ65。

第59頁(yè)2、苷化位移（GS）苷化位移值和苷元結(jié)構(gòu)相關(guān)，與糖種類無關(guān)。比如：

C1位移C2位移

β-D-葡萄糖96.775.1甲基-β-D-葡萄糖苷104.0+8.374.1-1.0β-D-半乳糖97.372.9甲基-β-D-半乳糖104.5+8.371.7-0.8α-L-鼠李吡喃糖95.171.9甲基-α-L-鼠李糖苷102.6+7.572.1-0.2定義：糖苷化后，端基碳和苷元α-C化學(xué)位移值均向低場(chǎng)移動(dòng)，而鄰碳稍向高場(chǎng)移動(dòng)（偶而也有向低場(chǎng)移動(dòng)），對(duì)其余碳影響不大，這種苷化前后化學(xué)改變，稱苷化位移。第60頁(yè)3、13C-NMR意義

CH3扣除苷元CH3信號(hào)后可提醒甲基五碳糖存在數(shù)（δ18）；δ95∽110間示苷分子中糖個(gè)數(shù)；端基碳詳細(xì)峰值可推斷苷鍵構(gòu)型；由13C-NMR中苷化位移可推斷糖與苷元連接位置。

第61頁(yè)一、研究糖鏈結(jié)構(gòu)普通程序（一）純度判定

▲多糖純度判定：多用比旋度法(恒定不改變)；高壓電泳法，熔點(diǎn)，TLC、HPLC?！茄苌镘占兌扰卸ǎ篢LC、HPLC。

第六節(jié)糖鏈結(jié)構(gòu)測(cè)定第62頁(yè)（二）分子量測(cè)定

▲單糖、低聚糖及其苷分子量測(cè)定：當(dāng)前主要用MS法，但因?yàn)樗鼈優(yōu)槎嗔u基化合物，普通EI-MS往往測(cè)得最高質(zhì)量峰為M-H2O，而并非分子離子峰；所以，多采取FD-MS、FAB-MS等。

▲多糖分子量測(cè)定：當(dāng)前仍沿用經(jīng)典高分子化合物分子量測(cè)定方法，如粘度法、沉降法等，甚至僅僅測(cè)定標(biāo)示其平均分子量。

第63頁(yè)(三)組成苷苷元和單糖判定將苷用稀酸或酶進(jìn)行水解，使生成苷元和各種單糖，然后再對(duì)這些水解產(chǎn)物進(jìn)行判定。1、苷元結(jié)構(gòu)判定苷元結(jié)構(gòu)類型不一，需要經(jīng)過一些化學(xué)反應(yīng)先確定其結(jié)構(gòu)類型和基本母核結(jié)構(gòu)，再按照所屬類型分別進(jìn)行研究，其方法將在相關(guān)章節(jié)中逐一介紹。2、組成苷中糖種類判定通常采取PC、TLC、GC或HPLC等方法對(duì)水解液進(jìn)行判定，也能夠直接經(jīng)過解析苷二維NMR譜進(jìn)行判定。

第64頁(yè)3、苷中糖數(shù)目標(biāo)測(cè)定

利用PC或TLC法判定苷水解液中糖種類，也可深入采取薄層掃描法測(cè)定單糖斑點(diǎn)含量，算出各單糖分子比，推測(cè)糖數(shù)目。

近年來：利用質(zhì)譜測(cè)定苷和苷元分子量差值，求出糖數(shù)目。利用氫譜，依據(jù)端基質(zhì)子信號(hào)數(shù)目確定糖分子數(shù)目；利用碳譜，依據(jù)端基碳信號(hào)數(shù)目(普通位于90～112ppm處)，或者依據(jù)苷分子總碳信號(hào)數(shù)目與苷元碳信號(hào)數(shù)目標(biāo)差值，推斷出糖數(shù)目。另外利用二維1H-1H相關(guān)譜和1H-13C相關(guān)譜，也是確定苷中糖數(shù)目標(biāo)有效方法。第65頁(yè)（四）單糖間、糖與苷元間連接位置確實(shí)定

1、苷元與糖間連接位置確實(shí)定以前經(jīng)過化學(xué)降解或酶解得到產(chǎn)物來確定，現(xiàn)逐步被13C-NMR譜（苷化位移法）方法所取代。

將苷或低聚糖先行甲醚化或乙?；?，測(cè)得其13C-NMR譜，然后將其水解，再測(cè)其水解產(chǎn)物13C-NMR譜，歸屬比較其改變，以推斷苷鍵連接位置。第66頁(yè)水解前后△δ：C229.732.0-2.3

C377.070.9+6.1C434.338.4-4.1因成苷引發(fā)化學(xué)位移改變，專業(yè)上稱之為苷化位移（glycosidationshift）。

第67頁(yè)2、糖鏈連接次序確實(shí)定經(jīng)典方法：緩解水解；酶解；乙酰解等這些方法都是將苷部分裂解成次級(jí)苷或低聚糖，再分析判定糖碎片。即使經(jīng)典方法至今還有一定實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，但日新月異波譜技術(shù)已正在取代其角色。第68頁(yè)-6-4

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▲MS法測(cè)定糖鏈連接次序

◆技術(shù)→FD-MS、FAB-MS等?！魞?yōu)點(diǎn)→無須制備衍生物,用量小,準(zhǔn)確,簡(jiǎn)便。

第69頁(yè)-6-4

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▲NMR法測(cè)定糖鏈連接次序是將糖及其苷類衍生物全乙?；螅瑴y(cè)定觀察兩糖之間質(zhì)子遠(yuǎn)程偶合或NOE效應(yīng)，以期確定糖連接次序。

第70頁(yè)（五）苷鍵構(gòu)型確實(shí)定

糖與苷元之間苷鍵及糖與糖之間苷鍵屬于縮醛鍵，因而都存在有糖端基碳原子構(gòu)型問題。確定苷鍵構(gòu)型方法主要有以下幾個(gè)。

1、利用酶水解進(jìn)行測(cè)定如麥芽糖酶普通能水解為α-苷鍵，能被苦杏仁苷酶水解大多為β-苷鍵。利用酶解法推斷苷鍵構(gòu)型時(shí)需注意并非全部α-苷鍵都能被苦杏仁苷酶所水解。2、利用NMR譜法測(cè)定1）利用端基質(zhì)子偶合常數(shù)2）利用α-苷鍵和β-苷鍵端基碳化學(xué)位移差異