《臨床微生物學(xué)》課件

臨床微生物學(xué)探索微觀世界，了解疾病本源課程目標(biāo)與內(nèi)容掌握基礎(chǔ)理論學(xué)習(xí)微生物分類與特性實(shí)驗(yàn)室診斷技能培養(yǎng)標(biāo)本采集和檢測(cè)方法病原體識(shí)別了解常見(jiàn)病原體特征臨床應(yīng)用臨床微生物學(xué)的歷史發(fā)展117世紀(jì)列文虎克發(fā)明顯微鏡，首次觀察微生物219世紀(jì)巴斯德建立細(xì)菌學(xué)，發(fā)現(xiàn)微生物致病理論320世紀(jì)初弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉素，開(kāi)啟抗生素時(shí)代4現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)革命性改變微生物檢測(cè)方法臨床微生物學(xué)在醫(yī)學(xué)中的重要性精準(zhǔn)診斷確定病原體種類和特性治療指導(dǎo)藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)抗生素選擇疾病預(yù)防監(jiān)測(cè)流行病學(xué)和耐藥性趨勢(shì)微生物的分類細(xì)菌原核生物，無(wú)核膜，含肽聚糖細(xì)胞壁病毒非細(xì)胞結(jié)構(gòu)，依賴宿主細(xì)胞復(fù)制真菌真核生物，含幾丁質(zhì)細(xì)胞壁寄生蟲(chóng)在宿主體內(nèi)生存的多細(xì)胞生物細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁提供形態(tài)和保護(hù)，分為革蘭陽(yáng)性和陰性細(xì)胞膜選擇性屏障，調(diào)節(jié)物質(zhì)進(jìn)出核質(zhì)含DNA，無(wú)核膜包裹附屬結(jié)構(gòu)鞭毛、菌毛和莢膜等特殊結(jié)構(gòu)細(xì)菌的生理特性代謝類型異養(yǎng)型、自養(yǎng)型、兼性菌等多種代謝方式生長(zhǎng)條件溫度、pH值、氧氣需求等影響生長(zhǎng)產(chǎn)酶特性產(chǎn)生多種酶類，參與代謝和致病過(guò)程毒素產(chǎn)生外毒素和內(nèi)毒素是致病重要因素細(xì)菌的遺傳與變異基因突變自發(fā)或誘導(dǎo)DNA改變質(zhì)粒傳遞通過(guò)接合作用傳遞遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用噬菌體介導(dǎo)的DNA傳遞轉(zhuǎn)化作用吸收環(huán)境中的外源DNA細(xì)菌的生長(zhǎng)與繁殖時(shí)間(小時(shí))菌落數(shù)(對(duì)數(shù)值)細(xì)菌生長(zhǎng)曲線包括：延滯期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、衰退期二分裂是主要繁殖方式，世代時(shí)間短，復(fù)制迅速病毒的基本結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)外殼由衣殼蛋白組成，保護(hù)病毒核酸核酸基因組DNA或RNA，單鏈或雙鏈形式包膜部分病毒具有，源自宿主細(xì)胞膜表面蛋白介導(dǎo)病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合病毒的復(fù)制周期吸附病毒表面蛋白與宿主受體結(jié)合穿透病毒核酸進(jìn)入宿主細(xì)胞生物合成利用宿主機(jī)制合成病毒成分組裝病毒核酸和蛋白質(zhì)組裝成病毒顆粒釋放新病毒顆粒離開(kāi)宿主細(xì)胞真菌的基本特征結(jié)構(gòu)特點(diǎn)真核生物細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)菌絲或酵母形態(tài)生長(zhǎng)方式多樣分類絲狀真菌酵母菌二相型真菌皮膚癬菌繁殖無(wú)性繁殖為主產(chǎn)生各類孢子部分有有性生殖生長(zhǎng)速度較細(xì)菌慢寄生蟲(chóng)的基本特征寄生蟲(chóng)分類：原蟲(chóng)、蠕蟲(chóng)和節(jié)肢動(dòng)物生活史復(fù)雜，常需中間宿主多種傳播途徑：食物、水、昆蟲(chóng)等微生物與宿主的相互作用1共生關(guān)系微生物和宿主互利2定植微生物在宿主表面生長(zhǎng)而不致病感染微生物入侵并損害宿主免疫系統(tǒng)概述細(xì)胞成分白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等體液成分抗體、補(bǔ)體和細(xì)胞因子等免疫器官骨髓、胸腺、脾臟和淋巴結(jié)等先天性免疫反應(yīng)0小時(shí)即刻反應(yīng)微生物入侵后立即激活4種物理屏障皮膚、黏膜、纖毛、胃酸5類免疫細(xì)胞中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞等多種可溶性因子補(bǔ)體、干擾素、溶菌酶等獲得性免疫反應(yīng)特點(diǎn)體液免疫細(xì)胞免疫主要細(xì)胞B淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞效應(yīng)分子抗體(免疫球蛋白)細(xì)胞因子主要靶標(biāo)細(xì)胞外病原體細(xì)胞內(nèi)病原體激活時(shí)間數(shù)天至數(shù)周數(shù)天至數(shù)周記憶特性有記憶細(xì)胞有記憶細(xì)胞微生物的致病機(jī)制黏附和定植通過(guò)特異性結(jié)構(gòu)附著于宿主細(xì)胞入侵突破宿主防御屏障毒素產(chǎn)生釋放內(nèi)毒素或外毒素?fù)p害組織免疫逃避通過(guò)多種機(jī)制躲避宿主免疫攻擊細(xì)菌感染的病理生理學(xué)炎癥反應(yīng)紅、腫、熱、痛，局部白細(xì)胞浸潤(rùn)膿腫形成化膿性細(xì)菌引起組織壞死和膿液積聚全身癥狀發(fā)熱、白細(xì)胞增多、器官功能障礙組織修復(fù)纖維化、瘢痕形成、功能損傷病毒感染的病理生理學(xué)細(xì)胞病變病毒復(fù)制導(dǎo)致細(xì)胞死亡1細(xì)胞融合形成多核巨細(xì)胞2包涵體特征性細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)3免疫反應(yīng)免疫介導(dǎo)的組織損傷4真菌感染的病理生理學(xué)組織侵襲菌絲直接穿透組織過(guò)敏反應(yīng)對(duì)真菌抗原產(chǎn)生超敏反應(yīng)肉芽腫形成慢性真菌感染特征性病變寄生蟲(chóng)感染的病理生理學(xué)機(jī)械損傷蠕蟲(chóng)運(yùn)動(dòng)、吸附和穿透引起組織損傷腸道蛔蟲(chóng)可引起腸梗阻營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)吸收宿主營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致宿主營(yíng)養(yǎng)缺乏鉤蟲(chóng)吸血可引起貧血免疫反應(yīng)宿主對(duì)寄生蟲(chóng)的持續(xù)免疫反應(yīng)產(chǎn)生嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化臨床微生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程個(gè)人防護(hù)實(shí)驗(yàn)服、手套、口罩生物安全柜操作避免飲食、吸煙標(biāo)本處理密閉容器運(yùn)輸潛在危險(xiǎn)標(biāo)記避免氣溶膠產(chǎn)生廢棄物處理高壓滅菌化學(xué)消毒專用容器收集意外處理溢灑處理程序暴露后預(yù)防事故報(bào)告制度無(wú)菌操作技術(shù)手部準(zhǔn)備徹底洗手消毒，戴無(wú)菌手套接種環(huán)滅菌酒精燈火焰灼燒至紅熱，冷卻后使用試管操作開(kāi)口斜放，避免外部污染4培養(yǎng)皿接種迅速操作，減少暴露時(shí)間臨床標(biāo)本的采集血液尿液痰液傷口拭子糞便其他標(biāo)本采集原則：正確時(shí)機(jī)，無(wú)菌條件，足夠量，代表性部位采集前避免抗生素使用，確保標(biāo)本質(zhì)量標(biāo)本的運(yùn)送與保存溫度控制常溫、4°C或-70°C根據(jù)需要保存時(shí)間限制大多數(shù)標(biāo)本2小時(shí)內(nèi)送檢容器選擇無(wú)菌、密閉、專用容器運(yùn)送培養(yǎng)基特殊標(biāo)本需專用保存液顯微鏡檢查技術(shù)涂片制備薄而均勻的涂片自然干燥或熱固定避免污染和氣泡染色方法革蘭染色抗酸染色熒光染色墨汁負(fù)染鏡檢技巧低倍找視野高倍觀察細(xì)節(jié)油鏡細(xì)看形態(tài)系統(tǒng)掃描整個(gè)視野培養(yǎng)基的種類與應(yīng)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂，支持大多數(shù)非挑剔菌生長(zhǎng)選擇培養(yǎng)基：抑制某些菌種，利于目標(biāo)菌分離鑒別培養(yǎng)基：通過(guò)生化反應(yīng)區(qū)分不同菌種富集培養(yǎng)基：添加特殊營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)特定菌生長(zhǎng)細(xì)菌的分離與培養(yǎng)1接種將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基劃線分離稀釋涂布獲得單菌落3培養(yǎng)適宜溫度和條件下孵育細(xì)菌的鑒定方法1分子鑒定PCR和測(cè)序，精確度高血清學(xué)方法抗原抗體反應(yīng)特異性鑒定3生化反應(yīng)酶活性和代謝產(chǎn)物檢測(cè)形態(tài)學(xué)檢查菌落特征和顯微鏡形態(tài)病毒的分離與培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)各種細(xì)胞系支持不同病毒生長(zhǎng)雞胚培養(yǎng)適用于流感病毒等培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種特殊病毒需活體動(dòng)物繁殖細(xì)胞病變觀察通過(guò)特征性細(xì)胞變化識(shí)別病毒病毒的鑒定方法1-2天快速檢測(cè)法抗原檢測(cè)，快速但敏感性較低3-5天細(xì)胞培養(yǎng)法觀察細(xì)胞病變效應(yīng)4-6小時(shí)分子檢測(cè)法PCR技術(shù)，高靈敏度和特異性1-2周血清學(xué)檢測(cè)抗體滴度變化判斷感染真菌的分離與培養(yǎng)培養(yǎng)基沙氏培養(yǎng)基是常用真菌選擇性培養(yǎng)基添加抗生素抑制細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)條件25-30°C培養(yǎng)，濕度控制培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，可達(dá)4周菌落特征絲狀、絨毛狀或酵母樣菌落顏色、質(zhì)地和生長(zhǎng)速度各異真菌的鑒定方法形態(tài)學(xué)鑒定觀察菌絲、孢子特征1培養(yǎng)特性菌落外觀和生長(zhǎng)速度2生化試驗(yàn)酵母菌碳水化合物利用譜分子技術(shù)PCR和測(cè)序精確識(shí)別4寄生蟲(chóng)的檢查方法糞便檢查直接涂片、濃縮法和染色法檢測(cè)腸道寄生蟲(chóng)血液檢查厚、薄血涂片檢測(cè)血液寄生蟲(chóng)如瘧原蟲(chóng)組織檢查活檢和切片檢查組織中的寄生蟲(chóng)4免疫學(xué)檢查血清學(xué)方法檢測(cè)特異性抗體抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法簡(jiǎn)便易行，半定量結(jié)果E-test法測(cè)定最低抑菌濃度，準(zhǔn)確定量肉湯稀釋法標(biāo)準(zhǔn)參考方法，精確但耗時(shí)血清學(xué)診斷方法凝集反應(yīng)檢測(cè)抗原與抗體的可見(jiàn)凝集1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)高靈敏度抗原或抗體檢測(cè)2免疫印跡法確認(rèn)檢測(cè)，特異性高3免疫熒光法直接檢測(cè)組織中抗原4分子生物學(xué)診斷技術(shù)核酸提取從標(biāo)本中分離DNA/RNAPCR擴(kuò)增特異引物擴(kuò)增目標(biāo)序列產(chǎn)物檢測(cè)熒光、電泳或雜交技術(shù)結(jié)果分析與對(duì)照比較判斷陽(yáng)性陰性自動(dòng)化微生物檢測(cè)系統(tǒng)血培養(yǎng)自動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)：快速檢測(cè)菌血癥生化鑒定系統(tǒng)：自動(dòng)完成多種生化反應(yīng)質(zhì)譜鑒定系統(tǒng)：蛋白質(zhì)指紋圖譜快速鑒定自動(dòng)化核酸檢測(cè)平臺(tái)：標(biāo)準(zhǔn)化分子診斷革蘭陽(yáng)性球菌感染及診斷金黃色葡萄球菌血瓊脂產(chǎn)金黃色溶血菌落凝固酶陽(yáng)性，可致化膿感染表皮葡萄球菌凝固酶陰性，常為機(jī)會(huì)致病菌與植入物相關(guān)感染重要病原鏈球菌屬β溶血，致咽炎、猩紅熱等莫氏試驗(yàn)和碳水化合物發(fā)酵試驗(yàn)鑒定革蘭陰性球菌感染及診斷腦膜炎奈瑟菌腦膜炎重要病原，革蘭陰性雙球菌淋病奈瑟菌性傳播疾病，胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌莫拉菌屬呼吸道感染，短桿狀革蘭陰性菌培養(yǎng)特點(diǎn)巧克力瓊脂培養(yǎng)，需要特殊大氣環(huán)境腸桿菌科細(xì)菌感染及診斷革蘭陰性桿菌，氧化酶陰性，發(fā)酵葡萄糖分離：麥康凱瓊脂和EMB瓊脂鑒定：生化反應(yīng)譜，API系統(tǒng)，VITEK系統(tǒng)非發(fā)酵菌感染及診斷銅綠假單胞菌產(chǎn)藍(lán)綠色素氧化酶陽(yáng)性耐多藥特性不動(dòng)桿菌屬自然耐藥性強(qiáng)危險(xiǎn)菌株增多醫(yī)院感染常見(jiàn)嗜麥芽窄食單胞菌囊性纖維化患者肺部感染特殊培養(yǎng)條件生化鑒定復(fù)雜厭氧菌感染及診斷梭狀芽胞桿菌屬產(chǎn)氣壞疽，艱難梭菌相關(guān)腹瀉擬桿菌屬腹腔感染常見(jiàn)厭氧菌培養(yǎng)技術(shù)厭氧環(huán)境，特殊培養(yǎng)基和厭氧指示劑分枝桿菌感染及診斷1結(jié)核分枝桿菌抗酸染色陽(yáng)性，生長(zhǎng)緩慢，L-J培養(yǎng)基2麻風(fēng)分枝桿菌無(wú)法體外培養(yǎng)，組織切片染色診斷3非結(jié)核分枝桿菌環(huán)境常見(jiàn)，條件致病，鑒定復(fù)雜4診斷方法抗酸染色，培養(yǎng)，PCR和基因芯片技術(shù)螺旋體感染及診斷蒼白螺旋體梅毒病原體，暗視野顯微鏡觀察疏螺旋體萊姆病，回歸熱，特殊培養(yǎng)基需要鉤端螺旋體鉤端螺旋體病，EMJH半固體培養(yǎng)基血清學(xué)診斷TPPA，ELISA，WesternBlot等方法衣原體和支原體感染及診斷特點(diǎn)無(wú)細(xì)胞壁，不能在無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基上生長(zhǎng)抗生素敏感譜特殊，β-內(nèi)酰胺類無(wú)效常見(jiàn)感染肺炎支原體：社區(qū)獲得性肺炎解脲支原體：泌尿生殖道感染沙眼衣原體：性傳播疾病，結(jié)膜炎診斷方法細(xì)胞培養(yǎng)分離抗原檢測(cè)：DFA，ELISA分子診斷：PCR，LAMP呼吸道病毒感染及診斷流感病毒急性發(fā)熱，全身癥狀明顯1冠狀病毒從普通感冒到重癥肺炎呼吸道合胞病毒嬰幼兒下呼吸道感染常見(jiàn)腺病毒咽結(jié)膜熱，呼吸道和消化道癥狀4腸道病毒感染及診斷70%輪狀病毒兒童腹瀉主要病毒性病原15%諾如病毒成人急性胃腸炎常見(jiàn)10%柯薩奇病毒手足口病重要病原5%其他腸道病毒星狀病毒，腺病毒等肝炎病毒感染及診斷病毒類型傳播途徑主要標(biāo)志物檢測(cè)方法甲型肝炎糞-口途徑抗-HAVIgMELISA乙型肝炎血液，性接觸HBsAg，抗-HBcELISA，PCR丙型肝炎血液傳播抗-HCV，HCVRNAELISA，RT-PCR丁型肝炎與HBV共感染抗-HDV，HDVRNAELISA，RT-PCR戊型肝炎糞-口途徑抗-HEVIgMELISA皰疹病毒感染及診斷單純皰疹病毒1型唇皰疹，腦炎；Tzanck涂片，DFA，PCR單純皰疹病毒2型生殖器皰疹；培養(yǎng)，抗原檢測(cè)，PCR水痘-帶狀皰疹病毒水痘，帶狀皰疹；FAMA，PCR巨細(xì)胞病毒先天性感染，免疫抑制者感染；pp65抗原，PCR人類免疫缺陷病毒感染及診斷篩查試驗(yàn)第四代ELISA檢測(cè)抗原和抗體確認(rèn)試驗(yàn)免疫印跡確認(rèn)特異性抗體病毒載量測(cè)定RT-PCR定量檢測(cè)HIVRNA免疫功能評(píng)估CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)淺部真菌感染及診斷皮膚癬菌體癬，手足癬，頭癬等白色念珠菌鵝口瘡，外陰陰道炎馬拉色菌花斑癬，脂溢性皮炎深部真菌感染及診斷念珠菌病侵襲性感染，血流感染隱球菌病腦膜炎，印度墨汁染色曲霉病肺部感染，球形分生孢子頭組織胞漿菌病肺部感染，組織中酵母形態(tài)常見(jiàn)寄生蟲(chóng)感染及診斷蠕蟲(chóng)類：糞便檢查，成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵形態(tài)原蟲(chóng)類：直接鏡檢，特殊染色血液寄生蟲(chóng)：血涂片，厚薄片組織寄生蟲(chóng)：活檢，血清學(xué)醫(yī)院感染的微生物學(xué)監(jiān)測(cè)1干預(yù)措施基于監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)實(shí)施干預(yù)數(shù)據(jù)分析確定流行趨勢(shì)和爆發(fā)標(biāo)本采集環(huán)境和患者標(biāo)本系統(tǒng)收集抗微生物藥物耐藥性監(jiān)測(cè)常規(guī)藥敏試驗(yàn)監(jiān)測(cè)分子耐藥機(jī)制檢測(cè)建立耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)定期發(fā)布耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)告新發(fā)傳染病的實(shí)驗(yàn)室診斷快速響應(yīng)生物