獸醫(yī)微生物學(xué)培訓(xùn)課件

獸醫(yī)微生物學(xué)

(多媒體教學(xué)課件)天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)科系動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)教研室制作2003/02/281999\12\280021計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要緒言

共六部分，介紹微生物與微生物學(xué)的概念，微生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史，微生物學(xué)理論與技術(shù)成就及應(yīng)用，獸醫(yī)微生物學(xué)的地位、任務(wù)與貢獻(xiàn)。細(xì)菌總論

共七章，介紹細(xì)菌的形態(tài)、構(gòu)造、生理，消毒與滅菌，細(xì)菌生態(tài)、致病機(jī)理、遺傳變異，細(xì)菌分類(lèi)與命名等。免疫基礎(chǔ)

共七章，介紹抗原抗體，免疫系統(tǒng)，抗感染免疫，變態(tài)反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)，免疫技術(shù)及應(yīng)用等。細(xì)菌各論

共十二章，介紹各屬重要病原細(xì)菌的形態(tài)、生化特性、致病性、微生物學(xué)診斷和免疫防治等。真菌

共二章，介紹真菌的分類(lèi)、形態(tài)、生化及致病特性，真菌病的診斷與防治等。病毒

共十四章，介紹病毒的形態(tài)、構(gòu)造、繁殖、遺傳、培養(yǎng)，病毒的致病性。各科屬重要病毒形態(tài)、生化及致病特性，微生物學(xué)診斷和防治等。實(shí)驗(yàn)

共十多個(gè)，顯微鏡油鏡的使用，細(xì)菌形態(tài)及構(gòu)造觀察，細(xì)菌抹片制備及染色，培養(yǎng)基的制備，細(xì)菌的分離培養(yǎng)、生長(zhǎng)表現(xiàn)觀察、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)，沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)，重要病原菌的認(rèn)識(shí)，真菌與病毒培養(yǎng)測(cè)定等。內(nèi)容簡(jiǎn)介1999\12\280022計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要第十五章

革蘭氏陽(yáng)性球菌第十六章腸桿菌科第十七章弧菌科第十八章巴氏桿菌科及相關(guān)屬第十九章革蘭氏陰性需氧桿菌第二十章革蘭氏陰性無(wú)芽孢微需氧和厭氧菌第二十一章革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌第二十二章革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌第二十三章分支桿菌及相似屬第二十四章螺旋體第二十五章霉形體第二十六章立克次體及衣原體第三篇細(xì)菌學(xué)各論1999\12\280023計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要第二十四章螺旋體第一節(jié)概述第二節(jié)疏螺旋體屬第三節(jié)蛇形螺旋體屬第四節(jié)密螺旋體屬第五節(jié)細(xì)螺旋體屬第三篇1999\12\280024計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要第一節(jié)

概述螺旋體是一類(lèi)細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀、能活潑運(yùn)動(dòng)的原核單細(xì)胞微生物。它的基本結(jié)構(gòu)與細(xì)菌類(lèi)似，細(xì)胞壁中有脂多糖和壁酸，胞漿內(nèi)含核質(zhì)，以二分裂繁殖。依靠位于胞壁和胞膜間的軸絲的屈曲和旋轉(zhuǎn)使其運(yùn)動(dòng)，這與原蟲(chóng)類(lèi)似。所以螺旋體是介于細(xì)菌和原蟲(chóng)之間的一類(lèi)微生物。螺旋體廣泛存在于水生環(huán)境，也有許多分布在人和動(dòng)物體內(nèi)。大部分營(yíng)自由的腐生生活或共生，無(wú)致病性，只有一小部分可引起人和動(dòng)物的疾病。第24章1999\12\280025計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)螺旋體細(xì)胞呈螺旋狀圓柱形，具有多個(gè)完整的螺旋。其大小極為懸殊，長(zhǎng)可為5-250um，寬可為0.1-3um。某些可通過(guò)細(xì)菌濾器。細(xì)胞的螺數(shù)、螺間及弧幅各不相同，在分類(lèi)上有意義。軸絲螺旋體的細(xì)胞中心為原生質(zhì)柱，外有2-100根以上的軸絲，又稱(chēng)軸鞭毛或內(nèi)鞭毛，現(xiàn)亦簡(jiǎn)稱(chēng)為鞭毛，沿原生質(zhì)柱的長(zhǎng)軸纏繞其上。軸絲夾在細(xì)胞壁外鞘和細(xì)胞膜之間。螺旋體通過(guò)軸絲而運(yùn)動(dòng)，主要有3種方式：①沿長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)，快速前進(jìn)；②細(xì)胞屈曲伸縮前進(jìn)；③螺旋狀或蛇狀前進(jìn)。第24章1999\12\280026計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要螺旋體具有不定形的核，無(wú)芽孢，核酸兼有RNA和DNA，以二等分橫分裂法繁殖。

染色特性都是革蘭氏陰性，多數(shù)不易著色。姬姆薩氏染色效果較好，可染成紅色或藍(lán)色。藍(lán)色多屬腐生性螺旋體。常用鍍銀染色法染色，使之變租而顯黑褐色。也用印度墨汁或剛果紅負(fù)染，螺旋體透明無(wú)色，背景襯有顏色，反差明顯。以相差和暗視野顯微鏡觀察螺旋體效果良好。能檢查形體又可分辨運(yùn)動(dòng)方式，甚為常用。第24章1999\12\280027計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要2.培養(yǎng)特性螺旋體的培養(yǎng)有的較為困難，多數(shù)需厭氧培養(yǎng)。但有些屬種，特別是細(xì)螺旋體(又稱(chēng)鉤端螺旋體)的培養(yǎng)并不難。個(gè)別致病性螺旋體可采用含血液、腹水或其他特殊成分的培養(yǎng)基培養(yǎng)。有些螺旋體尚不能用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)。3.分類(lèi)螺旋體目，下分為兩個(gè)科，即螺旋體科和細(xì)螺旋體科。細(xì)螺旋體科只有一個(gè)屬，即細(xì)螺旋體屬（鉤端螺旋體屬）。螺旋體科又由螺旋體屬、脊螺旋體屬、密螺旋體屬、疏螺旋體屬和蛇形螺旋體屬五個(gè)屬組成。其中與獸醫(yī)有關(guān)的主要有疏螺旋體屬、密螺旋體屬、蛇形螺旋體屬和細(xì)螺旋體屬。第24章1999\12\280028計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要第24章1999\12\280029計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要

第二節(jié)疏螺旋體屬本屬成員細(xì)胞呈螺旋狀，長(zhǎng)3-20um，寬0.2-0.5um，每條菌體有3-10個(gè)不規(guī)則的疏松螺旋，有15-20根軸絲。以螺旋狀推進(jìn)方式活潑運(yùn)動(dòng)。用姬姆薩氏染液著色良好。易培養(yǎng)，微需氧或厭氧。伯氏疏螺旋體是萊姆病(Lymedisease)的病原體。萊姆病最早于1975年在美國(guó)的萊姆鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)，故而得名，現(xiàn)己遍布全世界。此病由硬蜱為傳播媒介，感染人和犬、牛、馬等動(dòng)物，致關(guān)節(jié)炎等多種疾病。第24章1999\12\2800210計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要1.生物學(xué)特性菌體細(xì)長(zhǎng)，長(zhǎng)約20-30um，直徑約0.2um，有4-20個(gè)大而寬疏的螺旋。其鞭毛纏繞著菌體，位于外膜和胞漿膜之間，稱(chēng)之為軸鞭毛。2.致病性伯氏疏螺旋體致人、犬、牛和馬的關(guān)節(jié)炎，被硬蜱叮咬的部位呈圓環(huán)狀疹塊，之后表現(xiàn)為游走性關(guān)節(jié)炎，可見(jiàn)破行、關(guān)節(jié)腫脹，發(fā)熱及淋巴結(jié)腫大。硬蜱在吸吮感染動(dòng)物的血液之后，便可在數(shù)年內(nèi)都具有傳染性。嚙齒動(dòng)物是伯氏疏螺旋體的天然貯主。第24章1999\12\2800211計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要3.微生物學(xué)檢查蜱叮咬部的附近皮膚、患病關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)液可用于病原學(xué)檢測(cè)。用暗視野顯微鏡或作姬姆薩染色等可觀察到疏螺旋體。伯氏疏螺旋體培養(yǎng)困難，可用改良的Kelley氏培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，培養(yǎng)物每周用暗視野顯微鏡檢查。血清學(xué)診斷可行。ELISA最為常用。犬在感染4周后即可測(cè)出抗體，3個(gè)月后抗體達(dá)高峰，此時(shí)犬可持續(xù)感染。抗體滴度維持高水平至少18個(gè)月。PCR、限制性酶切及DNA雜交等分子生物學(xué)手段亦用于診斷。第24章1999\12\2800212計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要

4.防治

強(qiáng)力霉素或阿莫西林可用于萊姆病的治療，但只能一定程度緩解病損，并不能完全消滅伯氏疏螺旋體。在疫區(qū)可預(yù)防接種。有兩種疫苗，一種是全菌滅活疫苗，有不良反應(yīng)，效果不好。另一種亞單位疫苗，為純化的OspA。用它免疫犬可產(chǎn)生抗體，當(dāng)蜱吸血時(shí)，伯氏疏螺旋體被抗體阻斷，不能從蜱的中腸向唾液腺移行，從而使蜱不再感染新的吮血對(duì)象。第24章1999\12\2800213計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要第三節(jié)蛇形螺旋體屬蛇形螺旋體屬是一個(gè)新屬，包括豬痢蛇形螺旋體和無(wú)害蛇形螺旋體。本屬特性細(xì)胞呈疏松、規(guī)則的螺旋形，長(zhǎng)7-9um，寬0.3-0.4um。有8、9根軸絲，呈屈曲和蛇形運(yùn)動(dòng)或移位運(yùn)動(dòng)。有機(jī)營(yíng)養(yǎng)?？稍诤?0％胎犢、犢?；蛲醚宓睦业鞍滓让赶锎蠖闺藴?TSB)或腦心浸液湯(BHIB)，36-42℃厭氧生長(zhǎng)。在TSB血液瓊脂平板，38℃培養(yǎng)48-96h形成扁平、半透明的菌落，大小0.5-3mm，可呈現(xiàn)微弱或強(qiáng)β溶血。第24章1999\12\2800214計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要

豬痢蛇形螺旋體1.致病性

豬痢疾又稱(chēng)血痢、黑痢、出血性痢疾、粘膜出血性痢疾等，由豬痢蛇形螺旋體引起，最常發(fā)生于8-14周齡幼豬。主要癥狀是嚴(yán)重的粘膜出血性下痢和迅速減重。特征病變?yōu)榇竽c粘膜發(fā)生部液滲出性(卡他性)、出血性和壞死性炎癥。經(jīng)口傳染，病的傳播迅速，發(fā)病率較高(約75％)而致死率較低(5％-20％)。2.形態(tài)結(jié)構(gòu)及染色特性本螺旋體形態(tài)結(jié)構(gòu)與其屬的描述一致，菌體多為2-4個(gè)彎曲，兩端尖銳。革蘭氏陰性，姬姆薩氏和鍍銀法均能使其較好著色。第24章1999\12\2800215計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要3.培養(yǎng)特性

嚴(yán)格厭氧，一般厭氧環(huán)境不易培養(yǎng)成功，必須使用預(yù)先還原的培養(yǎng)基，并置于含的H2(或N2)和CO2(二者比例為80：20)混合氣體以及以冷鈀為觸媒的環(huán)境中才能生長(zhǎng)。對(duì)培養(yǎng)基要求苛刻，通常使用含10％胎牛(或犢?；蛲?血清或血液的TSB或BHIB培養(yǎng)基。在TSB血液瓊脂上，38℃48-96min可形成扁平、半透明、針尖狀、強(qiáng)β溶血性菌落。4.抗原與免疫性豬痢疾密螺旋體有兩種抗原成分：脂多糖、蛋白質(zhì)（特異性）。該菌有8個(gè)血清型。自然發(fā)病豬康復(fù)后，可產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，具有一定的保護(hù)力。第24章1999\12\2800216計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要5.微生物學(xué)檢查（1）直接鏡檢有以下3種方法。

染色鏡檢：以病豬的新鮮糞便粘液，或病變結(jié)腸粘膜刮取物制成薄涂片，染色鏡檢。多用姬姆薩氏法染色法。也可用印度墨汁作負(fù)染或鍍銀染色法染色鏡檢。

相差或暗視野顯微鏡活體檢查：待檢樣品與適量生理鹽水混合后制成壓滴標(biāo)本片，用相差或暗視野顯微鏡下鏡檢。若每個(gè)高倍視野中見(jiàn)有2-3個(gè)或更多個(gè)蛇樣運(yùn)動(dòng)的較大螺旋體即可確診。第24章1999\12\2800217計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要

染色組織切片檢查：將采集的病變腸組織先用10％甲醛緩沖液固定后切片，再用維多利亞藍(lán)染色法染色。鏡檢時(shí)可見(jiàn)螺旋體大量存在組織表面及粘液囊腔內(nèi)，有時(shí)數(shù)量多到堆積成網(wǎng)狀。（2）分離培養(yǎng)：分離培養(yǎng)方法。

過(guò)濾培養(yǎng)法：將樣品作5-10倍稀釋?zhuān)p度離心，上清用0.8um和0.45um濾膜依次過(guò)濾。取濾液直接涂布接種于鮮血瓊脂平板上，厭氧培養(yǎng)37-38℃培養(yǎng)3-6d，每隔2d檢查1次，當(dāng)觀察到平板上出現(xiàn)β溶血現(xiàn)象時(shí)，即可挑取可疑菌落，作成懸滴或壓滴標(biāo)本，用暗視野顯微鏡檢查。第24章1999\12\2800218計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要6.防治對(duì)豬痢目前尚無(wú)可靠或?qū)嵱玫拿庖咧苿┮怨╊A(yù)防之用。普遍采用抗生素和化學(xué)藥物控制此病，培育SPF豬，凈化豬群是防治本病的主要手段。第四節(jié)密螺旋體屬(自學(xué)）

第五節(jié)細(xì)螺旋體屬細(xì)螺旋體屬成員是一大類(lèi)纖細(xì)、螺旋致密，一端或兩端彎曲呈鉤狀的螺旋體，故常稱(chēng)鉤端螺旋體，簡(jiǎn)稱(chēng)鉤體。大部分營(yíng)腐生生活，廣泛分布于各種水生環(huán)境中，無(wú)致病性。一部分為寄生性和致病性的螺旋體，可引起人和動(dòng)物的細(xì)螺旋體病。第24章1999\12\2800219計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要1.形態(tài)結(jié)構(gòu)與染色特性呈纖細(xì)的圓柱形，長(zhǎng)6-20um，寬0.1-0.2um，螺旋弧度0.2-0.3um，至少有18個(gè)彎曲細(xì)密規(guī)則的螺旋，菌體一端或兩端可彎曲呈鉤狀。其運(yùn)動(dòng)形式多樣，能翻轉(zhuǎn)和屈曲運(yùn)動(dòng)，也可沿其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)而快速前進(jìn)。細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏陰性桿菌相似。外膜位于原生質(zhì)柱和軸絲外層，相當(dāng)于細(xì)菌莢膜。

革蘭氏染色陰性。鍍銀染色法和剛果紅負(fù)染較好。用暗視野顯微鏡較易觀察其形態(tài)和運(yùn)動(dòng)力。第24章1999\12\2800220計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要2.培養(yǎng)及生化特性需氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，較易人工培養(yǎng)。在含血清和蛋白胨的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。鉤體某些菌株能產(chǎn)生溶血素。3.抵抗力鉤體pH中性濕土和水中可存活數(shù)月，該病主要經(jīng)水源傳播。對(duì)熱和酸堿環(huán)境抵抗弱，45℃30min，50℃10min，60℃10s即可致死。4℃冰箱中可存活1-2周，-70℃可保存2年多。對(duì)各種化學(xué)消毒劑和青霉素、金霉素、四環(huán)素等抗生素敏感性。4.抗原結(jié)構(gòu)抗原分兩種：表面抗原(P抗原)，為多糖蛋白復(fù)合物，具有型特異性。內(nèi)部抗原(共同抗原，S抗原)，系類(lèi)脂多糖復(fù)合物，具有屬特異性。第24章1999\12\2800221計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要

5.毒力因子本病為動(dòng)物源性疾病。毒力因子主要有：吸附物質(zhì)、溶血素、內(nèi)毒素樣物質(zhì)、細(xì)胞毒性因子。6.感染途徑及其所致疾病

（1）傳染源鉤體可感染大部分哺乳動(dòng)物和人。已從50多種動(dòng)物檢出鉤體，其中鼠類(lèi)和豬是鉤體的主要貯存宿主和傳染來(lái)源，排菌期長(zhǎng)。（2）感染途徑

人和家畜通過(guò)直接或間接地接觸污染源而被感染。途徑：(1)損傷的皮膚黏膜，最為常見(jiàn)；(2)口腔、咽喉頭和腸道粘膜；(3)動(dòng)物咬傷或吸血昆蟲(chóng)的叮咬，引起感染；(4)通過(guò)交配或人工授精。第24章1999\12\2800222計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要（3）易感動(dòng)物及癥狀

在家畜中以牛和羊?qū)︺^體的易感性最高，其次為馬、豬、犬、水牛和驢等，許多野生動(dòng)物，特別是鼠類(lèi)易感。鉤體病臨床表現(xiàn)：急性病例的主要癥狀為發(fā)熱、貧血、出血、黃疸、血紅素尿及粘膜和皮膚壞死；亞急性病例可表現(xiàn)為腎炎、肝炎、腦膜炎及產(chǎn)后泌乳缺乏癥；慢性病例則表現(xiàn)虹膜睫狀體炎、流產(chǎn)、死產(chǎn)及不育或不孕。（4）鉤體病的病程

約持續(xù)7-8d的鉤體菌血癥(前期發(fā)熱)階段和持續(xù)2-3月或更長(zhǎng)時(shí)間的鉤體菌尿期(后期無(wú)熱)階段。在前期階段，鉤體于血、肝、腎和腦脊髓液中，而后期于腎內(nèi)長(zhǎng)期繁殖，經(jīng)尿排出。第24章1999\12\2800223計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要7.微生物學(xué)診斷最后診斷有賴(lài)于微生物學(xué)檢查。檢查病料：即發(fā)病7-8d內(nèi)(菌血癥、發(fā)熱期)可采集血、腦脊髓液，剖撿可取肝和腎；發(fā)病7-8d后(退熱、菌尿癥期)采集尿液，死后為腎。方法：（1）直接鏡檢可分2種方法：

暗視野活菌檢查：將病料差速離心集菌壓滴標(biāo)本片鏡檢。如在暗視野中見(jiàn)有鈞體菌的典型形態(tài)與運(yùn)動(dòng)方式，即可確認(rèn)為鉤體。

染色鏡檢：多用改良鍍銀法和媒染法。前者使鉤體呈深黑色或灰色。后者，鉤體呈紫紅色。姬姆薩染色片中鉤體呈紫色。第24章1999\12\2800224計(jì)算機(jī)應(yīng)用技術(shù)學(xué)習(xí)內(nèi)容提要（2）分離培養(yǎng)

鉤體的培養(yǎng)基很多，常用的有柯氏培養(yǎng)基等培養(yǎng)基。病料接種后，置28-30℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)，每5-7d觀察鉤體生長(zhǎng)情況并取樣鏡檢，連續(xù)四周(最多至3個(gè)月)末檢出鉤體者可作陰性處理。（3）動(dòng)物接種試驗(yàn)可用于病料內(nèi)鉤體的分離，又可作為菌株毒力測(cè)定。動(dòng)物常用體重150-200g幼齡豚鼠或50-60g金黃倉(cāng)鼠。一般在接種后1-2周動(dòng)物出現(xiàn)體溫