高三生物專項復(fù)習(xí)課件：生物實驗中的陽性對照與陰性對照

陰性對照與陽性對照需要設(shè)置對照組。嚴格來說，本實驗應(yīng)該設(shè)置兩組對照組。一組為陰性對照組，不進行涂布或者用無菌水涂布平板；另一組為陽性對照組，涂布大腸桿菌。前者可以說明培養(yǎng)基是否被污染，后者可以說明該培養(yǎng)基能否培養(yǎng)出大腸桿菌。陰性對照和陽性對照對照實驗（Controlexperiments）是在實驗中設(shè)置比較對象的一種科學(xué)方法，對照組的設(shè)置可評估實驗條件改變對實驗結(jié)果產(chǎn)生的影響。對照的意義可以增強實驗的可信度，能幫我們佐證實驗結(jié)果的可靠性，也能在實驗失敗的時候幫助我們排查導(dǎo)致失敗的原因。在生命科學(xué)實驗中的對照實驗一般可分為空白對照、陽性對照和陰性對照?？瞻讓φ眨褐覆唤o予任何處理的對照。評定測量方法的準確度以及觀察實驗是否處于正常狀態(tài)?？瞻讓φ湛梢耘懦訇栃缘慕Y(jié)果。陽性對照：按照當前實驗方案一定能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。陽性對照是已知的對測量結(jié)果有影響的因素，目的是確定實驗程序無誤。如果是化學(xué)物質(zhì)如藥物實驗，陽性對照還可以證明實驗藥和對照藥之間的差別——優(yōu)效性或等效性。陽性對照可以排除假陰性的結(jié)果。也就是說，陽性對照就是一個樣本已知必然是陽性的結(jié)果，如果檢測出來了這個樣本不是陽性，則說明實驗有問題，不可靠。例如：當要對某抗癌藥物處理后的HeLa細胞進行檢測時，發(fā)現(xiàn)處理組的結(jié)果呈現(xiàn)陰性，HeLa細胞不發(fā)生凋亡。當陽性對照組結(jié)果是陽性，那么，實驗操作一定沒有問題，有可能是藥不行。當陽性對照組結(jié)果是陰性的，那么，實驗操作一定有問題，有可能抗癌藥物是有效的，出現(xiàn)了假陰性的結(jié)果。當然也有可能，藥物也是不行的。陰性對照：陰性對照和陽性對照相反，按照當前的實驗方案一定不能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。排除未知變量對實驗產(chǎn)生的不利影響。陰性對照和空白對照不一定畫等號?？瞻讓φ諞]加處理因素，陰性對照往往加的是另外處理因素。陰性對照的目的是排除假陽性。也就是說，陰性對照就是一個樣本已知必然是陰性的結(jié)果，如果檢測出來了這個樣本是陽性的，這就說明實驗有問題。（醫(yī)學(xué)臨床試驗中陰性對照可采用安慰劑）陰性對照類型1.溶劑對照：最常見的陰性對照。為排除溶劑本身對動物的影響，往往會設(shè)置一個溶劑（生理鹽水）對照組。有些化合物由于水溶性差，在進行藥物溶解時，可能需要使用有機溶劑(如DMSO)以及助溶劑輔助溶解。為排除溶劑本身對動物的影響，往往會設(shè)置一個溶劑對照組。2.假手術(shù)處理對照：在給動物造模的過程中，也會涉及到假手術(shù)處理對照。3.安慰劑處理熒光定量PCR中的陽性對照和陰性對照：陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽性對照強調(diào)處理過程與樣品一致，并且有明確的預(yù)期結(jié)果。有的時候根據(jù)檢測目的，陰性對照和空白對照也會被捏成一個對照。什么時候，空白組和陰性組是分開為兩組的呢？比如一些轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?，空白對照就和陰性對照是分開的。以轉(zhuǎn)目的蛋白表達的載體細胞為例，細胞可分為：實驗組（轉(zhuǎn)染表達目的蛋白的載體）、陰性對照（轉(zhuǎn)了空載體的細胞）、空白對照（空白細胞，不轉(zhuǎn)載體，細胞未做任何處理）。陽性對照與陰性對照舉例：隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)與動物細胞工程結(jié)合和發(fā)展，2011年我國首次利用轉(zhuǎn)基因和體細胞核移植技術(shù)成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛。其基本流程為：①構(gòu)建乳腺專一表達載體。隨著測序技術(shù)的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通過檢索

獲取其編碼序列，用化學(xué)合成法制備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動子的相應(yīng)載體連接，構(gòu)建出乳腺專一表達載體。②表達載體轉(zhuǎn)入牛胚胎成纖維細胞（BEF）。將表達載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，與BEF膜發(fā)生______，表達載體最終進入細胞核，發(fā)生轉(zhuǎn)化。③核移植。將轉(zhuǎn)基因的BEF作為核供體細胞，從牛卵巢獲取卵母細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)及去核后作為______。將兩種細胞進行電融合，電融合的作用除了促進細胞融合，同時起到了______重組細胞發(fā)育的作用。④重組細胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細胞體外培養(yǎng)至______，植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。⑤檢測。DNA水平檢測：利用PCR技術(shù)，以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞作為陰性對照，以______為陽性對照，檢測到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞中存在目的基因。RNA水平檢測：從非轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞、轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞和轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞，提取總RNA，對總RNA進行______處理，以去除DNA污染，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為______，利用特定引物擴增目的基因片段。結(jié)果顯示目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是什么？______。基因數(shù)據(jù)庫融合受體細胞激活早期囊胚含目的基因的BEFDNA酶模板a.乳腺專一表達載體b.（乳腺）特異性啟動子B-FB干擾素濃度高，病變程度低A組：空白對照組B組：陽性對照？靜息狀態(tài)時間明顯變短丁組：正常組，不作處理（空白對照）戊組：模型組，不作處理

（陰性對照）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是因免疫炎癥反應(yīng)引起的關(guān)節(jié)受損進而導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙和殘疾的一種疾病，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。糖皮質(zhì)激素（GC）屬于腎上腺皮質(zhì)激素，具有免疫抑制作用，是治療RA的有效藥物之一，但GC具有較強的毒副作用。研究人員為探索中藥姜黃提取物姜黃素對RA的干預(yù)作用做了如下研究。將體重相同的大鼠隨機分為正常對照組、造模組，分別進行如下處理，造模組前期需完成RA動物模型的制備，前期處理完成后再分別進行后期處理。請完成實驗方案，①②③④分別對應(yīng)（填字母）。注：弗氏完全佐劑為細胞免疫刺激劑。正常對照組未對實驗對象施加處理，屬于正常的大鼠，姜黃素組是給模型動物注射姜黃素