以PSCY為啟動(dòng)子前列腺癌

國家自然科學(xué)基金申請書PAGE7第2頁共16頁學(xué)科代碼：C1606受理部門：收件日期：受理編號：國家自然科學(xué)基金申請書您現(xiàn)在還不能填寫文檔或打印，請根據(jù)以下三個(gè)步驟操作：1)如果您是Word2000或以上版本用戶，請把Word宏的安全性設(shè)為:"中"方法:Word菜單->工具->宏->安全性->安全級,設(shè)置為"中"(如果您是Word97用戶，繼續(xù)執(zhí)行以下步驟)2)關(guān)閉本文檔，重新打開本文檔3)點(diǎn)擊"啟用宏"按鈕，即可開始填寫本文檔或打印了您現(xiàn)在還不能填寫文檔或打印，請根據(jù)以下三個(gè)步驟操作：1)如果您是Word2000或以上版本用戶，請把Word宏的安全性設(shè)為:"中"方法:Word菜單->工具->宏->安全性->安全級,設(shè)置為"中"(如果您是Word97用戶，繼續(xù)執(zhí)行以下步驟)2)關(guān)閉本文檔，重新打開本文檔3)點(diǎn)擊"啟用宏"按鈕，即可開始填寫本文檔或打印了亞類說明：青年科學(xué)基金項(xiàng)目附注說明：項(xiàng)目名稱：以PSCA為啟動(dòng)因子重組腺病毒轉(zhuǎn)染納碘泵基因治療前列腺癌申請者：電話：依托單位：中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)通訊地址：郵政編碼：單位電話-mail：申報(bào)日期：200FORMTEXT3年FORMTEXT3月FORMTEXT15日國家自然科學(xué)基金委員會

基本信息申請者信息姓名性別出生年月年月民族學(xué)位職稱主要研究領(lǐng)域電話E-mail傳真?zhèn)€人網(wǎng)頁工作單位在研項(xiàng)目批準(zhǔn)號依托單位信息名稱代碼20043303聯(lián)系人陸偉E-mailLWYYOK@電站地址合作單位信息單位名稱代碼項(xiàng)目基本信息項(xiàng)目名稱資助類別面上項(xiàng)目亞類說明青年科學(xué)基金項(xiàng)目附注說明學(xué)科代碼C1606:泌尿外科學(xué)C1710:腫瘤學(xué)基地類別預(yù)計(jì)研究年限2004年1月—2006年12月研究屬性應(yīng)用基礎(chǔ)研究總預(yù)算經(jīng)費(fèi)申請經(jīng)費(fèi)摘要項(xiàng)目研究內(nèi)容和意義簡介（限400字）：FORMTEXT我國前列腺癌發(fā)病率近年來呈明顯上升趨勢，但初診時(shí)50％以上已有轉(zhuǎn)移，內(nèi)分泌治療是其最主要、有效的姑息性療法。但幾乎所有病人將轉(zhuǎn)為激素非依賴性，即對內(nèi)分泌治療不再敏感，成為治療的一大難題。本課題應(yīng)用腺病毒載體將白介素2（IL－2）和鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因轉(zhuǎn)染前列腺癌小鼠模型的癌組織內(nèi)，使目的基因在前列腺癌組織內(nèi)特異性表達(dá)。然后給予碘放射性同位素，在鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的作用下，同位素碘在前列腺癌組織內(nèi)高濃度聚集，以達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。而IL－2的表達(dá)，可以調(diào)節(jié)機(jī)體的抗腫瘤免疫，在放射性同位素破壞腫瘤細(xì)胞、瘤細(xì)胞抗原顯露后，進(jìn)一步通過細(xì)胞免疫殺傷腫瘤，從而起到抗癌的協(xié)同作用。該課題通過腺病毒轉(zhuǎn)染，在組織特異性啟動(dòng)子作用下，目的基因在前列腺癌細(xì)胞中特異性表達(dá)，從而達(dá)到組織特異性殺傷腫瘤組織，盡可能的減少了全身副作用。免疫調(diào)節(jié)治療和同位素放療的有機(jī)結(jié)合，為中晚期前列腺癌的治療開辟一條新的途徑。關(guān)鍵詞(用分號分開，最多5個(gè))FORMTEXT前列腺癌鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白放射性碘白介素2基因治療項(xiàng)目組主要成員編號姓名出生年月性別職稱學(xué)位單位名稱電話E-mail項(xiàng)目分工每年工作時(shí)間（月）12345678910總?cè)藬?shù)高級中級初級博士后博士生碩士生FORMTEXT=ffdMmb_seniorno+ffdMmb_middle_no+ffdMmb_juniorno+ffdMmb_postdrno+ffdMmb_drcanno+ffdMmb_mscanno1616FORMTEXT1FORMTEXT5FORMTEXT2FORMTEXT0FORMTEXT6FORMTEXT2說明:1.高級、中級、初級、博士后、博士生、碩士生人員數(shù)由申請者負(fù)責(zé)填報(bào)，總?cè)藬?shù)自動(dòng)生成。說明:2.第一人必須是申請者，信息從前面自動(dòng)讀入。經(jīng)費(fèi)預(yù)算(單位:萬元)科目預(yù)算金額備注（計(jì)算依據(jù)與說明）一．研究經(jīng)費(fèi)FORMTEXT20.0000FORMTEXT1．科研業(yè)務(wù)費(fèi)FORMTEXT1.0000FORMTEXT（1）測試/計(jì)算/分析費(fèi)FORMTEXT0.2000FORMTEXT統(tǒng)計(jì)分析費(fèi)0。2萬（2）能源/動(dòng)力費(fèi)FORMTEXT0.0000FORMTEXT（3）會議費(fèi)/差旅費(fèi)FORMTEXT0.5000FORMTEXT國內(nèi)學(xué)術(shù)會議0。5萬（4）出版物/文獻(xiàn)/信息傳播事務(wù)費(fèi)FORMTEXT0.3000FORMTEXT文獻(xiàn)查詢0。05萬，文章發(fā)表費(fèi)0。25萬（5）其他FORMTEXT0.0000FORMTEXT2．實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)FORMTEXT18.0000FORMTEXT（1）原材料/試劑/藥品購置費(fèi)FORMTEXT15.0000FORMTEXT小鼠、飼料及培養(yǎng)劑費(fèi)2萬；目的基因載體的構(gòu)建、鑒定費(fèi)8萬；放射性同位素2萬；各種酶、標(biāo)準(zhǔn)物及其他試劑3萬（2）其他FORMTEXT3.0000FORMTEXT光鏡、電鏡檢查費(fèi)，ECT檢查費(fèi)2萬；克隆hNIS、測序驗(yàn)證費(fèi)1萬3．儀器設(shè)備費(fèi)FORMTEXT0.0000FORMTEXT（1）購置FORMTEXT0.0000FORMTEXT（2）試制FORMTEXT0.0000FORMTEXT4．實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi)FORMTEXT0.0000FORMTEXT5．協(xié)作費(fèi)FORMTEXT0.0000FORMTEXT6．其他FORMTEXT0.0000FORMTEXT二．國際合作與交流費(fèi)FORMTEXT0.0000FORMTEXT1．項(xiàng)目組成員出國合作交流FORMTEXT0.0000FORMTEXT2．境外專家來華合作交流FORMTEXT0.0000FORMTEXT三．勞務(wù)費(fèi)FORMTEXT0.0000FORMTEXT四．管理費(fèi)FORMTEXT1.0000FORMTEXT五．其他FORMTEXT0.0000FORMTEXT經(jīng)費(fèi)總預(yù)算FORMTEXT20.0000申請經(jīng)費(fèi)FORMTEXT20.0000其他經(jīng)費(fèi)來源（單位：萬元）自然科學(xué)基金其他項(xiàng)目資助經(jīng)費(fèi)FORMTEXT0.0000國家其他計(jì)劃資助經(jīng)費(fèi)FORMTEXT0.0000其他經(jīng)費(fèi)資助（含部門匹配）FORMTEXT0.0000合計(jì)FORMTEXT0.0000國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請書報(bào)告正文（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究內(nèi)容（4000-8000字）：項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)（附主要的參考文獻(xiàn)目錄）。前列腺癌是歐美國最常見的惡性腫瘤。在美國男性腫瘤患者中，死于前列腺癌者高居第二位。前列腺癌發(fā)病率的種屬差異性非常明顯，我國前列腺癌發(fā)病率與歐美國家相比較低，但近年來也呈明顯上升趨勢，由50年代的0.2/10萬人口升至90年代的1.2-3.4/10萬。前列腺癌的特點(diǎn)是早期很難發(fā)現(xiàn)，我國前列腺癌患者初診時(shí)50％以上已有轉(zhuǎn)移。對于超過B2期腫瘤（系腫瘤侵犯前列腺組織以外或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移）患者，失去了手術(shù)根治的機(jī)會，以內(nèi)分泌治療為主。內(nèi)分泌療法是其最主要、有效的姑息性療法，但幾乎所有病人將轉(zhuǎn)為激素非依賴前列腺癌，且一旦轉(zhuǎn)為激素非依賴前列腺癌，即對內(nèi)分泌治療不再敏感，僅能試用化療，但化療并不能延長病人生存期。因此，對于雄激素非依賴性前列腺癌的治療成為前列腺癌診治過程中亟待解決的問題。前列腺干細(xì)胞抗原（PSCA）是Reiter等于1998年用特征性差異分析的方法在人前列腺癌動(dòng)物模型LAPC-4鼠中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)前列腺癌相關(guān)腫瘤抗原[3]。因?yàn)樗c干細(xì)胞抗原2（stemcellantigen2,SCA-2）30％同源而被命名為前列腺干細(xì)胞抗原。同SCA-2一樣，PSCA通過GPI共價(jià)鍵錨定在細(xì)胞膜上，而不呈分泌形式，但這種共價(jià)鍵可以被GPI特異性的磷脂酶(PIPLC)所斷裂。PSCA基因定位于染色體8q24.2，其cDNA的開放讀框?yàn)?72bp，編碼123個(gè)氨基酸。PSCA具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：（1）在前列腺的組織分布特異性高[6]。(2)在大多數(shù)的前列腺癌標(biāo)本中均有表達(dá)，而且在激素依賴和激素非依賴前列腺癌中同樣高表達(dá)[6]。（3）PSCA通過GPI共價(jià)鍵錨定在細(xì)胞膜上，而不呈分泌形式[7、8]。而其他的前列腺相關(guān)蛋白，如前列腺特異性抗原（PSA）、前列腺特異性膜抗原（PSMA）、前列腺酸性磷酸酶（PAP）、前列腺分泌蛋白94(PSP94)、前列腺癌腫瘤抗原1等，均有各自的不足。它們或?yàn)榉置谛偷鞍?，外周血濃度很高，容易誘導(dǎo)免疫耐受；或因其組織分布特異性不強(qiáng)，用來做免疫治療的疫苗容易引起自身免疫性疾病。因此，PSCA是一個(gè)很有前景的前列腺癌基因治療的特異性的啟動(dòng)子，有望成為局灶性和轉(zhuǎn)移性前列腺癌治療的新方向[11]。放射性同位素在治療甲狀腺癌的過程中取得了極大的成功，即使是有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的進(jìn)展性甲狀腺癌，使用放射性碘治療也能取得很好的療效，10年存活期>80％?！?】正常和惡性的甲狀腺細(xì)胞攝取同位素的能力差異是由于鈉／碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（sodiumiodidesymporterNIS）的表達(dá)水平不一樣。甲狀腺癌細(xì)胞膜上NIS表達(dá)水平較高，可以攝取高濃度的131I，使得甲狀腺癌得到組織特異性較高的放療，對全身其它組織器官影響很小。NIS已經(jīng)被確認(rèn)為甲狀腺腺上皮膜上的一種糖蛋白，具有13個(gè)跨膜區(qū)，可以特異性的將碘轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，使得細(xì)胞內(nèi)碘的濃度較血漿增高20－40倍。該基因近年來已經(jīng)被克隆和鑒定?！?】NIS基因的克隆鑒定為腫瘤基因治療提供了一種全新的治療手段，將該基因轉(zhuǎn)入非甲狀腺起源的腫瘤細(xì)胞內(nèi)，可使131I的攝取明顯增加，從而產(chǎn)生類似與甲狀腺癌組織特異性放療的效果。近來有研究報(bào)道使用PSA啟動(dòng)子引導(dǎo)NIS基因轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞后，可以使放射性同位素在前列腺癌組織中特異性地聚集，獲得足夠的放射性劑量對前列腺癌細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用，大大增強(qiáng)了前列腺癌的放療強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)證明體外細(xì)胞培養(yǎng)條件下，PSA-NIS基因轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞后，可以完全抑制腫瘤細(xì)胞的生長，而裸鼠前列腺癌模型在接受局部注射PSA-NIS基因表達(dá)載體后，腫瘤攝取131I的比例為總量25－30％，腫瘤的生長得到有效的抑制?！?】但是該治療途徑也存在組織內(nèi)基因表達(dá)短暫，131I在組織內(nèi)生物半衰期短等不足之處難以克服，需要進(jìn)一步改進(jìn)以增強(qiáng)其治療效果。本課題將以上兩種方法相結(jié)合，通過基因轉(zhuǎn)染的方式，先使放射性同位素131I在前列腺癌組織中特異性地聚集，獲得足夠的放射性劑量對前列腺癌細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用。在腫瘤細(xì)胞壞死，腫瘤特異性抗原暴露后，進(jìn)一步通過IL-2調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性的CD8+CT活化，并增強(qiáng)其對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，從而起到協(xié)同抗癌作用。本研究旨在對中晚期前列腺癌的基因治療方面做一些探索性的工作。主要參考文獻(xiàn)1：Mazzaferri,E.L.Carcinomaoffollicularepithelium:radioiodineandothertreatmentsandoutcomes.In.L.E.BravetmanandR.D.Utiger(eds),TheThyroid:AFundamentalandClinicalText,PP.922-945.Philadelphia:Lippincott-Raven,1996.2:Spitzweg,C.Heufelder,A.E.andMorris,J.C.Thyroidiodinetransport.Thyroid,10:321-330,20003:Christine,S.Michael,K.O.ElizabethR.Treatmentofprostatecancerbyradioiodinetherapyaftertissue-specificexpressionofthesodiumildidesymporter.Cancerresearch,60:6526-6530,20004:Henny,C.S.Kuribayashi,K.Kern,D.E.Interleukin-2augmentsnaturalkillercellactivity.Nature(Lond),291:335-338,19815:Rosenberg,S.A.Lotze,M.T.Muul,L.M.Aprogressreportonthetreatmentof157patientswithadvancedcancerusinglymphokine-activatedkillercellsandinterleukin-2orhigh-doseinterleukin-2alone.N.Engl.J.Med,316:889-897,19876:DaqingL.WenJ.JefferyS.Combinationsurgeryandnonviralinterleukin2genetherapyforheadandneckcancer.ClinicalCancerResearch.5:1551-1556,1999.項(xiàng)目的研究內(nèi)容、研究目標(biāo),以及擬解決的關(guān)鍵問題。研究內(nèi)容本實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用重組腺病毒載體將鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因轉(zhuǎn)染小鼠前列腺癌細(xì)胞，使目的基因在前列腺癌組織內(nèi)特異性表達(dá)，在前列腺癌細(xì)胞膜上形成鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。然后給予放射性同位素131I，在鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的作用下，放射性碘在前列腺癌組織細(xì)胞內(nèi)高濃度聚集，以達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。為了最大限度地發(fā)揮放射性碘在腫瘤組織內(nèi)的細(xì)胞殺傷力，盡可能地減小在腫瘤以外組織的副作用，我們選用了前列腺癌組織特異性的前列腺干細(xì)胞抗原作為啟動(dòng)子，將鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因基因特異性的靶向前列腺癌細(xì)胞；同時(shí)，前列腺干細(xì)胞抗原不受雄激素的調(diào)節(jié)，因此，不論是雄激素依賴性還是激素非依賴性前列腺癌，其均能順利完成鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的轉(zhuǎn)移。通過免疫組化的方式鑒定目的基因在腫瘤組織中的表達(dá)情況；測定放射性碘在前列腺癌組織中的聚集濃度；測量治療前后的腫瘤體積；觀察治療后腫瘤組織在光鏡和電鏡下的病理改變情況；通過ECT了解治療后的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶情況。具體研究內(nèi)容如下：(1)、克隆PSCA和hNIS基因后,構(gòu)建重組PSCA-NIS腺病毒載體;(2)、測定在組織特異性PSCA啟動(dòng)子靶向?qū)б?，體外培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞和DU145細(xì)胞的NIS的表達(dá)率;(3)、測定體外培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞和DU145細(xì)胞的NIS對131I的攝取率及兩株細(xì)胞的存活率(4)、建立激素依賴性原位及轉(zhuǎn)移前列腺癌動(dòng)物模型，建立激素非依賴性原位及轉(zhuǎn)移前列腺癌動(dòng)物模型，建立由激素依賴性轉(zhuǎn)為激素非依賴性前列腺癌的動(dòng)物模型。(5)、測定重組PSCA-NIS腺病毒載體轉(zhuǎn)染后，放射性碘對三種前列腺癌動(dòng)物模型的局部和全身治療作用。研究目標(biāo)1、建立構(gòu)建重組PSCA-NIS腺病毒載體的方法。2、建立三種前列腺癌的動(dòng)物模型。3、觀察局部和全身途徑腺病毒轉(zhuǎn)染效率及治療的效果，探討該方法在治療轉(zhuǎn)移性前列腺癌中的應(yīng)用價(jià)值。4、通過該課題研究建立一套完整的前列腺癌基因治療模式，包括載體的構(gòu)建，轉(zhuǎn)染后目的基因表達(dá)產(chǎn)物的鑒定，體外、體內(nèi)治療效果的判斷等等，為以后開展更全面、更深層次的研究打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。擬解決的關(guān)鍵問題1、目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建2、前列腺癌動(dòng)物模型的構(gòu)建及轉(zhuǎn)移病灶的檢測3、提高腺病毒的轉(zhuǎn)染率及目的基因的表達(dá)效率4、延長放射性同位素在前列腺癌組織中聚留時(shí)間5、觀察有效殺傷腫瘤細(xì)胞所需射線強(qiáng)度3、擬采取的研究方案及可行性分析。3．1、研究方案⑴：構(gòu)建目的基因載體，鑒定目的基因前列腺癌細(xì)胞系PC-3人甲狀腺NIScDNA抽RNA克隆NIS翻譯區(qū)RT-PCRPSCAcDNA測序驗(yàn)證克隆PSCA翻譯區(qū)測序驗(yàn)證構(gòu)建重組PSCA-NIS腺病毒載體和對照腺病毒載體(PSCA、NIS)擴(kuò)增，純化，測定病毒滴度⑵：觀察體外轉(zhuǎn)染、表達(dá)效率及體外131I對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力LNCaP細(xì)胞、DU145細(xì)胞體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)染重組PSCA-NIS腺病毒載體和對照腺病毒載體(PSCA、NIS)系后培養(yǎng)免疫組化鑒定NIS基因表達(dá)情況測定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞攝取131I的能力測定131I被攝取后對LNCaP細(xì)胞、DU145細(xì)胞的殺傷能力⑶：建立前列腺癌動(dòng)物模型①、激素依賴性原位及轉(zhuǎn)移前列腺癌動(dòng)物模型的建立前列腺癌細(xì)胞株LNCaP制成單細(xì)胞懸液接種裸鼠背部生長成瘤后，移植至前列腺觀察原位前列腺癌的成瘤及轉(zhuǎn)移情況②、激素非依賴性原位及轉(zhuǎn)移前列腺癌動(dòng)物模型的建立前列腺癌細(xì)胞株DU145制成單細(xì)胞懸液接種裸鼠背部生長成瘤后，移植至前列腺觀察原位前列腺癌的成瘤及轉(zhuǎn)移情況③、由激素依賴性轉(zhuǎn)為激素非依賴性前列腺癌的動(dòng)物模型的建立傳代建立穩(wěn)定的前列腺癌的異種種植模型去勢并行緩?fù)肆鲋委煷[瘤縮小后又增大，血PSA下降后又上升切取瘤體組織移植至去勢并服用緩?fù)肆龅穆闶蟊巢總鞔⒎€(wěn)定的激素非依賴性前列腺癌動(dòng)物模型⑷：局部治療重組PSCA-NIS腺病毒載體和對照腺病毒載體(PSCA、NIS)原位前列腺癌動(dòng)物模型內(nèi)注入131IECT檢查，分析其敏感性及特異性檢測腫瘤組織內(nèi)的細(xì)胞免疫功能觀察腫瘤體積變化，分別觀察裸鼠的腫瘤重量、成瘤率瘤內(nèi)新生血管的分布與數(shù)量等指標(biāo)異性光鏡和電鏡觀察腫瘤病理改變⑸：全身治療重組PSCA-NIS腺病毒載體和對照腺病毒載體(PSCA、NIS)靜脈注入原位轉(zhuǎn)移前列腺癌＋激素非依賴性前列腺癌動(dòng)物模型內(nèi)注入131IECT檢查，分析其敏感性及特異性檢測細(xì)胞免疫功能觀察腫瘤＋轉(zhuǎn)移灶體積變化，分別觀察裸鼠的腫瘤重量、成瘤率瘤內(nèi)新生血管的分布與數(shù)量等指標(biāo)異性光鏡和電鏡觀察腫瘤病理改變3．2、可行性分析、申請者熟練掌握細(xì)胞培養(yǎng)、腺病毒載體的構(gòu)建、RT-PCR,ELISA及免疫組織化學(xué)技術(shù)；、前列腺癌動(dòng)物模型已成功建立；、申請者具有從事前列腺癌的基礎(chǔ)及臨床研究經(jīng)驗(yàn)；所在單位具有常規(guī)的分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)儀器，熒光定量RT-PCR儀等先進(jìn)設(shè)備；信息來源快，有助于課題的完成。、用原位雜交技術(shù)對PSCA作了初步的研究，表明在PSCA在前列腺癌細(xì)胞中呈高表達(dá)4、本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處。受放射性同位素成功治療中晚期甲狀腺癌的啟發(fā)，設(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)研究。將鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（NIS）基因通過腺病毒的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)運(yùn)至前列腺癌細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞膜表面表達(dá)鈉碘泵，選擇性地將放射性碘從前列腺癌細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)形成高濃度的放射性碘聚集，發(fā)射β射線，從而殺死癌細(xì)胞。本研究選擇的PSCA啟動(dòng)子較PSA等其他啟動(dòng)子具有以下優(yōu)點(diǎn)：前列腺癌細(xì)胞的特異性高；PSCA通過GPI共價(jià)鍵錨定在細(xì)胞膜上，而不呈分泌形式，不易產(chǎn)生免疫耐受；PSCA不受雄激素的調(diào)節(jié)，能將鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的轉(zhuǎn)移至雄激素依賴性或者非依賴性前列腺癌細(xì)胞內(nèi)，即能治療激素依賴性和非依賴性前列腺癌。該方法思路獨(dú)特，新穎，在國內(nèi)外尚無類似研究報(bào)道。5、年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果。5．1、年度研究計(jì)劃2004年1月至2004年6月：構(gòu)建重組腺病毒PSA/NIS載體，鑒定目的基因2004年7月至2005年12月：觀察體外轉(zhuǎn)染、表達(dá)效率及131I對體外腫瘤細(xì)胞的殺傷力2005年1月至2005年6月：建立原位和轉(zhuǎn)移前列腺癌動(dòng)物模型2005年7月至2005年12月：完成重組腺病毒PSA/NIS載體的動(dòng)物模型局部治療2006年1月至2006年6月：完成重組腺病毒PSA/NIS載體的動(dòng)物模型全身治療2006年7月至2006年12月：完成數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，形成論文5．2、預(yù)期研究結(jié)果成功構(gòu)建重組腺病毒PSA/NIS載體，通過NIS，放射性碘能夠在激素依賴性和激素非依賴性的前列腺癌細(xì)胞內(nèi)濃聚，對前列腺癌細(xì)胞具有很強(qiáng)的殺傷作用。發(fā)表論文4-6篇，成果以論文形式發(fā)表。（二）研究基礎(chǔ)與工作條件1、工作基礎(chǔ)申請者長期從事泌尿生殖系腫瘤的基礎(chǔ)研究，有一定的研究基礎(chǔ)和技術(shù)平臺，在前列腺癌早期診斷、腫瘤標(biāo)記物測定和基因治療方面的研究工作有著豐富的研究經(jīng)驗(yàn)。本研究已有的工作基礎(chǔ):參加課題的多數(shù)工作人員有多年蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)研究經(jīng)驗(yàn)，已掌握雙向凝膠電泳、質(zhì)譜分析、細(xì)胞培養(yǎng)、RT-PCR、Westernblot、免疫組化等技術(shù)；所在科室多年來一直從事前列腺癌的基因研究，近年來已獲得多項(xiàng)項(xiàng)國家自然科學(xué)基金資助。用原位雜交技術(shù)檢測前列腺癌的PSCA的表達(dá)情況，初步表明PSCA在前列腺癌中呈高表達(dá)；2、已成功建立前列腺癌DU145和LNCaP細(xì)胞株的裸鼠原位種植和轉(zhuǎn)移模型；3、具有腺病毒構(gòu)建，轉(zhuǎn)染的工作經(jīng)驗(yàn)。4、2、工作條件所在科室每年診治前列腺癌患者上百例，具有充足的病人來源；所在單位中心實(shí)驗(yàn)室具有常規(guī)的層流細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)儀器，以及熒光定量、RT-PCR儀等先進(jìn)設(shè)備；與美國幾所著名研究單位具有良好協(xié)作關(guān)系，信息來源快，便于學(xué)術(shù)交流，有助于課題的完成。3、申請人簡歷高小峰，男，長海醫(yī)院泌尿外科主治醫(yī)師、講師。1973年9月出生，1996年7月畢業(yè)與第二軍醫(yī)大學(xué)海軍臨床醫(yī)學(xué)系，同年分配至第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院超聲科工作。1999年9月考入第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院泌尿外科，師從于著名的泌尿外科專家孫穎浩教授，攻讀碩士學(xué)位；2001年7月由碩士轉(zhuǎn)為博士，從事前列腺癌診治的基礎(chǔ)及臨床研究。能較好地完成泌尿外科常見疾病的診治工作，獨(dú)立開展泌尿外科的中小型手術(shù)。發(fā)揮專長，開展超聲引導(dǎo)經(jīng)直腸前列腺穿刺活檢術(shù)，大大提高了前列腺癌的陽性診斷率，取得了很好的臨床效果。參與科室的科研工作，參加了膀胱癌細(xì)胞株逃脫細(xì)胞衰老的相關(guān)基因的篩選與克隆、尿脫落細(xì)胞端粒酶活性測定診斷膀胱癌、膀胱癌相關(guān)基因的篩選與克隆、重組腺病毒轉(zhuǎn)染膀胱移行上皮預(yù)防膀胱癌復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究、前列腺癌雄激素受體及其基因的研究、東西方人前列腺癌的比較研究、重組腺病毒轉(zhuǎn)染膀胱移行上皮預(yù)防膀胱癌復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究、前列腺癌的微創(chuàng)治療、前列腺癌的早期診斷和綜合治療等多項(xiàng)國家自然科學(xué)基金、國家自然科學(xué)基金重大國際合作研究項(xiàng)目、軍隊(duì)十五臨床重大攻關(guān)項(xiàng)目、軍隊(duì)十五規(guī)劃重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目、軍隊(duì)杰出人才基金、上海市百人計(jì)劃基金等多項(xiàng)研究工作。在本實(shí)驗(yàn)中負(fù)責(zé)選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及具體進(jìn)行本研究的部分實(shí)驗(yàn)操作。在本實(shí)驗(yàn)中負(fù)責(zé)選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及具體進(jìn)行本研究的部分實(shí)驗(yàn)操作。國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請書簽字和蓋章頁(此頁不用填寫!!!)申請者：依托單位：中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)項(xiàng)目名稱：以PSCA為啟動(dòng)因子重組腺病毒轉(zhuǎn)染納碘泵基因治療前列腺癌資助類別：面上項(xiàng)目亞類說明：青年科學(xué)基金項(xiàng)目附注說明：申請者承諾：我保證申請書內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得基金資助，我將履行項(xiàng)目負(fù)責(zé)人職責(zé)，嚴(yán)格遵守國家自然科學(xué)基金委員會的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，認(rèn)真開展工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。若填報(bào)失實(shí)和違反規(guī)定，本人將承擔(dān)全部責(zé)任。簽字：項(xiàng)目組主要成員承諾：我保證有關(guān)申報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得基金資助，我將嚴(yán)格遵守國家自然科學(xué)基金委員會的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，加強(qiáng)合作、信息資源共享，認(rèn)真開展工作，及時(shí)向項(xiàng)目負(fù)責(zé)人報(bào)送有關(guān)材料。若個(gè)人信息失實(shí)、執(zhí)行項(xiàng)目中違反規(guī)定，本人將承擔(dān)相關(guān)責(zé)任。編號姓名工作單位名稱項(xiàng)目分工每年工作時(shí)間(月)簽字12345678910依托單位及合作單位承諾：已按填報(bào)說明對申請人的資格和申請書內(nèi)容進(jìn)行了審核。申請項(xiàng)目如獲資助，我單位保證對研究計(jì)劃實(shí)施所需要的人力、物力和工作時(shí)間等條件給予保障，嚴(yán)格遵守國家自然科學(xué)基金委員會有關(guān)規(guī)定，督促項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和項(xiàng)目組成員以及本單位項(xiàng)目管理部門按照國家自然科學(xué)基金委員會的規(guī)定及時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。依托單位公章 合作單位公章1合作單位公章2合作單位公章3日期：日期：日期：日期：

個(gè)人簡歷-1個(gè)人信息中文姓名：拼音姓名：民族：性別：出生日期：其他：職稱：主要研究領(lǐng)域：最高學(xué)位：授予國別(地區(qū))：授予年份：院士：博士后：辦公電話：家庭電話：手機(jī)號碼：傳真：Email：個(gè)人網(wǎng)頁：所在單位：