THXCY-紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程編制說明

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程》編制說明《紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程》團(tuán)標(biāo)制定組二〇二五年五月

目次一、任務(wù)來源及標(biāo)準(zhǔn)制定背景 31、任務(wù)來源 32、標(biāo)準(zhǔn)制定背景 3二、主要工作過程 4三、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要技術(shù)內(nèi)容確定的依據(jù) 51、標(biāo)準(zhǔn)編制原則 52、主要技術(shù)內(nèi)容確定的論據(jù) 5四、采用的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn) 6五、與現(xiàn)行法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系 6六、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù) 7七、標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的意見 7八、貫徹標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議 7九、廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議 7十、其他應(yīng)予說明的事項(xiàng) 7

一、任務(wù)來源及標(biāo)準(zhǔn)制定背景1、任務(wù)來源本技術(shù)規(guī)程由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京市營(yíng)養(yǎng)源研究所有限公司，北京畜牧獸醫(yī)研究所共同申報(bào)。2、標(biāo)準(zhǔn)制定背景（1）政策支持推動(dòng)苜蓿高值化應(yīng)用國(guó)家《“十四五”全國(guó)飼草產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃》提出到2025年，全國(guó)牛羊飼草保障達(dá)到80%以上，苜蓿作為重要飼草被重點(diǎn)扶持。制定本技術(shù)規(guī)程符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《促進(jìn)農(nóng)產(chǎn)品加工業(yè)發(fā)展三年行動(dòng)方案(2024-2026年)》中“促進(jìn)農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化”要求。紫花苜蓿是全世界種植面積最大，應(yīng)用最廣的豆科牧草，素有“牧草之王”的美譽(yù)。紫花苜蓿粗蛋白含量高、產(chǎn)量高，且富含維生素和礦物質(zhì)及其他活性物質(zhì)，是牛羊等反芻家畜的優(yōu)質(zhì)飼草，在我國(guó)畜牧業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整以及健康可持續(xù)發(fā)展中具有不可或缺的作用。此外，紫花苜蓿還具有固氮能力，能夠培肥地力，減少化肥施用，顯著提高后茬作物產(chǎn)量。（2）維生素E對(duì)飼料開發(fā)具有重要意義維生素E（VitaminE，VE），又名生育酚，1922年由美國(guó)加州大學(xué)HerbertEvans發(fā)現(xiàn)，后經(jīng)多年研究，分離出其生物分子結(jié)晶，并確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為C29H50O2。1924年，阿肯色大學(xué)的Sure首次將其命名為VitaminE（VE）。維生素E是人和動(dòng)物必需卻不能自主合成的維生素。缺乏維生素E會(huì)造成畜禽免疫力和卵巢機(jī)能下降甚至不孕不育等一系列問題。合理補(bǔ)充維生素E能夠提高畜禽的免疫力和繁育性能，改善肉、蛋、奶等畜產(chǎn)品的品質(zhì)。肉牛飼養(yǎng)中，添加VE可以明顯提高肌肉的紅色度，延長(zhǎng)肉品的貨架期；奶牛日糧中添加VE可以顯著提高牛奶的品質(zhì)，抑制牛奶的氧化過程，大幅度延長(zhǎng)牛奶的貯藏時(shí)間并使其保持鮮奶的特殊香味。維生素E在植物葉綠體中合成，天然合成的維生素E包括生育酚（Tocopherol）和生育三烯酚（Tocotrienol）兩大類，根據(jù)芳香環(huán)上甲基位置和數(shù)目的不同生育酚和生育三烯酚又進(jìn)一步分為a、β、γ及δ四種類型。維生素E的積累能夠清除光合作用過程中產(chǎn)生的活性氧，抑制其對(duì)光合膜系統(tǒng)中不飽和脂肪酸長(zhǎng)鏈的損傷，從而保證葉綠體結(jié)構(gòu)和功能的完整。此外，維生素E還具有促進(jìn)種子萌發(fā)、傳遞葉綠體信號(hào)、調(diào)節(jié)葉片茉莉酸含量和增強(qiáng)植物對(duì)多種逆境的抗性作用。紫花苜蓿中維生素E的含量約為15-30mg/kg，是黑麥草的2-3倍，青貯玉米的1.5倍，是畜禽維生素E的重要來源。飼喂維生素E含量高的紫花苜?？蓽p少飼料中合成維生素E的添加量，降低養(yǎng)殖成本，但不同紫花苜蓿品種中維生素E含量不同，因此，精準(zhǔn)地檢測(cè)紫花苜蓿維生素E含量對(duì)于選育高維生素E含量紫花苜蓿具有重要意義。（3）檢測(cè)技術(shù)研究現(xiàn)狀目前，生育酚測(cè)定方法主要有：比色法、熒光法、高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和電化學(xué)分析法等。比色法只能測(cè)定生育酚的總含量，不能區(qū)分各種單體的含量；光譜法前處理繁瑣，共存物對(duì)檢測(cè)結(jié)果干擾較大；氣相色譜法因生育酚分子量大、沸點(diǎn)高，導(dǎo)致其汽化度低，無法直接進(jìn)樣檢測(cè)；氣相色譜-質(zhì)譜法儀器昂貴，普適性低；電化學(xué)分析法雖然靈敏度高、具有一定的選擇性，但樣品中共存物的干擾會(huì)導(dǎo)致生育酚結(jié)果偏高；正相高效液相色譜法雖然前處理簡(jiǎn)單，但生育酚易吸附在固定相表面，樣品殘留率高，準(zhǔn)確性差，不適合大批量樣品的檢測(cè)；反相高效液相色譜法具有快速、靈敏、準(zhǔn)確度和精密度高等優(yōu)點(diǎn)，適合于樣品中生育酚含量的測(cè)定。但目前對(duì)紫花苜蓿維生素E測(cè)定的研究較少，本規(guī)程采用高效液相色譜法測(cè)定紫花苜蓿中維生素E的含量，建立紫花苜蓿中維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程，以期為紫花苜蓿維生素E的測(cè)定提供技術(shù)支持，提高紫花苜蓿維生素E的提取效率和質(zhì)量，助力于推動(dòng)紫花苜蓿高附加值產(chǎn)品的利用。二、主要工作過程2025.03月-2025.04月收集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，整理資料，形成工作組討論稿。2025.05月-2025.06月編寫征求意見稿標(biāo)準(zhǔn)文本和《編制說明》。由北京華夏草業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟組織國(guó)內(nèi)相關(guān)專家對(duì)《紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程》征求意見稿及編制說明進(jìn)行會(huì)議評(píng)審。三、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要技術(shù)內(nèi)容確定的依據(jù)1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的要求和規(guī)定編寫本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)制定過程中，始終遵循密切聯(lián)系生產(chǎn)實(shí)踐，確保標(biāo)準(zhǔn)具有較強(qiáng)的科學(xué)性、可操作性；堅(jiān)持促進(jìn)行業(yè)規(guī)范發(fā)展的基本原則，以科學(xué)性、實(shí)用性、先進(jìn)性作為編制標(biāo)準(zhǔn)的指導(dǎo)思想；在文字結(jié)構(gòu)上力求嚴(yán)謹(jǐn)、簡(jiǎn)潔、科學(xué)；在技術(shù)內(nèi)容上力求覆蓋紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。制定過程中除了認(rèn)真總結(jié)紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)遇到的問題，不斷完善，市場(chǎng)應(yīng)用中深入研究，還參考了國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料，符合紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)生產(chǎn)實(shí)際，達(dá)到了內(nèi)容全面、技術(shù)含量高、操作性強(qiáng)的要求。該標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行法律法規(guī)無沖突，并保證了對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)最新版本的引用。2、主要技術(shù)內(nèi)容確定的論據(jù)適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)主要基于紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)的多年應(yīng)用，在實(shí)踐和不斷完善的基礎(chǔ)上初步制定形成了“紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)規(guī)程”。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紫花苜蓿維生素E測(cè)定技術(shù)的術(shù)語和定義、原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、分析步驟、分析結(jié)果的表述、精密度等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于紫花苜蓿維生素E的測(cè)定。規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)制定時(shí)，參照了GB/T1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則，GB/T20000標(biāo)準(zhǔn)化工作指南，GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。（3）術(shù)語與定義本標(biāo)準(zhǔn)中出現(xiàn)的術(shù)語和定義依據(jù)包括著作、專著、已發(fā)表的論文、各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)等國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)起草單位研究應(yīng)用實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，最后經(jīng)參編人員討論確定了本標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語為“紫花苜蓿、維生素E”，并給出相應(yīng)定義。（4）主要技術(shù)指標(biāo)確定的依據(jù)本技術(shù)規(guī)程起草單位為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、北京市營(yíng)養(yǎng)源研究所有限公司。①試樣制備。稱取50mg新鮮葉片在液氮中研磨至均勻一致，儲(chǔ)存于離心管中，樣品現(xiàn)用現(xiàn)制備。②提取。向儲(chǔ)存樣品的離心管中加入1mL甲醇：三氯甲烷溶液（2：1，V：V），室溫避光放置20min。然后加入300μL三氯甲烷和600μL水，渦旋混合均勻后，14000g離心10min。棄去上層水相，將下層有機(jī)相轉(zhuǎn)入三角瓶中。③濃縮。將三角瓶接在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，于40°C水浴中減壓濃縮至近干，用400μL甲醇溶解三角瓶中的殘留物，溶液過0.45μm有機(jī)系濾膜后供高效液相色譜測(cè)定。④測(cè)定技術(shù)。文件規(guī)定了紫花苜蓿中維生素E測(cè)定的高效液相色譜測(cè)定方法。試樣中的維生素E經(jīng)甲醇：三氯甲烷溶液提取、濃縮后，采用C30反相液相色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。優(yōu)化后確定采用C30色譜柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或具同等性能的色譜柱；柱溫30℃；流動(dòng)相采用甲醇：水溶液（95：5，V：V）等度洗脫；流速1mL/min；激發(fā)波長(zhǎng)：294nm，發(fā)射波長(zhǎng)：328nm。在30min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚的基線分離，方法分離度好，響應(yīng)靈敏度高，定量限低，可以滿足紫花苜蓿中維生素E的檢測(cè)要求。試驗(yàn)將維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算直線回歸方程，結(jié)果顯示，α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量在0.20μg/mL-10.00μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，可以滿足檢測(cè)要求。以紫花苜蓿葉片為研究對(duì)象，平行測(cè)定8次，8次平行實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10%，表明該方法的精密度良好，適合定量分析。按照紫花苜蓿中維生素E含量的0.5倍、1倍和2倍水平進(jìn)行3水平6平行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，維生素E回收率的范圍在80~110%，表明本方法回收率高，符合檢測(cè)要求。四、采用的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)無。五、與現(xiàn)行法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)條例沒有沖突。六、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)無。七、標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的意見建議將本標(biāo)準(zhǔn)作為推薦性標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施，并加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)的宣貫。八、貫徹標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議1、本標(biāo)準(zhǔn)屬于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)牽頭制定的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，為成功實(shí)施紫花苜蓿中維生素E的測(cè)定技術(shù)，應(yīng)認(rèn)真執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)技術(shù)要求。2、應(yīng)加強(qiáng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的宣傳、講解和技術(shù)指導(dǎo)，促進(jìn)實(shí)施者熟練掌握標(biāo)準(zhǔn)中的技術(shù)規(guī)范，保證本標(biāo)準(zhǔn)的廣泛推廣