河豚毒素ELISA檢測試劑盒使用說明書Ounuo97001

河南歐諾生物科技有限公司HenanOunuoBiotechnologyCo.LTD地址：河南省鄭州市惠濟(jì)區(qū)大河路街道中原物流港B6-1-06郵編：450049電話：136412806261/4河豚毒素ELISA檢測試劑盒使用說明書貨號：Ounuo97001本品采用競爭性酶免檢測技術(shù)用于鲀魚類肌肉、肝臟、皮膚等樣本中河豚毒素的定量分析，最大可滿足96次測試，在做復(fù)孔的情況下，一次最多可檢測42個(gè)樣本。產(chǎn)品特性：快速（＜30min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法高靈敏度（1.5μg/kg,或ppb）和檢測限低（30μg/kg，或ppb）快速，檢測時(shí)間＜1.5h高的重現(xiàn)性定量限：魚肉、肝臟、魚皮：定量限：魚肉、肝臟、魚皮：50μg/kg檢測限：魚肉、肝臟、魚皮：30μg/kg技術(shù)服務(wù)：電話：133641280626李工請您提供產(chǎn)品貨號、批號、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等相關(guān)信息，以便能快速而高效的為您服務(wù)（貨號及批號見試劑盒外包裝）使用前須知當(dāng)與儀器方法結(jié)果相比時(shí)，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因?yàn)閮x器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標(biāo)分子且還能識別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對數(shù)據(jù)做出合理的分析。任何試劑、檢測程序的改變都可能導(dǎo)致檢測失敗。不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。實(shí)驗(yàn)用水的質(zhì)量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個(gè)月內(nèi)使用完。需要但未提供的設(shè)備和試劑酶標(biāo)儀：配備450nm波長單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支多道移液器：30-300μL量程一支白色、黃色和藍(lán)色吸頭若干恒溫培養(yǎng)箱均質(zhì)器或絞肉機(jī)恒溫水浴鍋甲醇，分析純乙酸，分析純1.樣本前處理一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，如長時(shí)間不用，建議分裝成適量小份于-20或-80℃保存，請勿使用反復(fù)凍融的樣本。【注釋：廢棄的陽性樣本應(yīng)作為有毒廢棄物處理】準(zhǔn)備樣本提取液分別量取甲醇40mL、蒸餾水60mL、冰乙酸0.1mL混勻。1×樣本稀釋液按1份體積4×樣本稀釋液和3份體積的蒸餾水混勻。魚肉、肝臟、魚皮稱取2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋30s;放置于90℃水浴中10min，期間手搖樣本3次；自來水降溫1min，加入1mL正己烷渦旋30s；4000rpm，離心5min；取中間層清液100μL，加入300μL1×樣本稀釋液混勻，取50μL點(diǎn)樣稀釋倍數(shù)：202.檢測步驟檢測前準(zhǔn)備所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;檢測開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；請不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測失敗；標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。洗液（1×）配制取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻TIP加標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，建議從低濃度到高濃度檢測步驟TIP加標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，建議從低濃度到高濃度移取50μL河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；加入50μL河豚毒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；室溫（20-25℃）孵育30min；甩干微孔板，加入300μL洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；TIP加終止液后，請于30min內(nèi)讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μLTIP加終止液后，請于30min內(nèi)讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)結(jié)果計(jì)算以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。其中公式如下logit(B/B0)=klnB為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對應(yīng)的吸光度；B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度；logit(BK為斜率；C為截距計(jì)算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如右：3.原理基于競爭性免疫檢測原理：河豚毒素與預(yù)包被在板上的河豚毒素蛋白偶聯(lián)物競爭結(jié)合有限的抗河豚毒素的抗體，然后加入酶結(jié)合物反應(yīng)，形成酶結(jié)合物—抗河豚毒素抗體—河豚毒素蛋白偶聯(lián)物復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，經(jīng)TMB底物顯色產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加終止液后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，其在450nm下有最大吸收峰。樣本中河豚毒素含量與樣本的吸光度呈負(fù)相關(guān)。4.產(chǎn)品性能檢測限和定量限樣本類別檢測限μg/kg或ppb定量限μg/kg或ppb魚肉、肝臟、魚皮3050特異性（交叉反應(yīng)）化合物交叉反應(yīng)率%河豚毒素（Tetrodotoxin）100精密度：批內(nèi)/間≤10%；準(zhǔn)確度（添加回收）樣本類型添加回收率%魚肉、肝臟、魚皮100±20線性區(qū)間：1.5~40.5ng/mL檢測時(shí)間：45min；保存及有效期本產(chǎn)品需保存在2-8℃，有效期為12個(gè)月；開封使用后建議一個(gè)月內(nèi)使用完。5.產(chǎn)品組成組分?jǐn)?shù)量組分?jǐn)?shù)量預(yù)包被微孔板96孔（8孔*12條）河豚毒素抗體6mL河豚