農(nóng)業(yè)畜禽生產(chǎn)豬群樣品采集及藍(lán)耳病狀態(tài)劃分標(biāo)準(zhǔn)、監(jiān)測預(yù)警及狀態(tài)分類

農(nóng)業(yè)畜禽生產(chǎn)豬群樣品采集及藍(lán)耳病狀態(tài)劃分標(biāo)準(zhǔn)、監(jiān)測預(yù)警及狀態(tài)分類藍(lán)耳病狀態(tài)劃分及劃分標(biāo)準(zhǔn)豬群樣品采集及檢測目的豬藍(lán)耳病的監(jiān)測預(yù)警及狀態(tài)分類PRRSV感染后體內(nèi)的病毒與抗體動態(tài)變化規(guī)律PRRSV感染豬只后，病毒會在體內(nèi)大量復(fù)制，6-12h即可出現(xiàn)病毒血癥；病毒血癥可持續(xù)1個月以上。但是，組織內(nèi)病毒存續(xù)時間比在血液中長，大約150天左右；藍(lán)耳病毒主要存在于淋巴組織中，在各種因素刺激下，可再次激活并通過口鼻分泌物等傳播。PRRSV感染后7-9天即可產(chǎn)生特異性的抗體，但這些抗體大部分是針對N蛋白的，N蛋白抗體并沒有中和活性，ELISA總抗體維持1年左右。PRRSV中和抗體在感染后3-4周產(chǎn)生，維持時間為3～5個月，中和抗體的出現(xiàn)與肺部病毒的消除具有一致性。中和抗體通過降低病毒粘附力、阻止病毒細(xì)胞內(nèi)化而起作用。圖1.PRRSV感染后體內(nèi)的病毒與抗體動態(tài)變化規(guī)律另外，γ-干擾素產(chǎn)生細(xì)胞在感染后3-4周出現(xiàn)，維持時間可以長達(dá)1年甚至更長。PRRSV細(xì)胞免疫方面，有研究稱，γ-干擾素與藍(lán)耳病的清除相關(guān)或者能夠抵抗病毒的感染。這些免疫學(xué)變化的出現(xiàn)，反映了豬只對PRRSV的免疫應(yīng)答過程，也提示了我們在防控PRRSV感染時需要注意增強(qiáng)豬只的免疫力。與偽狂犬等疾病不同，豬藍(lán)耳病是一個自限性疾病，沒有外來感染的話，機(jī)體最終會清除病毒，抗體也會轉(zhuǎn)陰。豬場藍(lán)耳病感染狀態(tài)評估豬場藍(lán)耳病的監(jiān)測預(yù)警是制定綜合防控措施的基礎(chǔ)，是藍(lán)耳病防控的重要環(huán)節(jié)。豬場藍(lán)耳病感染狀態(tài)可以從豬場生產(chǎn)數(shù)據(jù)，豬群健康巡視（臨床癥狀、個體治療反饋）、病原學(xué)檢測和血清學(xué)監(jiān)測等方面進(jìn)行全面的評估。2.1豬場生產(chǎn)成績豬場出現(xiàn)藍(lán)耳病波動后，其生產(chǎn)數(shù)據(jù)也會隨之變化，對生產(chǎn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，有助于豬場藍(lán)耳病的早期預(yù)警。母豬采食量、流產(chǎn)數(shù)量、配種分娩率、新生仔豬無效仔率（木乃伊、死產(chǎn)、弱仔等）、產(chǎn)房成活率、保育成活率等是較為敏感的參數(shù)指標(biāo)。母豬流產(chǎn)率的異常上升往往要比檢測到PRRSV爆發(fā)要提前1-4周。

圖2監(jiān)測繁殖群生產(chǎn)數(shù)據(jù)有助于藍(lán)耳病早期監(jiān)測預(yù)警通常認(rèn)為（注意：這個標(biāo)準(zhǔn)各公司并不統(tǒng)一）：（1）藍(lán)耳病穩(wěn)定場標(biāo)準(zhǔn)：妊娠后期流產(chǎn)率＜1%；分娩舍無效仔率＜5%；保育死淘率＜3%；藍(lán)耳病抗體離散度CV%＜30%。（2）藍(lán)耳病不穩(wěn)定場特征：母豬妊娠后期流產(chǎn)率＞3%；1%＜母豬早產(chǎn)率＜5%；分娩舍無效仔率＞10%；5%＜保育死淘率＜10%；育肥豬呼吸道綜合征突出；50%＜藍(lán)耳病抗體離散度CV%＜70%。（3）藍(lán)耳病暴發(fā)場特征：各階段豬群均出現(xiàn)典型的藍(lán)耳病癥狀；母豬妊娠后期流產(chǎn)、早產(chǎn)＞10%；無效仔率＞10%；保育死淘率＞10%；藍(lán)耳病抗體離散度CV%＞100%；S/P值＞2.5占比超過10%。2.2病原學(xué)檢測豬藍(lán)耳病病毒可以在血液中檢測到，也可以在扁桃體、口腔液、精液、臍帶血、產(chǎn)房處理液（斷尾、閹割、乳房擦拭液）中檢測到。發(fā)病、死亡豬的肺臟、脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)等組織都是很好的樣品。流產(chǎn)母豬采集流產(chǎn)胎兒、母豬血液、口腔液進(jìn)行檢測，采集流產(chǎn)胎兒時盡量多采集幾個胎兒的肺臟，也可以采集成形流產(chǎn)胎兒的舌尖作為檢測樣品。產(chǎn)房小豬監(jiān)測可采集斷尾液、睪丸浸出液、母豬乳房擦拭液、死亡小豬（或死胎）的舌尖等樣品，采集斷尾液或睪丸浸出液時，是將整窩的處理液作為1個樣品。如果產(chǎn)房處理液檢測為陽性，表明母豬在排毒，存在產(chǎn)房仔豬的早期感染，需要提前采取干預(yù)措施，注射長效抗生素（如加米欣，15%加米霉素注射液）預(yù)防細(xì)菌繼發(fā)感染，降低死亡率等。保育階段重點(diǎn)對斷奶弱豬、發(fā)病小豬采集血樣，也可采集口腔液進(jìn)行檢測。育肥豬、后備母豬往往采集口腔液或血液。表1豬場PRRSV監(jiān)測采樣方案豬群日齡采集樣品檢測目的備注流產(chǎn)母豬/流產(chǎn)胎兒/血液/口腔液流產(chǎn)原因檢測胎兒樣品需多采集幾份產(chǎn)房小豬1日齡臍帶血、死產(chǎn)胎兒舌尖母豬垂直傳播狀態(tài)可5窩合1份檢測3-7日齡斷尾液、睪丸處理液母豬垂直傳播狀態(tài)整窩采集，可5合混1份檢測13日齡

(免疫前)血清/咽拭子產(chǎn)房仔豬感染狀態(tài)采集弱豬30份，5合1檢測(選測)21-28日齡血清斷奶豬感染狀態(tài)斷奶時采集30份，5合1檢測保育豬40-70日齡血清/口腔液保育豬水平傳播重點(diǎn)采集弱豬，可結(jié)合抗體檢測；病原5合1育肥豬100-120日齡血清/口腔液育肥豬水平傳播可結(jié)合抗體監(jiān)測，病原5合1后備豬入群前血清/口腔液感染狀態(tài)監(jiān)測結(jié)合抗體監(jiān)測，5合1;口腔液每欄單檢。公豬/精液/血清/口腔液公豬感染狀態(tài)全檢，每周/月1次，每份單檢?？刹捎肦T-PCR或熒光RT-PCR方法，藍(lán)耳病核酸檢測有幾個行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)供選擇。熒光定量RT-PCR方法除評價藍(lán)耳病病毒陽性率以外,還可評價其病毒載量。當(dāng)前我國豬場藍(lán)耳病流行毒株種類多，美洲型和歐洲型毒株均需檢測。PRRSV容易發(fā)生變異，對檢測的引物和探針需要進(jìn)行評估，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果和臨床不符時，需要多用幾種檢測方法或試劑盒進(jìn)行復(fù)核檢測。豬場監(jiān)測到陽性樣本（Ct值低于30），有必要對藍(lán)耳病毒株進(jìn)行GP5和NSP2基因擴(kuò)增和測序，并進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，確定藍(lán)耳病病毒的毒株類型；必要時，對藍(lán)耳病毒株進(jìn)行全基因組測序分析。2.3抗體監(jiān)測可將豬群按照生產(chǎn)流程分為多個小群體（如將種豬分為：種公豬、后備母豬、懷孕中期、懷孕后期、哺乳期母豬群），將仔豬或肉豬群按年齡階段進(jìn)行分群（如將豬群分為30日齡、60日齡、90日齡、120日齡、150日齡等小群體或按照周齡進(jìn)行分群），每個階段（每個小的群體）應(yīng)采集10份以上樣品，種公豬應(yīng)全部采樣監(jiān)測。后備母豬入群監(jiān)測，應(yīng)全部采樣，最好能監(jiān)測1-2次，間隔2周。對藍(lán)耳病抗體的檢測常采用ELISA方法。檢測藍(lán)耳病的抗體有兩類試劑，一類是檢測N蛋白抗體，出現(xiàn)早，消失快，以IDEXX、百測、廣州悅洋和北京金諾為代表；另一類是檢測GP蛋白抗體，出現(xiàn)較晚，持續(xù)時間較長，以LSI、海博萊等為代表。對于藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒的選擇要根據(jù)檢測的目的，要從檢測結(jié)果與臨床表現(xiàn)、感染狀態(tài)、免疫狀態(tài)的對應(yīng)關(guān)系，以及試劑盒的穩(wěn)定性等方面進(jìn)行綜合考慮。豬場藍(lán)耳病狀態(tài)分類藍(lán)耳病狀態(tài)劃分抗原檢測抗體檢測劃分標(biāo)準(zhǔn)陽性不穩(wěn)定，高流行率

(I-A);(藍(lán)耳疫情發(fā)

生場)陽性，排毒

豬只比例高陽性1、不符合其他類別標(biāo)準(zhǔn)的豬群默認(rèn)為該類別。

2、妊娠母豬繁殖障礙：流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、返情；各日齡

豬呼吸道疾病、繼發(fā)感染等；仔豬斷奶前高死亡率。

3、各類臨床樣品檢測抗原陽性；豬群血清抗體陽性或抗體陽

性率增高。陽性不穩(wěn)定，低流行率

(I-B);(藍(lán)耳陽性/

不穩(wěn)定場)陽性，排毒

豬只比例低陽性1、存在任何與PRRS相關(guān)的臨床癥狀：(1)妊娠母豬散發(fā)性流

產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔；(2)斷奶豬死淘率增高。

2、每月一次檢測，持續(xù)90天或至少4個批，血清/處理液/口

腔液抗原檢測，5混合1。斷奶期仔豬連續(xù)90天保持抗原陽性

率<25%。陽性穩(wěn)定(Ⅱ);(陽性

/穩(wěn)定場)不確定陽性每月一次檢測，持續(xù)90天或至少4個批，血清/處理液/口腔

液抗原檢測，5混合1,斷奶期仔豬連續(xù)90天保持抗原陰性。陽性穩(wěn)定，使用疫苗免

疫(Ⅱ-VX);(陽性/穩(wěn)

定場)不確定陽性每月一次檢測，持續(xù)90天或至少4個批，血清/處理液/口腔

液抗原檢測，5混合1,斷奶期仔豬連續(xù)90天保持野毒抗原陰

性。趨于陰性場陰性，不排毒陰性豬群開展剔除陽性豬，引進(jìn)藍(lán)耳陰性后備豬后60天未感染，

未接種疫苗；ELISA檢測后備母豬，豬群為陰性。陰性場陰性，不排毒陰性所有之前感染檢測陽性豬只剔除豬群；ELISA檢測后備母豬，

豬群為陰性；豬群確認(rèn)ELISA檢測陰性持續(xù)一年。表2豬場PRRSV感染狀態(tài)分類目前行業(yè)多采用的分類標(biāo)準(zhǔn)是2019年由美國豬獸醫(yī)協(xié)會（AASV）與美國國家豬肉委員會共同修訂的。也有專家將豬場PRRSV的感染狀態(tài)分為：發(fā)病場，陽性/不穩(wěn)定場，陽性/穩(wěn)定場和陰性場。開展藍(lán)耳病遺傳進(jìn)化分析豬藍(lán)耳病流行廣泛、危害巨大，其病原容易發(fā)生變異、重組，臨床流行毒株多樣性明顯。據(jù)哈爾濱獸醫(yī)研究所等國內(nèi)多個科研院所的監(jiān)測結(jié)果表明，我國豬群中存在L1、L3、L5、L8、L9譜系藍(lán)耳病毒株，流行最廣泛的還是以類NADC30、類NADC34為代表的L1譜系毒株。我國當(dāng)前應(yīng)用的PRRS疫苗主要包括L8分支活疫苗（CH-1R