人生長(zhǎng)激素對(duì)宿主酵母菌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及在小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平研究－鮑斐

21.第十屆“挑戰(zhàn)杯”全國(guó)大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽華南農(nóng)業(yè)大學(xué)校內(nèi)選拔賽報(bào)名表申報(bào)者情況姓名鮑斐性別男出生年月1985.9所在學(xué)院資源環(huán)境學(xué)院現(xiàn)學(xué)歷本科生專業(yè)植物保護(hù)年級(jí)2004級(jí)學(xué)制4年入學(xué)時(shí)間2004.9作品全稱人生長(zhǎng)激素對(duì)宿主酵母菌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及在小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平研究作品類別自然科學(xué)類論文作品所屬領(lǐng)域生命科學(xué)住址華南農(nóng)業(yè)大學(xué)東區(qū)學(xué)生公寓5棟423室宿舍電話38634997手機(jī)號(hào)子信箱baofei11028@163合作者情況姓名性別年齡最高學(xué)歷所在單位陳佳女21本科生資源環(huán)境學(xué)院04植保5班鄭維娜女21本科生資源環(huán)境學(xué)院04植保5班李永彬男21本科生資源環(huán)境學(xué)院04植保5班鄭少英女21本科生資源環(huán)境學(xué)院04植保5班作品的目的和基本思路本課題的研究目的就是利用釀酒酵母，通過(guò)同源重組將帶有泛素啟動(dòng)子的hGH基因整合至釀酒酵母染色體中，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定遺傳；再通過(guò)口服方式，將hGH基因輸送進(jìn)腸胃道，通過(guò)腸的上皮細(xì)胞將相應(yīng)基因或基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，分泌至腸道或血循環(huán)系統(tǒng)，發(fā)揮其重要功能。作品的科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處（設(shè)計(jì)、發(fā)明寫出其技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)）釀酒酵母菌體作為消化道基因治療的目的基因載體和宿主，解決了大腸桿菌不利于胞內(nèi)加工及其系統(tǒng)存在內(nèi)在毒素不能廣泛應(yīng)用于人源治療性蛋白以及口服基因治療，也解決了以病毒為載體所產(chǎn)生的人體排斥性、高風(fēng)險(xiǎn)成本致癌潛在毒性的缺點(diǎn)，而且能有效的防止胃酸和消化道中的多種酶類對(duì)目的基因的破壞，有利于消化道對(duì)目的基因的吸收。釀酒酵母的遺傳背景清晰且沒(méi)有毒性，因而可以作為消化道基因治療的理想載體；利用泛素啟動(dòng)子在細(xì)胞體內(nèi)持久而高水平的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，可獲得外源基因的高水平表達(dá)。人生長(zhǎng)激素分泌減少而導(dǎo)致的衰老，并不是不可預(yù)防和不逆轉(zhuǎn)的，可以通過(guò)補(bǔ)充人生長(zhǎng)激素來(lái)克服，即人生長(zhǎng)激素替代療法。因而消化道的基因治療以溫和的方式，低廉的成本，較低的風(fēng)險(xiǎn)等優(yōu)勢(shì)，成為生物技術(shù)誘人的研究領(lǐng)域。以攜帶人生長(zhǎng)激素基因的重組釀酒酵母進(jìn)行小鼠體內(nèi)灌胃實(shí)驗(yàn)，不僅可以驗(yàn)證重組釀酒酵母消化道途徑轉(zhuǎn)基因的可能，為以此進(jìn)行深入的消化道途徑基因治療研究提供了新的技術(shù)平臺(tái)，還將為消化道途徑基因治療藥物的研究及開(kāi)發(fā)提供了新思路。作品的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義人生長(zhǎng)激素，臨床上廣泛應(yīng)用于抗衰老、治療骨質(zhì)疏松癥、侏儒癥、心血管疾病以及創(chuàng)傷組織修復(fù)等；在美容方面，也是目前唯一能從根本上使皮膚恢復(fù)年青面貌的抗衰老化妝品原料添加劑，它開(kāi)創(chuàng)了消化道基因治療的新紀(jì)元，具有巨大的開(kāi)發(fā)前景，也為實(shí)現(xiàn)消化道基因治療提供了實(shí)驗(yàn)室工作基礎(chǔ)。文章摘要（技術(shù)、發(fā)明寫出作品的技術(shù)特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，提供該作品的適用范圍及推廣前景的技術(shù)性說(shuō)明）人生長(zhǎng)激素廣泛應(yīng)用于抗衰老、治療骨質(zhì)疏松癥、侏儒癥、心血管疾病以及創(chuàng)傷組織修復(fù)等，研究重組人生長(zhǎng)激素，對(duì)廣泛應(yīng)用該生物制劑具有重要意義。本課題的研究對(duì)象為攜帶泛素啟動(dòng)子(UbC)和人生長(zhǎng)激素(humangrowthhormone,hGH)基因的重組釀酒酵母。通過(guò)酵母形態(tài)觀察、生長(zhǎng)曲線繪制實(shí)驗(yàn)證明該外源基因的存在對(duì)酵母的生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)影響。通過(guò)以Balb/c小鼠灌胃實(shí)驗(yàn)證明帶有泛素啟動(dòng)子的人生長(zhǎng)激素基因可借助酵母宿主細(xì)胞進(jìn)入小鼠體內(nèi)獲得長(zhǎng)期高效的表達(dá)。該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物根據(jù)管飼材料不同分為2組：第1組管飼空白酵母為對(duì)照組；第2組管飼重組釀酒酵母為實(shí)驗(yàn)組，每組15只，連續(xù)管飼10天，第15天開(kāi)始觀察小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育情況，并通過(guò)眶動(dòng)脈和靜脈采集小鼠血清，檢測(cè)人生長(zhǎng)激素基因在小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平和表達(dá)時(shí)間。通過(guò)以上研究，希望能為深入的消化道途徑基因治療提供新的技術(shù)平臺(tái)，并為消化道途徑基因治療藥物的研究及開(kāi)發(fā)提供新思路。其技術(shù)路線如下：攜帶人生長(zhǎng)激素基因的重組酵母攜帶人生長(zhǎng)激素基因的重組酵母重組酵母培養(yǎng)研究血清的分離和保存眶動(dòng)脈和靜脈采血人生長(zhǎng)激素的檢測(cè)小鼠灌胃實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃10天酵母形態(tài)觀察生長(zhǎng)曲線繪制態(tài)觀察小鼠生長(zhǎng)發(fā)育等情況的觀察人生長(zhǎng)激素在小鼠體內(nèi)獲得表達(dá)人生長(zhǎng)激素在小鼠體內(nèi)