紫外分光光度法快速測定食品中三聚氰胺含量 畢業(yè)論文.doc

i 紫外分光光度法快速測定食品中三聚氰胺含量 摘 要 以牛奶、奶粉等乳制品為研究對象，建立紫外分光光度法快速測 定食品中三聚氰胺含量的方法。以三氯乙酸作為溶劑，用t6新世紀紫 外分光光度計在波長為240nm下測定三聚氰胺的吸光度。實驗結(jié)果表明： 三聚氰胺在濃度范圍為1.69.6g/ml內(nèi)線性關(guān)系良好；表觀摩爾吸 光系數(shù)為6.3104l/(molcm)；回收率為98.3%107.8%，相對標準誤 差小于1.7%。該方法準確、快速、簡便,可用于測定實際樣品，為三聚 氰胺的檢測提供了新方法。 關(guān)鍵詞：紫外分光光度計;食品;三聚氰胺 1 rapid content determination of melamine in food power by uv-spectrophotometer abstract with milk, milk powder, etc dairy for research object, establish uv spectrophotometry determine the food melamine content method. with thetrichloroacetic acid as solvent, the wave of melamine absorbency is determined with uv-t6 in new century-spectrophotometer at 240nm. showthat: a good linear relationship exists when the concent ration of melaminefalls within the range of 1.69.6g/ml; its apparent molar absorption coeffiencts are 6.3104l/(mol cm); recovery is 98.3% 107.8%. the method is accurate, rapid, simple, used for real samples fordetermination of melamine, provides a new method of detection. key words: uv spectrophotometer;food; melamine 2 目 錄 引引 言言1 第一章第一章 材料與方法材料與方法2 1.1 試驗材料2 1.2 儀器設備2 1.3 試驗設計2 1.3.1 溶液的配制2 1.3.2 檢測波長的選擇.3 1.3.3 標準曲線的繪制.3 1.3.4 回收率試驗4 1.3.5 樣品的測定5 第二章第二章 結(jié)果與分析結(jié)果與分析6 2.1 結(jié)果.6 2.2 分析.6 2.3 提取溶劑的選擇.6 2.4 結(jié)論.7 參考文獻參考文獻8 謝謝 辭辭.9 1 引 言 三鹿牌嬰幼兒奶粉違法添加三聚氰胺的事件，沖擊了中國整個奶制品行業(yè)，嚴 重損害了群眾利益，造成了極其惡劣的社會影響。動物性食品及動物飼料中同樣也 存在三聚氰胺殘留問題，三聚氰胺在動物源性食品中的潛在危害正引起全社會的關(guān) 注。 三聚氰胺（melamine） ，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物，重要的氮雜環(huán)有 機化工原料。簡稱三胺，又叫2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、2，4，6-三氨基脲、 蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，分子式c3n3（nh2）3，分子量126.12。三聚氰胺 為純白色單斜棱晶體，無味，密度1.573gcm3 (16)。常壓熔點354（分解） ； 快速加熱升華，升華溫度300。它溶于熱水，微溶于冷水，極微溶于熱乙醇，不 溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等，低 毒。在一般情況下較穩(wěn)定，但在高溫下可能會分解放出氰化物。呈弱堿性（pkb=8） ， 與鹽酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺鹽。在中性或微堿性情況下， 與甲醛縮合而成各種羥甲基三聚氰胺，但在微酸性中（ph值5.56.5）羥甲基的衍 生物進行縮聚反應而生成樹脂產(chǎn)物。遇強酸或強堿水溶液水解，胺基逐步被羥基取 代，先生成三聚氰酸二酰胺，進一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。 最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲醛樹脂（mf）的原料，是不允許添加到食品中 的。不法商人利用其含氮量高(約66.7%)且無異味,價格低廉,用傳統(tǒng)的凱氏定氮法 無法區(qū)別是否是對動物機體有益的蛋白氮還是不能被利用的非蛋白氮,在加工食品 或飼料中添加三聚氰胺能造成“高蛋白質(zhì)含量”的假象。食品和飼料中摻入三聚氰 胺會對人和動物健康產(chǎn)生巨大的危害。2004年和2007年,韓國、臺灣和美國相繼發(fā) 生狗、貓等寵物因進食含有三聚氰胺的寵物飼料而導致腎功能衰竭甚至導致死亡的 事1-3。研究顯示,三聚氰胺主要引起腎臟衰竭。因此通過有效的技術(shù)手段,對食品 中三聚氰胺殘留進行檢測,確保食品安全性具有十分重要意義。 目前，國家質(zhì)量標準規(guī)定了高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色 2 譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法三種方法為三聚氰胺的檢測方法，其中高效液相色譜法為確證法。 許多研究者采用了該法及其改進法測定食品中的三聚氰胺4 - 6 ,也有采用反相高 效液相色譜法7 、質(zhì)譜方法測定食品中的三聚氰胺的報道8-10 ，林立等11 報道 了離子色譜-紫外檢測測定液態(tài)奶中的三聚氰胺。但這些方法操作需時較長,設備要 求高。 三聚氰胺結(jié)構(gòu)中有不飽和共軛雙鍵,可在紫外區(qū)產(chǎn)生較強的吸收,故可用紫外分 光光度法快速測定其含量,且此法比高效液相色譜法更經(jīng)濟、省時和易于推廣。本 文以牛奶、奶粉等乳制品作為樣品,以三氯乙酸和乙酸鉛作為提取劑,用紫外分光光 度法在檢測波長為240nm處測定三聚氰胺的含量。 第一章 材料與方法 1.1 試驗材料試驗材料 三聚氰胺標準樣品；乙酸鉛(分析純)；三氯乙酸(分析純)；實驗用水為重蒸水。 1.2 儀器設備儀器設備 t6新世紀紫外-可見分光光度計，fa1004a型電子分析天平，燒杯，玻璃棒，離 心機，移液管，10ml容量瓶，50ml容量瓶，吸耳球。 1.3 試驗設計試驗設計 1.3.1 溶液的配制溶液的配制 三氯乙酸溶液的配制:準確稱取10g三氯乙酸用重蒸水配制成1%的溶液,置于1l 3 容量瓶中作為溶劑備用。 三聚氰胺母液的配制:準確稱取4mg三聚氰胺用配制好的1%的三氯乙酸溶液作為 溶劑,配制濃度為0.08mg/ml的三聚氰胺溶液于50ml容量瓶中備用。 1.3.2 檢測波長的選擇檢測波長的選擇 用1%的三氯乙酸溶液作為空白對照,用t6新世紀紫外可見分光光度計,將質(zhì)量 濃度分2.14,3.62,5.10,6.58g/ml的三聚氰胺溶液,在波長200400nm范圍內(nèi)掃描， 發(fā)現(xiàn)三聚氰胺在236nm波長處有最大吸收,綜合各方面條件及相關(guān)文獻，選擇240nm 為測定三聚氰胺含量的適宜檢測波長。 1.3.3 標準曲線的繪制標準曲線的繪制 分別吸取濃度為0.08mg/ml的母液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml到10ml容量瓶中,用 1%三氯乙酸溶液進行定容。在240nm的檢測波長下測定其吸光度值a,然后以濃度為 橫坐標,吸光度為縱坐標繪制三聚氰胺標準曲線,并對其進行線性回歸。實驗中三聚 氰胺濃度及其對應的吸光度值a數(shù)據(jù)見表1和圖1。 表1 三聚氰胺濃度及其對應的吸光度值a數(shù)據(jù) 三聚氰胺濃度 （g/ml） 吸光度值 a 1.60.1039 3.2 0.1800 4.80.2620 6.40.3323 8.0 0.4085 9.60.4847 斜率(k)=0.0475 4 三聚氰胺標準曲線圖 y = 0.0475x + 0.0293 r2 = 0.9997 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 024681012 三聚氰胺濃度（ug/ml） 吸光度值a 吸光度值a 線性(吸光度 值a) 圖1 三聚氰胺標準曲線圖 從表1和圖1可知，回歸方程為y=0.0475x+0.0293,表觀摩爾吸光系為 6.38104l/(molcm),相關(guān)系數(shù)r=0.9997,實驗結(jié)果表明,工作曲線在所選定的濃 度范圍內(nèi)具有很好的線性關(guān)系。 1.3.4 回收率試驗回收率試驗 取適量三聚氰胺樣品作為對照,用1%的三氯乙酸作為溶劑,在線性范圍內(nèi)配制高、 中、低3個濃度的樣品(每個濃度各有3個平行樣,共9個樣),定容,在240nm下分別測 定其吸光度,測得的平均回收率為98.3%107.8%，相對標準誤差rsd小于1.7%。結(jié) 果見表2 b=0.0293 回歸方程 y=0.0475x+0.0293 5 表2 三聚氰胺回收率試驗結(jié)果 加入值（g/ml) 測定值（g/ml) 平均回收率/% rsd/% 2.362 2.1582.334 107.81.7 2.286 5.563 5.7805.794 98.9 1.2 5.695 7.732 7.8607.691 98.3 0.4 7.75 1.3.5 樣品的測定樣品的測定 稱取約0.4g牛奶樣品(精確至0.01g)于100ml燒杯中,加入配好的1%三氯乙酸 50ml。用璃棒不停攪拌10min,使牛奶樣品全部均勻散布在溶液中,加入2ml2%的乙酸 鉛溶液,靜止沉降15min,取上清液在離心機中以5000r/min離心10分鐘，然后取離心 過的上清液過孔徑0.45m有機濾膜,供測試用。并將測定結(jié)果與高效液相色譜法進 行比較,結(jié)果見表3。 表3 牛奶樣品測定結(jié)果對比(g/kg) 牛奶樣品 12 3 平均值 6 本法 647.33654.68 657.56 653.19 色譜法 687.6 692.5 691.4 690.5 第二章 結(jié)果與分析 2.1 結(jié)果結(jié)果 結(jié)果見表 3,可以看出,檢測結(jié)果與高效液相色譜法基本吻合。 2.2 分析分析 三聚氰胺回收率試驗中的相關(guān)計算按如下公式計算： d=x-_x 式中： d-偏差 x-三聚氰胺回收的測定值 _x-三聚氰胺回收測定值的平均值 相對標準差（rsd%）=（sx）100% r-相關(guān)系數(shù) r值在-1r1之間，即當0r1與a有關(guān)系，r越接近1，a 與濃度的線性關(guān)系越好。 2.3 提取溶劑的選擇提取溶劑的選擇 三聚氰胺與酸反應生成三聚氰胺鹽,而且酸性條件下有利于樣品中蛋白質(zhì)的變 性,故宜采用酸性溶液提取三聚氰胺，如本實驗中用到的三氯乙酸溶液。因為加入 重金屬鹽類同樣起沉淀蛋白的作用，此外提取溶劑中加入乙酸鹽,可以與三氯乙酸 形成緩沖鹽而減少ph的波動變化,有利于待測物的穩(wěn)定與提取效果,減少干擾如本實 7 驗室中用到的乙酸鉛溶液。 2.4 結(jié)論結(jié)論 實驗表明,此檢測方法操作準確，快速，簡便,具有良好的準確性和回收率,檢 測限可達到1.0g/kg,實驗檢測結(jié)果與高效液相色譜相比較二者基本吻合。實驗 所用儀器應用比較廣泛,價格相對便宜,應用價值較高,可滿足各行業(yè)實驗室對三聚 氰胺分析檢測的要求。 8 參考文獻 1brown c a, jeong k s, poppenga r h, etal1outbreaks ofrenalfailure associated with melamine and cyanuric acid in dogsand cats in 2004 and2007j1vet diagn invest, 2007,19:525- 5311. 2thomp son m e, lewin- smith m r, kalasinsky v f, et al1characterization of melamine - containing and calcium oxalatecrystalsin three dogs with suspected pet food-inducednephrotoxicosis j1vet pathol,2008,45:417-4261. 3cianciolore,bischoffk,ebeljg,etal1clinicopathologic,histologic,and toxicologic findings in 70 cats inadvertentlyexposed to pet food contaminated with melamine and cyanuric acidj1am vetmed assoc,2008,233:729-7371. 4劉海日,池曉峰,彭茵,等.高效液相色譜法快速測定乳制品中三聚氰胺j.中國衛(wèi)生檢驗雜 志,2009,19(5):975-976. 5周建科,張明翠,宋歌,等.高效液相色譜法測定鴨肉中的三聚氰胺j.分析試驗室, 2009,28(增刊):156-158. 6張微,楊秀飚,黃定芳,等.改進乳制品中三聚氰胺液相色譜檢驗方法的研究j.現(xiàn)代食品科 技,2009,25(7):846-847. 7侯升杰,王輝,丁明玉.反相高效液相色譜法同時分析三聚氰酸和三聚氰胺j.中國科學(b輯:化 學),