實(shí)驗(yàn)七酶的性質(zhì)影響因素實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)七 酶的性質(zhì)影響因素實(shí)驗(yàn)一、目的要求了解酶的活性影響酶促反應(yīng)與pH、溫度、抑制劑和活化劑對(duì)酶活性的重要影響。二、原理影響酶活性的因素比較多，如溫度、pH、活化劑、抑制劑等，本實(shí)驗(yàn)就這些因素對(duì)酶活性的影響進(jìn)行試驗(yàn)。酶活性對(duì)pH極為敏感，每種酶通常只能在一定pH范圍內(nèi)表現(xiàn)活力，并且有一個(gè)表現(xiàn)為具有最高活性的pH，偏離最適pH較遠(yuǎn)，酶的活性越低，甚至消失，不同酶有不同的最適pH，如胃蛋白酶的最適pH為1.9，而胰蛋白酶的最適pH為8.1。人的唾液淀粉酶在pH3.89.4之間表現(xiàn)其活性，最適pH約為6.8。不同酶的最適pH值不同。然而，酶的最適pH受底物性質(zhì)和緩沖液性質(zhì)的影響。例如，在磷酸緩沖液中，其最適pH為6.4-6.6，在醋酸緩沖液中則為5.6。酶的活性受溫度的影響也很大。一般說來，在一定溫度范圍內(nèi)，酶活性隨溫度升高，活性增大，并且有一個(gè)使活性達(dá)到最大值的最適溫度，偏離最適溫度越遠(yuǎn)，酶的活性越小，甚至喪失（一種酶的最適溫度，并非完全固定，它可受作用時(shí)間的長短，pH的變化等因素影響，一般作用時(shí)間長，最適溫度低，而作用時(shí)間短，則最適溫度高。但一般來說，偏離值不會(huì)很大）。人的唾液淀粉酶活性隨著溫度的升高而升高，直到37左右，溫度更高時(shí)酶的活性則下降。有些酶促反應(yīng)需要加入某種物質(zhì)，反應(yīng)速度才加快，如唾液淀粉酶遇Cl-時(shí)，活性增高，這種增高酶活性的物質(zhì)，稱為活化劑，其它的陰離子，如Br-、NO3-和I-對(duì)該酶也有激活作用，但較微弱；相反，在酶促反應(yīng)中，有些物質(zhì)能足以阻抑酶促反應(yīng)速度，這種物質(zhì)稱為抑制劑，如Cu2+就是唾液淀粉酶的抑制劑。激活劑和抑制劑影響酶活性的劑量是很少的，并且常具有特異性。所以，酶的活性有時(shí)還受其它一些物質(zhì)的影響。在本實(shí)驗(yàn)中，以稀釋的唾液作為淀粉酶液。唾液內(nèi)的淀粉酶可將淀粉逐步水解成各種不同大小的糊精分子，最終產(chǎn)物為麥芽糖和少量的葡萄糖。它們遇碘呈不同的顏色。直鏈淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈藍(lán)色；糊精按分子從大到小的順序，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色或橙黃色，最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯顏色： 由于在不同溫度，不同pH，或者在有激活劑或抑制劑存在的條件下唾液淀粉酶的活性高低不同，則淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反應(yīng)混合物遇碘所呈現(xiàn)的顏色來判斷，從而可了解上述諸因素對(duì)酶活性的影響。但需注意在堿性條件下碘會(huì)發(fā)生歧化反應(yīng)，部分碘形成無色的碘酸鹽、次碘酸鹽，此時(shí)應(yīng)增加碘液加入量。上述四種因素是影響酶活性的幾種主要因素，因而也是影響酶反應(yīng)速度的主要因素，酶活性高，與之作用的一定量的底物反應(yīng)時(shí)間就越短，反之則長。故可用時(shí)間來表示影響酶活性的強(qiáng)弱。三、實(shí)驗(yàn)材料、器材與試劑（一）實(shí)驗(yàn)材料1.唾液淀粉酶的制備 (1)提?。簩?shí)驗(yàn)者先用水漱口清潔口腔，然后含一小口（約5mL）蒸餾水于口中輕嗽一、二分鐘。 (2)稀釋：將酶提取液用水定容至100mL。作為唾液淀粉酶的樣品液。 （由于不同人或同一人不同時(shí)間收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀釋倍數(shù)可以是50300倍，甚至超過此范圍。）（二）器具1.試管及試管架2.吸管3.白瓷板4.燒杯5.水浴鍋6.量筒7.漏斗與濾紙8.滴管（三）試劑1.冰水；2.0.1%CuSO4溶液；3.0.3%NaCl的1%淀粉溶液：先用蒸餾水配制好0.3%NaCl溶液，然后稱取1g可溶性淀粉與少量的0.3%NaCl溶液混合，之后傾入沸0.3%NaCl溶液直至稀釋到100mL，需新鮮配制。4.磷酸緩沖液（pH5.8，6.2，7.0，7.6，8.0五種）；pH0.2mol/LNa2PO40.2 mol/LNaH2PO45.88.0mL92.0mL6.218.5mL81.5mL7.061.0mL39.0mL7.687.0ml13.0mL8.094.5mL5.5mL6.碘化鉀-碘溶液：稱取2g碘和6g碘化鉀溶于100mL蒸餾水中。7.1%Na2SO4；8.1%NaCl。四、操作方法1pH對(duì)酶活性的影響（1）取試管一支（設(shè)為6號(hào)管）加入pH7.0的緩沖液3mL，0.3%NaCl的1%淀粉溶液1mL及稀釋唾液2mL，震蕩，將試管置于37水浴鍋內(nèi)保溫，并立即計(jì)時(shí)，每隔12min用滴管從試管中吸1滴樣品于白瓷板上與碘液作用，當(dāng)顏色出現(xiàn)橙黃色時(shí)，從水浴中取出試管，記錄保溫時(shí)間。（2）取試管五支，編號(hào)，分別加入pH5，pH6.2，pH7.0，pH7.6，pH8.0的磷酸鹽緩沖液3mL及各管均加入0.3%NaCl的1%淀粉液1mL，然后各管加入稀釋唾液2mL，搖勻，立即置水浴鍋中37保溫。（3）當(dāng)各管保溫時(shí)間與第6號(hào)試管相等時(shí)，依次從水浴鍋中拿出試管，并立即加入碘液一滴，觀察并記錄各管顏色，然后確定唾液淀粉酶的最適pH。2溫度對(duì)酶活性的影響（1）取試管三支，編號(hào)，各管均加入稀釋唾液2mL，然后將第3管唾液在酒精燈上煮沸。（2）將第1、3管置37恒溫水浴鍋中保溫約5min，第2管置冰水中冷卻約5min。（3）分別在各試管中加入0.3%NaCl的1%淀粉液1mL，振蕩試管后，各管仍在原溫度下作用約20min（三管時(shí)間要一致）。（4）將第2管倒出一半于另一試管（設(shè)為第4號(hào)）中，4號(hào)管又置37恒溫水浴約20min。（5）在第1、2、3管中各加入一滴碘液，觀察顏色并記錄結(jié)果。（6）第4號(hào)管溫浴20min后取出，亦滴入一滴碘液，觀察顏色變化，并比較第2管顏色。（7）比較各管顏色，解釋結(jié)果。3抑制劑和活化劑對(duì)酶活性的影響（1）取試管四支，編號(hào)，各加入稀釋唾液2mL，然后于第1管中加入1mL 1%NaCl，第2管加入1mL0.1%CuSO4，第3管加入1mL1%Na2SO4，第4管加入1mL蒸餾水。（2）各管加入1mL0.3%NaCl的1%淀粉液，振蕩各試管，然后置于37水浴鍋內(nèi)保溫，約5min后，每隔1min從第1管中取出試液1小滴于白瓷板上與碘液反應(yīng)，直至與碘反應(yīng)呈橙黃色時(shí)，將四支試管從水浴中取出。（3）每管取1滴試液于白瓷板上與碘液反應(yīng)，比較各管顏色，若加入1%Na2SO4的第3管顏色仍為淺藍(lán)色或藍(lán)色時(shí)，則將第2、3、4管再放入37 恒溫水浴，直到第3管與碘液反應(yīng)為橙黃色時(shí)，將三支試管同時(shí)從水浴鍋中取出。（4）每支試管滴入1滴碘液，振蕩，比較各管顏色。五、注意事項(xiàng)1. 反應(yīng)試管應(yīng)清洗干凈,不同酶液,試劑及其滴管不能交叉混用;2. 使用混合唾液,或通過預(yù)試選出合適的唾液稀釋度,效果更為顯著. 3 氯化鈉溶液為唾液淀粉酶的激活劑。激活劑和抑制劑不是絕對(duì)的，有些物質(zhì)在低濃度時(shí)為激活劑，而在高濃度時(shí)則