微生物檢查方法驗(yàn)證.ppt

微生物檢查方法驗(yàn)證,介紹內(nèi)容,一、微生物的基礎(chǔ)知識(shí) 二、微生物檢查方法驗(yàn)證,微生物基礎(chǔ)知識(shí),微生物（microorganism, microbe）是一些 肉眼看 不見(jiàn)的微小生物的總稱。 微生物（microorganism）包括細(xì)菌、支原體、螺旋 體、衣原體、立克次體、病毒及真菌霉菌、酵母菌和放 線菌）等。,微生物的特點(diǎn),種類多 分布廣 迄今為止，我們知道的微生物約有10萬(wàn)種，只占地球上 實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%。,微生物的特點(diǎn),各體小，表面積大 物體的表面積和體積之比稱為表面積， 大腸埃希菌 的表面積是人的30萬(wàn)倍。,微生物的特點(diǎn),吸收多 轉(zhuǎn)化快 如大腸埃希菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的數(shù)量，而人體則需要40年之久。,微生物的特點(diǎn),適應(yīng)強(qiáng) 易變異 多數(shù)細(xì)菌能耐0196的低溫； 硫細(xì)菌可在250300的高溫條件下正常生長(zhǎng)； 一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活； 產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十 年、幾百年。,微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu),微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類： 原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等 真核細(xì)胞型：真菌 非細(xì)胞型：病毒 噬菌體,細(xì)菌的繁殖,細(xì)菌（bacterium）屬于原核細(xì)胞型微生物，其特點(diǎn)是具有細(xì)胞壁、原始的核質(zhì)，以二分裂方式繁殖。 了解細(xì)菌的基本特性、細(xì)菌的鑒別，對(duì)新藥的研發(fā)和防止藥品污染，保證藥品質(zhì)量具有重要的意義。,細(xì)菌的形態(tài),- 細(xì)菌體積微小，是無(wú)色半透明的，用肉眼直接觀察難以看到，其結(jié)構(gòu)和形狀須經(jīng)過(guò)顯微鏡放大數(shù)百倍至上千倍才能 觀察。 - 一般以微米（m）作為測(cè)量單位。 - 在細(xì)菌學(xué)中，按其形態(tài)可分為球菌、桿菌、弧菌和螺桿菌。 經(jīng)革蘭染色法（Gram stain）可將細(xì)菌分成兩大類： 革蘭陽(yáng)性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）。,細(xì)菌的形態(tài),細(xì)菌的形態(tài),真菌（fungus；eumycetes） 是具有真核和細(xì)胞壁的生物。種類很多，已報(bào)道的種超過(guò)10萬(wàn)個(gè)。大多是由纖細(xì)管狀菌絲構(gòu)成的菌絲體。許多菌絲在一起統(tǒng)稱菌絲體。菌絲體在基質(zhì)上生長(zhǎng)的形態(tài)稱為菌落。,細(xì)菌的形態(tài),真菌的形態(tài)具有多樣性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光學(xué)顯微鏡放大數(shù)倍乃至千倍方可觀察到。其形態(tài)分單細(xì)胞、多細(xì)胞，單細(xì)胞呈圓形或卵圓形，如酵母菌（yeast）。多細(xì)胞由菌絲和孢子組成，并交織成團(tuán)。,藥品污染常見(jiàn)的真菌,毛霉屬、根霉屬、曲霉屬、青霉屬、木霉屬 - 毛霉屬（Mucor Micheli ex Fries） 毛霉屬在自然界分布很廣，常用于發(fā)酵工業(yè)。并引起水分高的糧食及食品的霉?fàn)€變質(zhì)。,毛霉屬的分枝類型： 1.單生（不分枝） 2. 總狀分枝 3.假軸狀分枝 毛霉的孢子囊： 1. 孢子 2. 膜 3. 囊軸 4. 孢子囊柄,根霉屬（RhizopusEhrenberg）,根霉屬?gòu)V泛應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)，在潮濕的糧食及食品上能迅速蔓延生長(zhǎng)，引起糧食及食品的腐爛。,根霉 A：1營(yíng)養(yǎng)菌絲 B：2. 匍匐菌絲 3. 假根 4. 孢囊柄 C ：孢囊放大圖 1. 囊壁 2. 囊軸 3. 囊托,曲霉屬（Aspergillus）,曲霉屬的菌絲無(wú)色、淡色或表面凝聚有色物質(zhì)，為有隔的多細(xì)胞。本屬的常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌有8個(gè)種，具有強(qiáng)烈的致癌性。 曲霉 1雙層小梗分生孢子頭 2. 單層小梗分生孢子頭 3. 分生孢子?；孔慵?xì)胞 4. 雙層小梗的細(xì)胞微結(jié)構(gòu),常見(jiàn)青霉分生孢子梗,青霉屬 菌絲無(wú)色或有色，為有隔的多細(xì)胞。分生孢子梗從菌絲垂直生出，無(wú)足細(xì)胞，頂端不膨大，無(wú)頂囊，產(chǎn)生一輪至數(shù)輪分叉，在最后一級(jí)分枝的小梗上，長(zhǎng)出成串的分生孢子，形似掃帚狀，稱為帚狀枝。本屬的常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌有9個(gè)種，其中展青霉可產(chǎn)生展青霉素，是一種神經(jīng)毒素，并具有致畸、致突變和致癌性；,霉菌菌落形態(tài),霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上的形態(tài),酵母菌顯微鏡下形態(tài),微生物檢查法,微生物限度檢查方法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、 輔料受微生物污染程度的方法。 檢查項(xiàng)目包括 細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。 檢查方法 多用平皿法、薄膜過(guò)濾法、涂抹法和 MPN 法， 國(guó)家藥典規(guī)定應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)證合格的方法。,檢查方法的驗(yàn)證,試驗(yàn)環(huán)境 無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度 10 000 級(jí)下的局部潔凈度100 級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全 過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污 染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。 檢驗(yàn)依據(jù) 單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。 -2010版藥典,隔離系統(tǒng)的應(yīng)用,應(yīng)用隔離系統(tǒng)重要的目的 - 是保護(hù)產(chǎn)品免受外源性污染，包括操作人員、操作環(huán)境及外包裝等的污染，保證無(wú)菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，實(shí)現(xiàn)一次檢出的要求。 - 是保護(hù)操作人員免受實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的有害物質(zhì)帶來(lái)的污染。 隔離系統(tǒng)應(yīng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度 須符合無(wú)菌檢查的要求。 日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。,- 為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，真實(shí)性，選擇正確的檢驗(yàn)方法 是至關(guān)重要的。因此試驗(yàn)前必須對(duì)選擇的方法進(jìn)行驗(yàn)證。 - 證明所采用的方法是適宜的，確認(rèn)所采用的方法適宜于被 檢供試品的微生物污染的檢驗(yàn)。,方法驗(yàn)證的必要性,檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素,供試品的組分 抑菌劑、增溶劑、乳化劑及抗氧化劑，這 些 組分在一定濃度下對(duì)微生 物起一定的抑制作用也可對(duì)污染菌造成損傷。 環(huán)境影響 不同類型的微生物及不同的存活狀態(tài)對(duì)環(huán)境的 抗性是不同的。 如培養(yǎng)基的質(zhì)量、檢驗(yàn)人員的操作誤差等。,方法驗(yàn)證,試驗(yàn)全方面驗(yàn)證 如試驗(yàn)環(huán)境，培養(yǎng)基，供試液的制備，滅菌方法等全部進(jìn) 行驗(yàn)證。 當(dāng)驗(yàn)證試驗(yàn)符合要求時(shí)，就可認(rèn)為在該試驗(yàn)條件下該供試 品對(duì)微生物無(wú)抑菌作用或抑菌作用可忽略不計(jì)，供試品檢 驗(yàn)結(jié)果可真實(shí)的體現(xiàn)。,驗(yàn)證方法,菌液制備 50100cfu/ml。 驗(yàn)證方法 試驗(yàn)組、菌液組、供試品對(duì)照組、釋劑對(duì)照組。 結(jié)果判斷 供試品組、對(duì)照組、稀釋劑對(duì)照組的菌回收率 均不低70% 。,方法驗(yàn)證,驗(yàn)證方法 按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的 方法及下列要求進(jìn)行。 對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。 驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算 各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。,方法驗(yàn)證,試驗(yàn)菌株 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、 白色念珠菌、 黑曲霉、枯草桿菌。 菌液制備 同計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查。,方法驗(yàn)證,試驗(yàn)組 - 平皿法 取最低稀釋級(jí)供試液1ml和50100cfu試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基(平行制備2個(gè)平皿)，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。 - 薄膜過(guò)濾法 取最低稀釋級(jí)供試液，過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50100cfu試驗(yàn)菌，過(guò)濾，按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。,方法驗(yàn)證,-菌液組 所加的試驗(yàn)菌數(shù)。 - 供試品對(duì)照組 測(cè)定供試品本底菌數(shù)。 - 稀釋劑對(duì)照組 用相應(yīng)的