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細胞免疫熒光技術(shù),實驗?zāi)康?掌握免疫熒光技術(shù)的基本原理 熟悉細胞免疫熒光技術(shù)的方法 了解在免疫細胞化學(xué)技術(shù)中如何獲得好的實驗結(jié)果,實驗原理,原位檢測 抗原抗體特異反應(yīng) 間接法,間接熒光抗體染色法示意圖,Hela細胞,Vinculin,實驗用品,試劑： 固定液：4%PFA 細胞通透：0.2%TritonX 封閉試劑：10%正常山羊血清 一抗：小鼠源抗Vinculin單克隆抗體 二抗:Alexa Fluor555標記的山羊抗小鼠IgG DAPI（4,6-二脒基-2-苯基吲哚） PBS洗滌緩沖液：PH7.4,材料： Hela細胞 細胞培養(yǎng)皿 儀器： 熒光顯微鏡,實驗步驟,一，細胞制備和細胞固定,實驗步驟,二，細胞免疫熒光ICC染色,0.2% TritonX 處理5min,封閉 室溫30min,4過夜,371-2小時,375-10min,熒光顯微鏡觀察,實驗結(jié)果,三，觀察,human HeLa cells,實驗中應(yīng)注意的問題,細胞不要鋪的過密:60-70% 防止細胞污染 固定時間不要太長,一般10-30min TrionX處理時間不宜過長，膜蛋白可不必處理 選擇合適的封閉液 二抗孵育后,一定要洗干凈 必要時用恒溫搖床搖洗,1. 免疫熒光技術(shù) 2. 免疫酶技術(shù) 3. 免疫親和技術(shù) 4. 膠體金技術(shù),標記物 使抗體或抗原 抗體復(fù)合物在 各種顯微鏡下 可見的物質(zhì),免疫細胞化學(xué)技術(shù),免疫細胞化學(xué)技術(shù)注意事項,選擇合適的方法 材料要留好 選擇抗體 選擇標記酶 封閉液的選擇 設(shè)定對照實驗,思考題,檢測Hela細胞中蛋白A定位情況，思考應(yīng)選擇什么方法， 用什么儀器觀察？,疑難解答

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