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文檔簡介

普通電泳的原理 生物大分子 如蛋白質(zhì) 核酸 多糖等 大多都有陽離子和陰離子基團(tuán) 稱為兩性離子 常以顆粒分散在溶液中 它們的靜電荷取決于介質(zhì)的H 濃度或與其他大分子的相互作用 在電場中 帶電顆粒向陰極或陽極遷移 遷移的方向取決于它們帶電的符號 這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳 電泳的樣品支持物 生物實(shí)驗(yàn)大多為凝膠 普通電泳設(shè)備組成 電泳儀 電泳槽 普通電泳槽分三種 水平電泳垂直電泳轉(zhuǎn)移電泳 水平電泳 用瓊脂糖凝膠作支持物的電泳法 借助瓊脂糖凝膠的分子篩作用 核酸片段因其分子量或分子形狀不同 電泳移動速度有差異而分離 是基因操作中常用的重要方法 水平電泳槽圖片 垂直電泳 作用 用于分離蛋白質(zhì)和寡糖核苷酸 作用原理聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 具有分子篩效應(yīng) 它有兩種形式 非變性聚丙烯酰胺凝膠及SDS 聚丙烯酰胺凝膠 SDS PAGE 非變性聚丙烯酰胺凝膠 在電泳的過程中 蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài) 并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小 蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開 垂直電泳槽圖片 濕轉(zhuǎn)電泳 將混雜的蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后 轉(zhuǎn)移至固相膜上 再用標(biāo)記的抗體或二抗與之反應(yīng) 以顯示膜上特定的蛋白條帶 整個電泳過程完全浸在緩沖液中完成的稱為濕轉(zhuǎn)電泳 濕轉(zhuǎn)電泳槽圖片 半干轉(zhuǎn)電泳 將混雜的蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后 轉(zhuǎn)移至固相膜上 再用標(biāo)記的抗體或二抗與之反應(yīng) 以顯示膜上特定的蛋白條帶 膜和濾紙均為浸濕而非整個電泳過程完全浸在緩沖液中完成的稱為半干轉(zhuǎn)電泳 半干轉(zhuǎn)電泳槽圖片 普通電泳儀大體分三種基礎(chǔ)電泳儀高電流電泳儀高電壓電泳儀 基礎(chǔ)電泳儀 參數(shù) 一般電壓為幾百伏特 電流為幾百毫安 應(yīng)用 主要用于水平電泳 垂直電泳 濕轉(zhuǎn)電泳 高電流電泳儀 參數(shù) 一般電壓為幾百伏特 電流為幾千毫安 應(yīng)用 主要應(yīng)用于水平電泳 垂直電泳 濕轉(zhuǎn)電泳 半干轉(zhuǎn)電泳 高電壓電泳儀 參數(shù) 一般電壓為幾千伏特 電流為幾百毫安 應(yīng)用 主要應(yīng)

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