臨床免疫學補體檢測及應用.doc

第十九章補體檢測及應用本章考點1.概述2.補體的活化途徑3.有關補體測定的試驗4.補體測定的應用補體是存在于人和脊椎動物正常新鮮血清及組織液中的一組具有酶樣活性的球蛋白。補體系統(tǒng)是補體加上其調節(jié)因子和相關膜蛋白共同組成一個反應系統(tǒng)，稱為補體系統(tǒng)。補體系統(tǒng)參與機體的抗感染及免疫調節(jié)，也可介導病理性反應，是體內重要的免疫系統(tǒng)和放大系統(tǒng)。第一節(jié)補體系統(tǒng)的組成和性質 一、命名根據(jù)l968年WH0命名委員會對補體系統(tǒng)進行了統(tǒng)一命名。參與補體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的先后順序分別稱Cl、C2、C9。Cl由Clq、Clr、Cls三種亞單位組成；補體系統(tǒng)旁路激活途徑及調節(jié)因子中另一些組分以英文大寫字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子等；補體調節(jié)成分多以其功能進行命名，如C1抑制物、C4結合蛋白、衰變加速因子等；補體活化后的裂解片段以該成分的符號后面加小寫英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或復合物在其符號上劃一橫線表示，如、，滅活的補體片段在其符號前面加英文字母i表示，如iC3b等；對補體受體以其結合對象命名，如CLrR、C5Ar、對C3片段受體則用CRl、CR2CR4表示。二、分類構成補體系統(tǒng)包括30余種活性成分，按其性質和功能可以分為三大類：1.在體液中參與補體活化級聯(lián)反應的各種固有成分；2.以可溶性形式或膜結合形式存在的各種補體調節(jié)蛋白；3.結合補體片段或調節(jié)補體生物效應的各種受體。三、理化性質補體的大多數(shù)組分都是糖蛋白，且多屬于球蛋白，約占血清球蛋白總量的l0%；Clq，C8等為球蛋白；Cls，C9為球蛋白。正常血清中各組分的含量相差較大，C3含量最多，C2最低。各種屬動物間血中補體含量也不相同，豚鼠血清中含有豐富的補體，故實驗室多采用豚鼠血作為補體來源。補體性質不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響，如加熱、機械振蕩、酸堿、酒精等均可使其失活；在010下活性只保持34天，冷凍干燥可較長時間保持其活性；加熱5630min可使血清中絕大部分補體組分喪失活性，稱為滅活或滅能。第二節(jié)補體系統(tǒng)的活化與調控 一、補體系統(tǒng)的活化補體系統(tǒng)的各組分在體液中通常以非活性狀態(tài)、類似酶原的形式存在，當受到一定因素激活，才表現(xiàn)出生物活性。補體的激活途徑主要有兩種，即經(jīng)典途徑和替代途徑，此外尚有MBL（甘露糖結合凝集素）途徑。經(jīng)典途徑和替代途徑兩種途徑的啟動過程不一致，但經(jīng)典途徑的激活可以導致替代途徑的活化，反之則不行。補體的其他激活途徑即甘露聚糖結合凝集素（MBL）途徑，簡稱MBL途徑。此途徑開始于急性期蛋白與病原體的結合，而不是抗原復合物形成。1.經(jīng)典途徑：經(jīng)典途徑是以結合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑，補體C1C9共11種成分全部參與的激活途徑。除了抗原抗體復合物外，還有許多因子可激活此途徑，如非特異性凝集的Ig、細菌脂多糖、一些RNA腫瘤病毒、雙鏈DNA、胰蛋白酶、纖溶酶、尿酸鹽結晶、C-反應蛋白等。經(jīng)典活化途徑可人為地分成識別、活化和膜攻擊3個階段。2.替代途徑：替代途徑又稱旁路途徑。它與經(jīng)典途徑的不同之處主要是越過C1、C4和C2，直接激活補體C3，然后完成C5C9的激活過程；參與此途徑的血清成分尚有B、D、P、H、I等因子。替代途徑的激活物主要是細胞壁成分，如內毒素、某些蛋白水解酶、IgG4、IgA聚合物等。替代途徑是通過研究C4缺陷而仍保持補體系統(tǒng)活化的患者而發(fā)現(xiàn)的。二、補體活化的調控補體系統(tǒng)被激活后，進行系統(tǒng)有序的級聯(lián)反應，從而發(fā)揮廣泛的生物學效應，參與機體的防御功能。如果補體系統(tǒng)活化失控，可形成過多的膜攻擊復合物而產(chǎn)生自身損傷，或過多的炎癥介質造成病理效應。正常機體的補體活化處于嚴密的調控之下，從而維持機體的自身穩(wěn)定。1.補體的自身調控：補體激活過程中生成的某些中間產(chǎn)物非常不穩(wěn)定，成為補體級聯(lián)反應的重要自限因素。此外只有細胞表面形成的抗原抗體復合物才能觸發(fā)經(jīng)典途徑，而旁路途徑的C3轉化酶則僅在特定的物質表面才具有穩(wěn)定性，故正常機體內一般不會發(fā)生過強的自發(fā)性補體激活反應，補體系統(tǒng)自身調控的作用在于維持機體自身的穩(wěn)定性；2.調節(jié)因子的作用：體內存在多種可溶性膜結合的補體調節(jié)因子，它們以特定方式與不同的補體成分相互作用，使補體的激活與抑制處于精細的平衡狀態(tài)，調節(jié)蛋白的缺失有時是造成某些疾病發(fā)生的原因。目前發(fā)現(xiàn)的補體調節(jié)蛋白有十余種，按其作用特點可分為三類：l）防止或限制補體在液相中自發(fā)激活的抑制劑；2）抑制或增強補體對底物正常作用的調節(jié)劑；3）保護機體組織、細胞免遭補體破壞作用的抑制劑。第三節(jié)補體系統(tǒng)的生物活性 補體是機體重要的免疫效應系統(tǒng)之一。補體系統(tǒng)活化可以溶解細胞，在活化過程中產(chǎn)生的中間復合物及某些片段也具有多種多樣的生物活性，所以補體系統(tǒng)對機體的作用是多方面的，既可參與機體的防御效應和自身穩(wěn)定，亦可引起免疫損傷。1.溶細胞作用：不論何種途徑活化，補體系統(tǒng)都能對其粘附的細胞產(chǎn)生溶解作用。補體的溶細胞反應不僅可以抗菌，也可抵抗其他微生物及寄生蟲的感染。另一方面，補體也常常引起病理性反應，如異型輸血時的溶血反應、自身免疫病時細胞損傷等；2.免疫復合物的清除：補體在活化過程中生成的中間產(chǎn)物，對抗原抗體復合物有很強的親和力，可共價結合到免疫復合物上，然后通過補體的其他效應對免疫復合物產(chǎn)生抑制或清除作用。常通過以下幾種方式對免疫復合物的清除：1）吞噬調理作用；2）免疫粘附作用；3）免疫復合物抑制作用；3.炎癥介質作用：補體是機體重要的炎癥介質之一，可通過過敏毒素作用、趨化作用、激肽樣作用等多種途徑引起炎癥；4.中和與溶解病毒作用：其機理可能是阻止病毒對易感細胞的吸附和穿入，并可能干擾病毒在細胞中的增殖。第四節(jié)補體的合成與代謝 1.補體編碼基因：補體成分十分復雜，各編碼基因分散在不同的染色體上，補體成分的許多蛋白質分子具有同分異構現(xiàn)象，顯示其遺傳多態(tài)性。幾乎所有補體蛋白均為單位點常染色體等顯性遺傳。編碼人C4、C2、B因子的基因在第6對染色體短臂上，與MHC的基因相鄰，命名為類組織相容性基因；與C3、C4反應的許多調節(jié)蛋白的基因被組合在一起，在第一對染色體上形成一個超基因家族，此家族編碼的蛋白有：H因子、C4bp、DRF、CRI、CR2等。2.補體合成的器官及細胞：盡管一些器官和組織產(chǎn)生不同補體成分，但產(chǎn)生補體的主要器官是肝臟，主要細胞是巨噬細胞。3.補體的代謝平衡：補體成分在血液中可被蛋白酶直接降解，病理情況下補體的代謝速率反映了補體的激活程度，補體活化后的酶解片段迅速失活，并很快從循環(huán)中消除，沉著于細胞表面及組織中被消耗或分解。如C3在C3轉化酶作用下，生成C3a和C3b，C3降解為iC3b，再降解為C3c、C3dg。最后降解為C3d和C3g。第五節(jié)補體總活性測定 （一）實驗原理補體最主要的活性是溶細胞作用。特異性抗體與紅細胞結合后可激活補體，導致紅細胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分滲入，引起紅細胞腫脹而發(fā)生溶血。補體溶血程度與補體的活性相關，但非直線關系。在一個適當?shù)?、穩(wěn)定的反應系統(tǒng)中，溶血反應對補體的劑量依賴呈一特殊的S形曲線。如以溶血百分率為縱坐標，相應血清量為橫坐標，可見在輕微溶血和接近完全溶血處，對補體量的變化不敏感。S形曲線在30%70%之間最陡，幾乎呈直線，補體量的少許變動，也會造成溶血程度的較大改變，即曲線此階段對補體量的變化非常敏感。因此，實驗常以50%溶血作為終點指標，它比l00%溶血更為敏感，這一方法稱為補體50%溶血實驗即CH50。（二）檢測試劑綿羊紅細胞；溶血素；稀釋緩沖液。（三）方法評價CH50試驗是測定經(jīng)典途徑總補體溶血活性，所反映的是補體9種成分的綜合水平。方法簡便、快速，但敏感性較低。補體的溶血活性除與試驗中反應體積成反比外，還與反應所用緩沖液的pH、離子強度、鈣鎂濃度、綿羊紅細胞數(shù)量和反應溫度有一定關系。緩沖液pH和離子強度增高，補體活性下降，雖可穩(wěn)定溶血系統(tǒng)，但過量則反而抑制溶血反應，故實驗時對反應的各個環(huán)節(jié)應嚴加控制，統(tǒng)一步驟。（四）臨床意義CH50法檢測是補體經(jīng)典途徑的溶血活性，所反映的主要是補體9種成分的綜合水平。如果測定值過低或者完全無活性，首先考慮補體缺陷，可分別檢測C4、C2、C3和C5等成分的含量；嚴重肝病時血漿蛋白合成能力受損。營養(yǎng)不良時蛋白合成原料不足，也可以不同程度地引起血清補體水平下降。在患系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎和強直性脊柱炎等自身免疫病時，血清補體水平隨病情發(fā)生變化。疾病活動期補體活化過度，血清補體水平下降；病情穩(wěn)定后補體水平又反應性增高。因此補體檢測?？勺鳛樽陨砻庖卟≡\斷或是否有疾病活動的參考指標。細菌感染特別是革蘭陰性細菌感染時，常因補體旁路途徑的活化過度引起血清補體水平降低。心肌梗死、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊娠等情況下血清補體水平常升高。 第六節(jié)補體結合試驗補體結合試驗是用免疫溶血機制做指示系統(tǒng)，來檢測另一反應系統(tǒng)抗原或抗體的試驗。早在1906年Wasseramann就將其應用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應。1.補體結合試驗原理、類型：補體結合試驗中有5種成分參與反應，分屬3個系統(tǒng)：1）反應系統(tǒng)；2）補體系統(tǒng)；3）指示系統(tǒng)。其中反應系統(tǒng)（抗原與抗體）與指示系統(tǒng)（綿羊紅細胞與溶血素）爭奪補體系統(tǒng)。如先加入反應系統(tǒng)和補體，給其以優(yōu)先結合補體的機會，如果反應系統(tǒng)中存在待測的抗體（或抗原），則抗原、抗體發(fā)生反應后可結合補體，再加入指示系統(tǒng)（SRBL與相應溶血素），由于反應中無游離的補體而不出現(xiàn)溶血，為補體結合試驗陽性。如待測系統(tǒng)中不存在待檢的抗體或（抗原），則在液體中仍有游離的補體存在，當加入指示劑時會出現(xiàn)溶血，為補體結合試驗陰性。因此補體結合試驗可用已知抗原來檢測相應抗體，或用已知抗體來檢測相應抗原。2.補體結合試驗的臨床應用：補體結合試驗可應用在以下幾個方面：1）傳染病診斷，病原性抗原及相應抗體的檢測；2）其他抗原的檢測，如腫瘤相關抗原、血液中的蛋白質鑒定，HLA分型等；3）自身抗體的檢測等。補體結合試驗的優(yōu)點為靈敏度高、特異性強、應用面廣、易于普及。缺點為試驗參與反應的成分多，影響因素復雜，操作步驟繁瑣并且要求十分嚴格，容易出現(xiàn)錯誤。第七節(jié)單個補體成分測定在30多種補體成分中，主要檢測C3、C4、Clq、B因子和Cl酯鎂抑制物。測定方法分為免疫溶血法及免疫化學法。1.免疫溶血法溶血法主要根據(jù)抗原與其特異性抗體（IgG、IgM型）結合后可激活補體的經(jīng)典途徑，導致細胞溶解。該方法中抗原為SRBC，抗體為兔或馬抗SRBC的抗體，即溶血素。將兩者組合作為指示系統(tǒng)參與反應。試驗中有兩組補體參與，一組是作為實驗反應系統(tǒng)的補體，此類試劑可選用先天缺乏某單一補體成分的動物或人血清，如某些人可天然缺乏C2、豚鼠缺C5、家兔缺C6；也可利用化學試劑人為滅活正常血清中某種成分制備缺乏該成分的補體試劑，加入致敏SRBC（檢測經(jīng)典途徑補體成分用）或總紅細胞RRBC（檢測替代途徑補體成分用）指示系統(tǒng)后，此時由于補體級聯(lián)反應體系中缺乏某種補體成分，不能使補體連續(xù)激活，不發(fā)生溶血。另一組為待測血清中的補體，當加入待測血清，使原來缺乏的成分得到補充，補體成分齊全，級聯(lián)反應恢復，產(chǎn)生溶血。溶血程度與待測補體成分活性有關，仍以50%溶血為終點。免疫溶血法無須特異儀器與設備，快速，但敏感性較低，影響因素多。該法不是檢測某補體成分的具體含量，而是檢測其活性，在某些需了解該成分活性情況下，本試驗適用。2.免疫化學法免疫化學法分為單向免疫擴散法、火箭免疫電泳、透射比濁法和散射比濁法。前兩種方法已逐漸趨于淘汰，后兩種方法通過儀器對補體的C3、C4、B因子等單個成分進行測定。待測血清標本的C3、C4成分適當稀釋后與檢測用相應抗體結合形成復合物，反應介質中的PEG可使該復合物沉淀，儀器對復合物產(chǎn)生的光散射或透射信號進行自動檢測，并換算成所測成分的濃度單位。自動免疫化學法檢測補體成分方法簡單、特異、重復性好，可反映所測補體成分的絕對值，并能進行標準化流程管理和質控，是當前主要檢測方法。第八節(jié)補體測定的應用檢測補體的單個成分及補體的活性對于機體免疫系統(tǒng)的功能評價，疾病的診斷與治療，流行病學調查等均有重要作用。同時根據(jù)補體具有的溶細胞活性和聯(lián)級反應的性質，可利用補體作為一種試劑，參與很多實驗反應，補體檢測技術可應用于下述情況。1.診斷病原體感染，如華氏反應（已淘汰）診斷梅毒螺旋體感染。2.檢測補體的功能，如CH50和AH50試驗。3.補體單個成分及其裂解產(chǎn)物的測定，如Clq、C3、CA、C3a和補體受體的測定等。4.相關疾病時補體的檢測（1）免疫性疾?。喝缱陨砻庖卟rCl、C2、C3、C4和HF等缺陷；變態(tài)反應如型超敏反應為免疫復合物型，其中C3a、C5a等過敏毒素， 等趨化因子的作用導致組織損傷。（2）與補體有關的遺傳性疾?。喝鏑3缺陷導致嚴重感染；Cl抑制物缺陷與遺傳性血管性水腫；細胞表面CRl缺陷與CIC清除障礙（SLE）；If、Hf缺陷與腎小球腎炎；DAF缺陷與陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿等。（3）補體含量顯著降低的疾?。喝?）消耗增多見于SLE、自身免疫性溶血性貧血、類風濕性關節(jié)炎、移植排斥反應；2）細菌感染，特別是革蘭陰性菌感染時；3）大量喪失見于大面積燒傷、大出血和腎病綜合征等；4）合成不足則見于急慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌患者和營養(yǎng)不良等。（4）高補體血癥：少見。主要見于感染恢復期和某些惡性腫瘤患者，常為C4、C2、C3和C9的升高。5.補體參與的試驗：即利用補體作為試劑而設計的實驗，例如HLA分型的補體依賴性細胞毒試驗（CDCC）。這類試驗還有脂質體免疫試驗、免疫粘連血凝試驗、溶血空斑技術、膠固素結合試驗、Clq結合試驗和補體結合試驗等。6.流行病學調查：如補體結合試驗用于流行病學調查；CDCC用于人群HLA分布頻率的調查等。7.補體應用于臨床治療后的檢測。習題86 關于補體旁路激活途徑的敘述，錯誤的是A.激活物是細菌壁成分B.從C3激活開始C.發(fā)揮效應比經(jīng)典途徑晚D.有激活效應的擴大E.在感染后期發(fā)揮作用答疑編號500734190201正確答案E答案解析在感染前期就發(fā)揮作用。習題87 實驗室滅活補體最常用的方法是A.56，30minB.65，30minC.95，10minD.紫外線照射E.添加強酸或強堿答疑編號500734190202正確答案A習題88 關于補體的敘述，正確的是A.對熱穩(wěn)定B.含量與抗原刺激無關C.由多種細胞產(chǎn)生D.是存在正常血清的一組球蛋白E.兩條激活途徑有相同的末端效應答疑編號500734190203正確答案B、C、D、E習題89 具有趨化作用的補體裂解物有A.C2aB.C3aC.C4aD.C5aE.C3b答疑編號500734190204正確答案B、D、E習題90 補體的生物學作用包括A.調理作用B.免疫粘附作用C.免疫調節(jié)作用D.炎癥介質作用E.溶細胞作用答疑編號500734190205正確答案A、B、C、D、E習題91 補體結合試驗前的抗原抗體方陣滴定的目的是A.選擇抗原抗體最佳比例B.使抗原抗體復合物形成最少C.使抗原抗體復合物結合補體的量最少D.使抗原抗體復合物結合補體的量最多E.避免抗原抗體復合物太多答疑編號500734190206正確答案A答案解析此題超出教材內容。補體結合試驗分試劑滴定和正式試驗兩部分。前者又往往直接影響試驗的成敗。補體結合試驗中，抗原與抗體按一定比例結合，因而，應通過預試驗選擇兩者適當比例。目前主要采取方陣法進行滴定，以選擇抗原抗體最佳比例。習題92 補體結合試驗中，補體最主要的特性是A.與抗原結合B.與抗體結合C.與抗原抗體復合物結合D.溶解紅細胞E.溶解抗原抗體復合物結合答疑編號500734190207正確答案D第二十章自身抗體檢測及應用本章考點1.概念2.自身抗體的特性、概念3.常見自身抗體的檢測4.自身抗體檢測的臨床應用自身免疫：當機體免疫系統(tǒng)受某種因素作用使自身免疫耐受削弱或破壞時，免疫系統(tǒng)會對自身成分包括：正常或變性的組織、器官、細胞、蛋白質或酶類等自身抗原產(chǎn)生免疫應答反應，出現(xiàn)自身抗體或致敏淋巴細胞的這種現(xiàn)象稱為自身免疫。自身免疫性疾病：當某種原因使自身免疫應答過分強烈時，也會導致相應的自身組織、器官損傷或功能障礙，這種病理狀態(tài)稱為自身免疫性疾病。自身抗體；血循環(huán)中針對自身組織、器官、細胞及細胞內成分的抗體稱為自身抗體。正常人血清中可有多種微量的自身抗體或致敏淋巴細胞，它能清除體內衰老細胞而起到免疫穩(wěn)定的效應。第一節(jié)自身抗體的特性自身抗體是自身免疫性疾病的重要標志。每種自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗體譜?；颊哐褐写嬖诟咝r自身抗體是自身免疫性疾病的特點之一，也是臨床確診自身免疫性疾病的重要依據(jù)。產(chǎn)生自身抗體的抗原包括以下幾種：化學修飾的組織抗原；與自身組織成分存在交叉反應的外來抗原；隱蔽抗原；自身細胞HLA-DR抗原的表達以及低分化的組織抗原等，在一定條件下，均可刺激機體產(chǎn)生自身抗體。自身抗體與疾病的關系：某些自身抗體對某種疾病的診斷具有高度特異性，已經(jīng)成為該病的血清標記性抗體或特異性抗體；某些自身抗體與疾病的活動性有相關性；少數(shù)自身抗體參與了免疫病理性損傷。測定自身抗體的意義：自身免疫性疾病的診斷；疾病活動性的判斷；療效的觀察；指導臨床用藥等。第二節(jié)常見自身抗體的檢測自身抗體種類很多，這里只是簡單介紹幾種常見的自身抗體的檢測。一、類風濕因子（一）概念類風濕因子（rheumatoid factor，RF）是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體?？膳c人或動物的變性IgG結合，而不與正常IgG發(fā)生凝集，最多見于類風濕性關節(jié)炎患者。Rose等1984年在RA（rheumatoid arthritis）患者血清中發(fā)現(xiàn)RF。RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型為主要類型。（二）檢測方法1.膠乳凝集試驗：以IgG吸附于聚苯乙烯膠乳顆粒上，如血清中含有RF，可與乳膠顆粒出現(xiàn)凝集反應。該法只能定性或半定量，靈敏度及特異性不高，只能檢測IgM型RF。2.速率散射比濁法：定量檢測、準確、快速，準確性和敏感性高于膠乳凝集實驗。也只能檢測IgM型RF。3.ELISA法：可檢出不同Ig類型的RF，在酶標記抗體時，分別標記IgG、IgA或IgM。（三）臨床應用RF主要見于類風濕，在類風濕性關節(jié)炎患者中的檢出率很高，RF陽性支持早期RA的傾向性診斷，對年輕女性應進行RA和風濕熱的鑒別；而對非活動期RA的診斷，需參考病史。但RF也像ANA一樣，并不是RA獨有的特異性抗體。在SLE患者約有50%RF陽性，在其他結締組織病如SS、硬皮病、慢性活動性肝炎以及老年人中均可有不同程度的陽性率。部分正常人也可出現(xiàn)。但RF滴度或含量一般較低（80IUml伴嚴重關節(jié)功能障礙者，提示預后不良。IgG型RF：與患者滑膜炎、血管炎和關節(jié)的癥狀密切相關。正常人以及非RA患者中很難檢出。IgA型RF：10%RA可檢出，為RA臨床活動的指標，與骨質破壞以及關節(jié)炎癥狀的嚴重程度顯著相關。IgE型RF：在關節(jié)液、胸水中高于血清水平。二、抗核抗體抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）是以自身真核細胞成分作為靶抗原的一組自身抗體的總稱，泛指各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。迄今已發(fā)現(xiàn)20余種。性質主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE，可與不同來源的細胞核起反應，無器官特異性和種屬特異性。ANA主要存在于血清中，也可存在于胸水、關節(jié)滑膜液以及尿液等體液中。ANA可見于多種疾病，主要存在于自身免疫性疾病患者血清中，如SLE、SS、MCTD、類風濕性關節(jié)炎等。也可見于慢性肝病、病毒感染以及正常老年人、妊娠婦女等。ANA陰性不能排除自身免疫性疾病的診斷；陽性也不一定是自身免疫性疾病。由于細胞核成分的復雜性，不同成分的抗原性也不同；因此就會有多種不同類型的ANA。ANA在不同的疾病中呈現(xiàn)不同的組合，不同的疾病有自己的抗核抗體譜。有些ANA只是針對某一特定成分，只在某一疾病中出現(xiàn)，成為該病的血清標志性抗體。ANA是一個重要的篩選試驗。分類：按理化特性和抗原分布部位分為四大類。包括抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體。命名：1.根據(jù)抗原化學名稱命名：例如抗dsDNA、抗RNP。2.以第一位檢出患者命名：例如抗Sm、抗Ro、抗La抗體。3.以相關疾病命名：例如抗SSA、抗SSB抗體。（一）檢測方法由于ANA的復雜性及多樣性，故測定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術等。常用間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）作為總的ANA篩選試驗。鼠肝常用于檢測抗核抗體，但近十年來多被HEp-2細胞所代替，這是因為HEp-2細胞具有以下特點：人源性；細胞核大；分裂期細胞多；可大批量培養(yǎng)。當然，單個細胞不可能替代組織切片，所以鼠組織切片仍繼續(xù)用于自身抗體的檢測。放射免疫法：常用于檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。Farr法的原理為用同位素標記DNA，被標記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結合，經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結合活性，一般結合率大于20%為陽性。過濾法是在分離結合物時用纖維素酯薄膜濾器（孔徑為0.45m）進行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結合的復合物被阻留在濾膜上。ELISA法：臨床上主要是應用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重復性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。目前已有試劑盒供應。免疫印跡（immunoblotting）法：先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然后將這些帶轉印到硝酸纖維素膜上，最后用酶標抗體或放射性同位素標記抗體進行檢測和分析。由于該試驗不需純化的單個抗原，可在同一固相上作多項分析檢測，靈敏度高，特異性強。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。另外，還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結合試驗等。這些試驗要求的實驗條件比較低，但敏感性也比較低。均質型斑點型核仁型核膜型（二）常見ANA熒光圖形及臨床意義1.均質型：多是由抗DNP抗體所引起。也可由核小體抗體和抗雙鏈DNA抗體引起。主要見于SLE，藥物性狼瘡。2.斑點型：是由抗ENA抗體所引起。主要見于SLE、MCTD、PSS、SS等。高滴度的斑點型常見于MCTD。3.周邊型（又稱核膜型）：主要由抗dsDNA的抗體所引起。主要見于SLE。特別是活動期患者。4.核仁型：主要見于硬皮病。相關抗體是抗核仁特異的低分子量RNA等。5.著絲點型：主要見于局限性硬皮病及CREST綜合征。主要的靶抗原是著絲點B抗原。（三）抗雙鏈DNA抗體的檢測方法檢測抗DNA抗體的方法有多種，如ELISA、IIF、金標法、免疫印記法、放免法等。其中最特異敏感的是應用錐蟲或血鞭毛蟲（如綠蠅短膜蟲）作基質測定抗dsDNA抗體。因為這些血寄生蟲的動基體內含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾；在陽性結果時，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優(yōu)點。另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來源方便，值得推廣?？筪sDNA抗體是SLE的特征性標記抗體，是SLE活動期的重要指標?？贵w滴度的動態(tài)檢測對療效的監(jiān)測提供了有價值的實驗室手段。抗dsDNA抗體對診斷SLE特異性較高；可達95%以上，但敏感性較低，僅為30%50%，因此，抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷?？筪sDNA抗體在SLE的發(fā)病機制中起到重要作用。如狼瘡腎炎；血管炎；皮膚的蝶形紅斑等均與該抗體有關。三、抗ENA抗體譜（一）概述ENA（extractable nuclear antigens）是可提取性核抗原的總稱。ENA是細胞內許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。ENA主要包括Sm、RNP、SSA、SSB、Jo-1、Scb-70等抗原。不同的自身免疫病可以產(chǎn)生不同的抗ENA抗體。ENA抗體的檢測對自身免疫性疾病的診斷和鑒別診斷具有重要意義。（二）檢測方法檢測方法有多種，如免疫印跡法（immunoblotting，IBT）、ELISA、對流免疫電泳、雙擴散、金標法等。這里主要介紹免疫印跡技術。免疫印跡技術屬于膜載體酶免疫技術，其固相載體為吸附有抗原的硝酸纖維膜。其基本原理為從小?；蛲眯叵偬崛NA，經(jīng)過SDS-PAGE電泳分成區(qū)帶，然后轉印至硝酸纖維膜上，將待檢血清（含抗ENA抗體）加在硝酸纖維膜上，抗ENA抗體與ENA抗原結合，形成Ag-Ab復合物，加入酶標抗人IgG，形成Ag-Ab-酶標Ab復合物，然后加入底物顯色。與標準條帶對比判讀，可以確定不同的抗ENA抗體。免疫印跡技術不需純化抗原，靈敏度高，特異性強，操作簡便，是廣泛采用的檢測抗ENA抗體的技術。圖1 ENA自身抗體譜標準對照帶（三）抗ENA抗體的臨床意義1.抗Sm抗體：是SLE的血清標志抗體，陽性率30%40%。陰性不能排除SLE的診斷。抗Sm抗體水平與SLE活動性沒有相關性，也不與臨床表現(xiàn)相關，治療后的SLE患者也可呈現(xiàn)抗Sm抗體陽性?？筍m抗體的檢測對早期或不典型的SLE以及治療后的SLE的回顧性診斷具有幫助。2.抗核RNP抗體：高滴度的抗核RNP（nRNP）抗體是MCTD診斷的重要依據(jù)。因其抗原為含有U1RNA的核蛋白復合物，故稱U1RNP。MCTD陽性率可高達95%。也可見于其他自身免疫性疾病。因為Sm與RNP為同一分子復合物（RNA-蛋白質顆粒）中的不同抗原位點，因此兩種抗原具有相關性，常伴隨出現(xiàn)，單一的抗Sm抗體陽性者較少見。3.抗SSARo抗SSBLa：是干燥綜合征（SS）最常見的自身抗體，抗SSB特異性較SSA高。兩者同時檢測可提高SS的診斷率，抗SSA抗體也可見于SLE和其他自身免疫病，亞急性紅斑狼瘡患者、補體缺陷的SLE患者、新生兒狼瘡患者可以出現(xiàn)抗SSA抗體。IgG類抗SSA抗體通過胎盤進入胎兒后，可引起新生兒狼瘡綜合征，出現(xiàn)典型的SLE皮損?？筍SA抗體與胎兒的心臟傳導系統(tǒng)結合，可以造成先天性心臟傳導阻滯。4.抗Jo-1抗體：最常見于多發(fā)性肌炎（polymyositis，PM）。在其他AID一般為陰性。PM與硬皮病重疊者陽性率較高。5.抗Scl-70抗體：幾乎僅見于進行性系統(tǒng)性硬化?。╬rogressive systemic sclerosis，PSS），陽性率40%60%，其他AID少見，是PSS的標志性抗體。正常人為陰性。四、抗中性粒細胞胞漿抗體（一）概念抗中性粒細胞胞漿抗體（antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）是一組以人中性粒細胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關的自身抗體，是系統(tǒng)性血管炎的血清標志抗體，對血管炎的診斷、分類及預后具有重要意義。ANCA主要有兩型：胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）。cANCA針對的靶抗原是蛋白酶3（PR3），pANCA針對的靶抗原主要是髓過氧化物酶（MPO），其他還有乳鐵蛋白等。PR3和抗MP0抗體在參與小血管炎的發(fā)病中起重要作用。（二）ANCA的檢測方法ANCA的檢測一般應用IIF和ELISA。IIF檢測采用酒精或甲醇固定的中性粒細胞涂片作為抗原。在熒光顯微鏡下，胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）分別顯示特定的熒光染色模型。ELISA法采用純化的PR3和MP0包被固相反應板，分別檢測兩種抗體。（三）ANCA的臨床應用ANCA是原發(fā)性小血管炎的特異性血清標志物。cANCA產(chǎn)生彌漫性細胞漿染色，是針對PR3的抗體，常見于Wegener肉芽腫?。╓G），特別是腎和肺受累的病人。pANCA產(chǎn)生核周染色，是針對MP0的抗體，主要見于系統(tǒng)性血管炎病人。ANCA檢測是原發(fā)性小血管炎患者的診斷、療效觀察、判斷病情活動和復發(fā)的一項重要指標。WG患者活動期抗體滴度升高；緩解期下降。ANCA陽性還可見于繼發(fā)性血管炎、炎性潰瘍、RA、SLE、自身免疫性肝病等。五、抗心磷脂抗體（一）概念抗心磷脂抗體（anti-cardiolipin antibody，ACLA）是抗磷脂抗體之一，是最有代表性的一種。所針對的抗原是血漿中的磷脂結合蛋白。ACLA與自身免疫病和抗磷脂抗體綜合征有密切關系。ACLA可以分為IgG型、IgA型和IgM型。（二）檢測方法常用方法為ELISA。可以進行分型。（三）臨床應用ACL抗體陽性常見于SLE、RA、急性腦血管病、反復自然流產(chǎn)、血栓形成、抗磷脂抗體綜合征等。六、抗平滑肌抗體抗平滑肌抗體（anti-smooth muscle antibody，ASMA）是抗肌動球蛋白的自身抗體。一般采用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質，陽