PCR實驗室認(rèn)證體會.docVIP

一、申請臨床基因擴增實驗實驗收的目的臨床基因擴增實驗室近年來在我國發(fā)展很快，基因診斷技術(shù)在疾病的預(yù)防、診斷、治療方面起到了積極的作用。由于、基因擴增檢測技術(shù)的應(yīng)用對、實驗室的環(huán)境條件、儀器設(shè)備、試劑耗材、人員技術(shù)能力和質(zhì)量控制等方面要求嚴(yán)格，而一些實驗人員對此不甚了解，加之利益的驅(qū)使，曾經(jīng)在20世紀(jì)80年代，某些沿海省份的實驗室未按要求規(guī)范設(shè)置，出現(xiàn)氣溶膠污染，導(dǎo)致大規(guī)模假陽性結(jié)果報出，為臨床診斷造成了極大的困難。臨床基因擴增實驗室為了規(guī)范實驗室，保證基因擴增技術(shù)有效應(yīng)用，防止假陰性、假陽性結(jié)果的報出，為臨床出具合格而可靠的報告，申請臨床基因擴增實驗室的驗收是必然而且也是必要的。二、開展臨床基因擴增實驗的必備條件根據(jù)衛(wèi)生部2002年1月14日發(fā)布了衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法（以下簡稱辦法）及其附件臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)，及同年2月20日衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)布臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范，明確規(guī)定臨床基因擴增檢驗實驗室開展PCR技術(shù)必需具備的條件：（1）二級以上醫(yī)院實驗室，經(jīng)衛(wèi)生部臨床檢驗中心驗收合格；（2）從事基因擴增實驗操作的人員必須經(jīng)過培訓(xùn)并取得上崗證；（3）使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的允許進(jìn)入市場銷售的商品試劑盒；（4）開展衛(wèi)生部允許開展的項目。具備了以上幾條后，我們從事臨床基因檢測任務(wù)才是符合要求和規(guī)定并對臨床出具的報告有保障的。三、臨床基因擴增實驗室驗收準(zhǔn)備工作1.硬件準(zhǔn)備（1）實驗室整體布局：根據(jù)辦法要求，臨床基因擴增檢驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)，擴增產(chǎn)物分析區(qū)。由于我實驗室使用的是羅氏公司的Lightcycler實時熒光定量擴增儀，擴贈后產(chǎn)物不需開蓋處理直接檢測，所以擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)合為一室，此區(qū)為負(fù)壓。實驗室設(shè)計時按照辦法規(guī)定，三個區(qū)域相互獨立，并有各自的緩沖區(qū)域（見圖1）（2）各工作區(qū)域儀器設(shè)備各工作區(qū)域的儀器設(shè)備及物品，包括椅子、辦公用品、清潔用品等均不能拿出本區(qū)域，所有可移動物品均應(yīng)有本區(qū)域的標(biāo)示。各區(qū)域應(yīng)具備的設(shè)備配置為：屋頂紫外燈、近臺紫外燈、一次性手套、一次性鞋套、工作服、廢液缸、掃帚、拖把、廢紙褸簍、微量加樣器（覆蓋1-1000l），經(jīng)高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）、筆、紙等。各工作區(qū)域的特殊配置包括：（1）試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)：28oC冰箱、漩渦震蕩器、超凈工作臺。（2）標(biāo)本制備：28oC冰箱、-20oC冰箱、高速臺式冷凍離心機、漩渦震蕩器、金屬加熱模塊、超凈工作臺。（3）擴增及產(chǎn)物分析區(qū)：羅氏Lightcycler熒光定量核酸擴增儀、電腦、打印機。同時：進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向，并用明顯的箭頭表示，個區(qū)域用不同的顏色以示區(qū)別。即試劑貯存和設(shè)備區(qū)（藍(lán)色）標(biāo)本制備區(qū)（白色）擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（粉色）。2.軟件準(zhǔn)備：（1）臨床基因擴增實驗室文件編寫：本實驗診斷中心正在進(jìn)行ISO15189實驗室的認(rèn)可工作，故質(zhì)量手冊同中心統(tǒng)一，其它文件包括：程序文件、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）、相關(guān)圖表等由本實驗自己制定。制定的原則根據(jù)衛(wèi)生部下發(fā)的兩個文件，并結(jié)合本實際情況編寫適合本實驗實際情況編寫適合本實驗室的切實可行的文件，做到“寫你所做的，做你所寫的，記錄你已做的”。具體編寫內(nèi)容如下：程序性文件：PCR實驗室管理制度，PCR實驗室人員管理制度，儀器設(shè)備的管理程序，PCR實驗室儀器設(shè)備操作程序，PCR實驗室儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序，PCR檢驗實驗操作程序，實驗室消耗品購買、驗收及儲存程序，PCR試劑購買、驗收及儲存程序，PCR檢測標(biāo)本的管理程序，PCR實驗室記錄控制程序，PCR檢驗結(jié)果報告的控制程序，PCR實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制程序，抱怨處理程序，實驗室生物防護(hù)錯施，實驗室的清潔程序，實驗室廢棄物處理程序等。標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）：試劑準(zhǔn)備區(qū)工作制度，樣本準(zhǔn)備區(qū)工作制度，PCR擴增區(qū)工作制度，半自動型蒸汽壓力滅菌器標(biāo)準(zhǔn)操作程序，高速離心機的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，恒溫金屬浴使用規(guī)程，漩渦震蕩器標(biāo)準(zhǔn)操作程序，潔凈工作臺的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，可調(diào)式加樣器標(biāo)準(zhǔn)操作程序，恒溫金屬浴的校準(zhǔn)程序，標(biāo)本采集、運送、接收、保存的標(biāo)準(zhǔn)操作程序試劑準(zhǔn)備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，核酸提取的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，Lightcycler使用的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，統(tǒng)計學(xué)者質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，消耗品驗收質(zhì)檢的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。試劑質(zhì)檢的標(biāo)準(zhǔn)操作程序等。相關(guān)圖表：PCR實驗室工作人員一覽表，實驗室主要負(fù)責(zé)人簡歷表，PCR實驗室工作人員檔案，PCR實驗室人員培訓(xùn)計劃，儀器設(shè)備一覽表，儀器設(shè)備損壞、故障、修理記錄，儀器設(shè)備的報表申請表，儀器維護(hù)保養(yǎng)記錄，Lightcycler熒光定量擴增儀維護(hù)保養(yǎng)記錄，恒溫金屬校準(zhǔn)記錄，采購申請單，試劑領(lǐng)取驗收記錄，試劑質(zhì)檢記錄，消耗品質(zhì)檢記錄，消耗性材料領(lǐng)取驗收記錄，標(biāo)本接收等記表，不合格標(biāo)本記錄，報告單發(fā)放接收登記表，特殊報告要求登記表，抱怨情況登記表，抱怨處理登記表，PCR實驗室日常工作核查表，Lightcycler儀器使用記錄，試劑使用記錄，PCR實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制失控原因及糾正錯施記錄，樣本處理記錄，冰箱溫度記錄-試劑準(zhǔn)備區(qū)，冰箱溫度記錄-樣本準(zhǔn)備區(qū)，環(huán)境溫度記錄-試劑準(zhǔn)備區(qū)，環(huán)境溫濕度記錄-樣本準(zhǔn)備區(qū)，環(huán)境溫度記錄-PCR擴增區(qū)，PCR實驗室日常工作核查表，紫外燈使用登記表，溫度計校準(zhǔn)記錄，PCR實驗室平面圖等。（2）人員管理：文件要在臨床基因擴增實驗室工作的實驗人員必須經(jīng)過培訓(xùn)并取得上崗證，所以在申請實驗室驗收前，要至少一名人員參加衛(wèi)生部檢驗中心舉辦的臨床基因擴贈實驗室上崗培訓(xùn)班并取得上崗證。同時實驗室還應(yīng)該制定自己的年度培訓(xùn)計劃，保證實驗室人員能不斷得到培訓(xùn)。（3）實驗方面：使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理批準(zhǔn)的允許開展的項目。四、臨床基因擴增實驗室驗收申請如果以上方面準(zhǔn)備就緒后，就可以進(jìn)行臨床基因擴增實驗室驗收申請了，但以本人的經(jīng)驗，建議在實驗室設(shè)計好后，先請驗收專家進(jìn)入實地看一下，并提出他們的寶貴意見，以免在驗收時因離要求有差距而成耽誤了驗收，同時編寫好的程序性文件和SOP文件也應(yīng)請才、專家過目，得到認(rèn)可后再提交申請，內(nèi)容包括：1.基因擴增檢驗實驗室基本情況：（1）實驗室所屬法人單位名稱、地址、電話、聯(lián)系人等。（2）實驗室人呀情況和職稱比例。2.應(yīng)提供的資料（1）醫(yī)療機構(gòu)職業(yè)許可證復(fù)印件；（2）擬設(shè)置基因擴增檢驗實驗室醫(yī)院的醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況，對臨床基因擴增檢驗的需求情況以及實驗室運行的預(yù)測分析；（3）擬設(shè)基因擴增檢驗實驗室的設(shè)置平面圖；（4）實驗室主要負(fù)責(zé)人簡歷表；（5）實驗室工作人員一覽表；（6）主要儀器設(shè)備表；（7）擬開展的臨床基因診斷項目；（8）實驗室相關(guān)程序文件和標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）；（9）檢驗報告樣單；3.希望驗收時間4.聲明本實驗室自愿申請衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的技術(shù)驗收，并愿意承擔(dān)下列義務(wù)：遵守臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法和臨床基因診斷實驗室工作規(guī)范及與關(guān)規(guī)定；不論能否獲得通過驗收，預(yù)付驗收階段的全部費用。五、現(xiàn)場技術(shù)驗收當(dāng)提交臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)驗收申請表后，大約兩周時間內(nèi)（視具體情況而定）衛(wèi)生部臨床檢驗中心會將臨床基因擴增檢驗實驗室收通知傳真或郵寄至你處，告知驗收工作的具體時間、專家組成員、驗收程序及驗收費用等。在驗收當(dāng)天，專家組成員將對實驗室布局、實驗室設(shè)置及儀器設(shè)備配備情況、實驗室表示、程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作文件的編寫、試驗記錄等情況進(jìn)行驗收，同時還會現(xiàn)場讓實驗室技術(shù)人員進(jìn)行臨床標(biāo)本的操作，實驗結(jié)果的正確與否也是實驗室驗收合格的依據(jù)之一?，F(xiàn)場提問時專家會對你所編寫的文件進(jìn)行提問，主要涉及實驗室污染、是內(nèi)質(zhì)控、標(biāo)本的收集及保存等。驗收結(jié)束后，專家會填寫臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)驗收報告，對驗收結(jié)果進(jìn)行總結(jié)，提出整改要求和意見。六、臨床基因擴增檢驗實驗室收體會1.認(rèn)真學(xué)習(xí)和領(lǐng)會衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法及其附件臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)，及衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)布臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范的內(nèi)容，并將以上兩個文件的內(nèi)容落室到自己所編寫的程序文件和標(biāo)準(zhǔn)操作程序中。2.實驗室布局設(shè)計好后一定要請專家實地進(jìn)行一下檢查，如果條件不具備，也可以將實驗室設(shè)計平面圖寄給專家，因為每個實驗室都有自己的具體情況，如果是新建的實驗室可以按照衛(wèi)生部臨檢中心提供的標(biāo)準(zhǔn)實驗設(shè)計圖來設(shè)計，如果是在老的實驗室基礎(chǔ)上改造，就應(yīng)該多聽一些專家的意見，以免在驗收的時候因?qū)嶒炇以O(shè)計不合理而耽誤驗收以至延誤臨床工作的開展。3.程序性文件和標(biāo)準(zhǔn)操作程序編寫時，最主要的是可操作性要強，尤其是SOP文件，使用頻率很高，與實驗室的日常工作密切相關(guān)，寫的要具體一些，格式并不是很重要，主要是讓第依次接觸該SOP的人也能夠按其完成相關(guān)操作。同時還要集注，該文件不是用來驗收的。而是給自己實驗室人員用的，要認(rèn)識到文件對保證檢驗質(zhì)量的重要性，這樣在編寫時就能更細(xì)化，更具體，更實用。文件的編寫是整個實驗室驗收工作任務(wù)重要的一個環(huán)節(jié)，也是驗收工作時檢查的重點，所以在編寫文件時要讓每一個實驗室的人員都參與進(jìn)來，對所寫的內(nèi)容、程序和要求都要知道，并能遵守執(zhí)行。在驗收的時候，專家會對你所寫的文件內(nèi)容進(jìn)行提問，如果一個實驗室操作人員對其應(yīng)該遵循的管理制度和SOP一無所知之甚少，這樣對日常檢驗的質(zhì)量控制也是沒有好出的。文件編寫好后，建議也請專家過目，得到首背后再提交認(rèn)可申請。4.文件編寫好后，應(yīng)該按其執(zhí)行，做到“記錄你所做的”簡單的說就是將常規(guī)工作中所做的記錄下來，一般說，需要記錄的有臨床標(biāo)本接收中的餓患者個人資料、標(biāo)本接收日期、標(biāo)本狀態(tài)、唯一編號等；檢測前實驗室的清潔；檢測中實驗記錄，試劑廠家、批號、檢測日期、檢測結(jié)果、質(zhì)控記錄及分析、檢測人（簽字）、儀器運轉(zhuǎn)情況等；檢測后實驗臺面、儀器設(shè)備等的消毒和清潔、紫外線照射等。依次兩次的記錄并不難，難的是持之以恒。所以許多記錄我們多記錄我們可以把做到成表格的形式，記錄時在相應(yīng)的條款上打“”就行了。5.實驗過程嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)。我們編寫的質(zhì)量手冊的木的的是規(guī)格實驗操作整個過程，做到實驗過程有章可循，實驗記錄有據(jù)可查，保證實驗結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)則性。由于基因擴增技術(shù)特殊性，即使嚴(yán)格按質(zhì)量手冊進(jìn)行操作，也難免出現(xiàn)錯誤結(jié)果，因此包括試劑空白對照，陰性標(biāo)本對照、臨界值陽性標(biāo)本對照等，分別監(jiān)測試劑配制與加樣過程中是否存在污染，標(biāo)本核酸模板提取過程紅是否存在污染，標(biāo)本檢測過程中是否在假陰性結(jié)果和結(jié)果是否準(zhǔn)確等。6.工作量少影響質(zhì)量保證系實施。嚴(yán)格按臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)要求通過驗收的實驗室，存在一定運行成本，需要有