中藥學(xué)畢業(yè)論文非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

1、本科畢業(yè)論文非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究二級(jí)學(xué)院中藥學(xué)院專(zhuān) 業(yè)中藥學(xué)（中藥現(xiàn)代化技術(shù)方向）班 級(jí)2007級(jí)（2）班學(xué)生姓名學(xué) 號(hào)0706506211指導(dǎo)教師2 0 1 1 年 4 月誠(chéng) 信 聲 明我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。我承諾，論文（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者（簽名）： 年 月 日目 錄（大綱一級(jí)，三號(hào)黑體加粗居中）（空1行）摘要-1前言382材料與儀器39

2、2.1xxx392.2xxx393方法（或?qū)嶒?yàn)方法）403.1xxx403.2xxx404結(jié)果405討論41參考文獻(xiàn)42綜述43致謝44附錄（如沒(méi)有圖譜、調(diào)查表等要去掉）45注：關(guān)于論文目錄，我院統(tǒng)一寫(xiě)到二級(jí)目錄，以上是統(tǒng)一格式。(此為實(shí)驗(yàn)論文格式)如非實(shí)驗(yàn)論文，目錄格式也應(yīng)一致，但目錄名稱(chēng)中“材料與儀器、方法與結(jié)果（或?qū)嶒?yàn)方法）”可換成相對(duì)應(yīng)的內(nèi)容。如“資料與方法、結(jié)果與分析” ； 或“方法、結(jié)果、分析與討論 ”等。請(qǐng)?jiān)谏辖毁Y料時(shí)刪除此注。樣本3 非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究摘要：目的 研究非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；方法 采用薄層色譜法對(duì)黃芩藥材中黃芩苷及抗感飲中黃芩苷、桔梗和連翹成分進(jìn)

3、行定性分析，用高效液相色譜法對(duì)黃芩藥材中黃芩苷和抗感飲中黃芩苷進(jìn)行定量分析：色譜柱diamonsil c18柱（200mm4.6mm，5m迪馬公司），預(yù)柱為大連依利特（佳杰）；流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm，柱溫25；進(jìn)樣量 20l。結(jié)果 采用薄層色譜法鑒別，所得圖譜清晰，可鑒別出黃芩藥材的特征成分及抗感飲中黃芩苷、桔梗、連翹等味藥的特征成分；采用高效液相色譜法測(cè)定，黃芩藥材按干燥品計(jì)算，含黃芩苷（c21h18o11）計(jì)，為10.24%,符合規(guī)定；抗感飲中黃芩苷在8g/ml-48g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（相關(guān)系數(shù)r=0.9998）；經(jīng)

4、測(cè)定，3批抗感飲中黃芩苷的含量均符合南方醫(yī)院藥學(xué)部?jī)?nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；結(jié)論 本方法快速準(zhǔn)確可靠，可作為非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)控方法。關(guān)鍵詞：抗感飲；黃芩苷；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)istudy on quality standards for nonstandard preparation kangganyinabstract: objective the study of standard preparations are kangganyin quality standard . methods tlc method of radix scutellariae medical b

5、aicalin and kangganyin in baicalin, balloonflower and forsythia constituents of qualitative analysis, by hplc of radix scutellariae medical baicalin and kangganyin in baicalin quantitative analysis : diamonsil c18 column chromatography column (200mm4.6mm，5m dima company ), advance in accordance with

6、 the special column for the dalian (jia jie) ; mobile phase for methanol-water - glacial acetic acid (60) in the five: velocity 1.0 ml/min ; for 274nm detected wavelength ; column temperature 25 ; enter the sample weight 20 mu l ; results tlc method to identify, income map clarity, can identify radi

7、x scutellariae crude characteristic ingredients and kangganyin in baicalin, balloonflower, such as gout drug characteristics of forsythia bush component; by hplc, radix scutellariae medicinal materials according to the dry matter computation, including baicalin (c21h18o11) plan, for 10.24%, in confo

8、rmity with the provisions, kangganyin symposium in baicalin in 8 muon g/ml - 48 muon g/ml range insider sexual relationship good (correlation coefficient r = 0.9998); according to the mensuration, three batches anti feeling symposium in baicalin content which conform to the southern hospital medicin

9、e division of internal control quality standards, conclution this method is rapid, accurate and reliable as non-standard preparations are resistant to drink quality standard monitoring method. keywords: kangganyin; baicalin, hplc, tlc,quality standard.sii1前言抗感飲是南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院自產(chǎn)的制劑，是由黃芩、金銀花、連翹、生地、桔梗等多味中藥

10、經(jīng)提取制成的非標(biāo)準(zhǔn)制劑，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，適用于病毒和細(xì)菌感染引起的肺炎、氣管炎、支氣管炎、咽炎，扁桃體炎等上呼吸道感染及感冒，病毒性流感引起的發(fā)熱，咽痛，咳嗽和老年性哮喘等疾病的治療，是抗病毒、抗菌的中成藥。該方中黃芩為君藥，其主要作用為抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗菌解熱等。本課題對(duì)抗感飲中的中藥材及其主要成分進(jìn)行定性、定量試驗(yàn)，以黃芩苷、黃芩藥材、連翹藥材和桔梗藥材為對(duì)照品，采用薄層色譜法，對(duì)黃芩藥材及抗感飲中的黃芩苷、連翹和桔梗成分進(jìn)行定性分析；采用高效液相色譜法對(duì)黃芩藥材及抗感飲中的黃芩苷進(jìn)行定量分析。隨著人類(lèi)社會(huì)的發(fā)展，氣候也發(fā)生了變化，空氣的質(zhì)量也降低，各類(lèi)疾病也逐漸登上人類(lèi)的

11、舞臺(tái)，人們難免不受其侵犯，如病毒、細(xì)菌感染引起的肺炎、氣管炎、支氣管炎、咽炎，扁桃體炎等上呼吸道感染及感冒，病毒性流感引起的發(fā)熱，咽痛，咳嗽和老年性哮喘等疾病。通過(guò)查找和分析文獻(xiàn)得知，類(lèi)似抗感飲功效的制劑的研究非常熱門(mén)，主要包括藥物的療效，制劑中有效成分含量的測(cè)定，制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究等等方面?？垢酗嬰m為南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院自制的非標(biāo)準(zhǔn)制劑和只限于院內(nèi)醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用，但其使用范圍廣及臨床療效顯著，銷(xiāo)量較大，故產(chǎn)量相對(duì)也高。自2005年8月，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)管理辦法開(kāi)始實(shí)施，該辦法規(guī)定醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑只能在本醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)憑執(zhí)業(yè)醫(yī)師的處方使用。這對(duì)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑來(lái)說(shuō)是個(gè)沉重的打擊

12、，但院內(nèi)制劑良好的治療效果，以及相對(duì)低廉的價(jià)格又讓其具有蓬勃的生命力。所以當(dāng)前的形勢(shì)下，確保院內(nèi)制劑效果顯著、質(zhì)量合格就尤為重要。抗感飲是南方醫(yī)院根據(jù)藥典規(guī)定，結(jié)合自身臨床實(shí)踐所配制的一種經(jīng)典藥物，臨床療效顯著。所以對(duì)其建立適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法，控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全和有效，改善產(chǎn)品的制備工藝具有十分重要的意義。本課題對(duì)抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究是從原料開(kāi)始跟蹤研究，先對(duì)其原料進(jìn)行檢測(cè)，符合中國(guó)藥典（2010年版）的相關(guān)規(guī)定者，再投料生產(chǎn)制劑，最后又對(duì)該制劑中的主要有效成分進(jìn)行定性、定量分析，旨在確定在黃芩苷和抗感飲中的有效檢測(cè)方法，并制定黃芩苷的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，為抗感飲中黃芩苷含量檢測(cè)提供有效根據(jù)，對(duì)有

13、效地保證抗感飲含量檢測(cè)的準(zhǔn)確性具有相當(dāng)?shù)囊饬x。2材料與儀器2.1材料2.1.1藥品：黃芩對(duì)照藥材，黃芩苷對(duì)照品，黃芩素對(duì)照品，漢黃芩素對(duì)照品，連翹對(duì)照藥材，桔梗對(duì)照藥材，以上藥品均由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供。2.1.2試劑：甲醇、磷酸和冰醋酸是色譜純；甲苯、乙酸乙酯、甲酸、乙醇、氯仿、無(wú)水硫酸鈉、10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液等均為分析純；純化水為本院制劑2.2主要儀器996型waters液相色譜儀；empower色譜處理系統(tǒng)；天津奧特賽恩斯at-330柱溫箱；sartorius公司r200d電子天平；超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）； 超純水儀（mill-qplus usa）；半

14、自動(dòng)點(diǎn)樣儀linomat-5，數(shù)碼相機(jī)系統(tǒng)digistore；電熱恒溫水浴鍋dzkw-d-2。3實(shí)驗(yàn)方法3.1黃芩藥材的鑒別 tlc鑒別：取本品藥材粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇（3:1）的混合液30ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml是溶解，取上清液作為供試品。另取黃芩對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取黃芩苷對(duì)照品，黃芩素對(duì)照品，漢黃芩素對(duì)照品，加甲醇分別制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄b）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液，對(duì)照藥材溶液各2ul及上述三種對(duì)照品溶液各1ul，分別點(diǎn)于同一用聚酰胺薄膜

15、上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10:3：1：2）為展開(kāi)劑，預(yù)飽和30分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示三個(gè)相同的暗斑點(diǎn)。3.2黃芩藥材的含量測(cè)定 hplc測(cè)定：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄d）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液制備：取60c減壓干燥4小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml中含黃芩

16、苷60ul的溶液，即得。供試品溶液制備：取黃芩粉末約0.3g，精密稱(chēng)定，加70%乙醇40ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液置100ml容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。 測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品按干燥品計(jì)算，含黃芩苷（c21h18o11）計(jì)，不得少于9.0%。3.2抗感飲主要有效成分的鑒別3.2.1黃芩的tlc鑒別：供試品溶液制備：取本品1ml，置10ml容量瓶中，加75%乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。對(duì)照品

17、溶液制備：另取黃芩苷對(duì)照品，加乙醇制成1ml含0.1ml的溶液。按薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄b）試驗(yàn),吸取上述2種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一用聚酰胺薄膜上，以36%乙酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%的三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的褐色斑點(diǎn)。3.2.2連翹的tlc鑒別：取本品10ml，加乙酸乙酯充分振搖提取3次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸發(fā)至干，殘?jiān)?ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取連翹對(duì)照藥材0.5g，加甲醇10ml，置水浴上加熱回流20分鐘，濾過(guò)，濾液在水浴鍋上濃縮至5ml，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典201

18、0年版一部附錄b）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸（17：2：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。3.2.3桔梗的tlc鑒別：取本品10ml，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合液20 ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水30ml洗滌，棄去洗液，三氯甲烷用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取桔梗對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典20

19、10年版一部附錄b）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10l，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（1：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。3.3抗感飲中黃芩苷的含量測(cè)定（照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄d）測(cè)定。）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使

20、溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含黃芩苷0.1mg）。供試品溶液的制備：精密量取裝量項(xiàng)下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每支含黃芩按黃芩苷（c21h18o11）計(jì)，不得少于81mg。3.4方法學(xué)驗(yàn)證1）儀器與試藥儀器：996型waters液相色譜儀；empower色譜處理系統(tǒng)；天津奧特賽恩斯at-330柱溫箱；sartorius公司r200d電子天平；超聲儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）； 超純水儀（mill-qplus

21、usa）。試藥：黃芩苷對(duì)照品（715-200111）（置五氧化二磷減壓干燥中干燥12小時(shí)以上使用，）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；冰醋酸為色譜純。2）色譜條件 色譜柱diamonsil c18柱（200mm4.6mm，5m迪馬公司），預(yù)柱為大連依利特（佳杰）；流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。柱溫25；進(jìn)樣量 20l。3）系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按1）項(xiàng)下進(jìn)樣對(duì)照品溶液，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。4）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱(chēng)?。ㄖ梦逖趸诇p壓干燥中干燥12小時(shí)以上）黃芩苷對(duì)照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇

22、適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液，取儲(chǔ)備液5ml置25ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。5） 供試品溶液的制備 精密量取裝量項(xiàng)下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得供試品儲(chǔ)備液，取供試品儲(chǔ)備液1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。6） 線性試驗(yàn) 精密量取黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液各2、4、6、8、10和12ml,一一對(duì)應(yīng)置于25ml容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲，即得系列對(duì)照品溶液，按“1）”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積

23、。以峰面積的積分值a為縱坐標(biāo)，以黃芩苷的濃度c（g/ml）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程.7）空白試驗(yàn) 按處方比例，取按本品制備工藝制成的不含黃芩苷藥品的陰性對(duì)照樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液，精密吸取10l，注入液相色譜儀。8) 精密度試驗(yàn) 精密量取黃芩苷對(duì)照品溶液20l，按“1）”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定黃芩苷的吸收面積。 9）穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取供試品溶液，分別于0h、4h、8h、16h、24h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。10）加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品1.0ml，分別準(zhǔn)確加入黃芩苷對(duì)照品溶液各7.0ml、9.0ml、11.0ml，每個(gè)濃度2份，分別置于25m

24、l量瓶中加50%甲醇至刻度，搖勻，超聲。按“1）”項(xiàng)下的色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以回歸方程計(jì)算各自的回收率。11）重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為20101101抗感飲口服液，按上述方法制備成6份供試品溶液，并照上述色譜條件平行測(cè)定，12） 樣品測(cè)定 精密量取供試品溶液，分別測(cè)定3個(gè)批號(hào)的抗感飲的黃芩苷的含量。4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1黃芩藥材鑒別的結(jié)果4.2黃芩藥材含量測(cè)定的結(jié)果4.2.1 黃芩苷對(duì)照品的色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖： 圖1. 黃芩苷對(duì)照品a的色譜峰圖2. 黃芩苷對(duì)照品b的色譜峰圖3. 黃芩苷對(duì)照品c的色譜峰表4-1.黃芩苷對(duì)照品的色譜峰結(jié)果 試 樣 保留時(shí)間（分鐘） 面積（微伏*秒） 高度（微

25、伏） 含（ug/ml）黃芩苷對(duì)照品a 12.937 5501657 131274 60.000黃芩苷對(duì)照品b 12.916 5597879 134980 60.000黃芩苷對(duì)照品c 12.840 5603925 136188 60.0004.2.2黃芩藥材供試品色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖：圖4.黃芩藥材供試品a的色譜峰圖5.黃芩藥材供試品b的色譜峰表4-2.黃芩藥材供試品的色譜峰結(jié)果試 樣 保留時(shí)間 面 積 高 度 含 量（分鐘） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黃芩藥材供試品a 12.833 2598511 57459黃芩藥材供試品b 12794 2560295 592284.2抗感飲主

26、要有效成分鑒別的結(jié)果4.2.1黃芩的tlc鑒別 4.2.2連翹的tlc鑒別4.2.3桔梗的tlc鑒別4.3抗感飲中黃芩苷含量測(cè)定的結(jié)果4.3.1 黃芩苷對(duì)照品色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖：圖6.黃芩苷對(duì)照品1的色譜峰圖7.黃芩苷對(duì)照品2的色譜峰圖8.黃芩苷對(duì)照品3的色譜峰表4-3.黃芩苷對(duì)照品的色譜峰結(jié)果試 樣 保留時(shí)間 面 積 高 度 含 量 （分鐘） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黃芩苷對(duì)照品1 5.314 9065792 687986 101.000黃芩苷對(duì)照品2 5.272 8939025 695063 101.000黃芩苷對(duì)照品3 5.276 8975515 703097 101

27、.0004.3.2抗感飲中黃芩苷色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖：圖9.抗感飲供試品中黃芩苷1的色譜峰圖10.抗感飲供試品中黃芩苷2的色譜峰表4-4. 抗感飲供試品中黃芩苷的色譜峰結(jié)果試 樣 保留時(shí)間 面 積 高 度 含 量 （分鐘） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黃芩苷供試品1 5.216 16367832 1341897 101.000黃芩苷供試品2 5.216 16428816 1333989 101.0004.4方法學(xué)驗(yàn)證 4.4.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果下圖：圖11. 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品4.4.2線性試驗(yàn)以峰面積的積分值a為縱坐標(biāo)，以黃芩苷的濃度c（g/ml）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程，為

28、：y=75449x+2619.2，r=0.9998結(jié)果表明，黃芩苷在8.552g/ml51.312g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。圖12 線性 1圖13 線性 2圖14 線性 3圖15 線性 4圖16 線性 5表4-5抗感飲線性曲線（n=6）4.4.3精密度試驗(yàn) 精密量取黃芩苷對(duì)照品溶液20l，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定黃芩苷的吸收面積，計(jì)算其rsd為1.51%，符合要求，表明精密度良好。圖17 精密度 1圖18精密度 2圖19 精密度 3圖20 精密度 4圖21 精密度 5圖22 精密度 64.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取供試品溶液，分別于0h、4h、8h、16h、24h進(jìn)樣測(cè)定，

29、記錄峰面積，結(jié)果黃芩苷面積的rsd為 2.49%，表明溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。圖23 穩(wěn)定性1圖24穩(wěn)定性2圖25 穩(wěn)定性3圖26 穩(wěn)定性4圖27 穩(wěn)定性54.4.5加樣回收率試驗(yàn)圖 28 加樣回收試驗(yàn) 1圖 29 加樣回收試驗(yàn) 2圖 30 加樣回收試驗(yàn) 3圖 31 加樣回收試驗(yàn) 4圖 32 加樣回收試驗(yàn) 5圖 33加樣回收試驗(yàn)6表4-6.黃芩苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)（n=6）樣品量/g加入量/g測(cè)得量/g回收率/%/%rsd/%16.2149.66176.03106.13106.401.5516.2149.66176.19106.2316.2192.42221.28106.5816.2192.4

30、2224.31107.5216.2235.18271.09108.3816.2235.18259.67103.534.4.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)據(jù)試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)（下圖）計(jì)算知黃芩苷含量的rsd為1.78%（n6），表明方法重現(xiàn)性良好。圖 34 重復(fù)性 1圖 35 重復(fù)性 2圖 36 重復(fù)性 3圖 37 重復(fù)性 4圖 38 重復(fù)性5圖 39 重復(fù)性 644.7樣品測(cè)定精密量取供試品溶液，分別測(cè)定3個(gè)批號(hào)的抗感飲的黃芩苷的含量。結(jié)果表4-7表4-7.樣品測(cè)定結(jié)果批號(hào) 黃芩苷 rsd%20101101 8.315mg/ml20101101 8.114mg/ml 1.22%20101101 8.218mg/ml5

31、討論 參考文獻(xiàn)引用，序號(hào)在右上角標(biāo)注5.1影響產(chǎn)物的條件分析5.1.1反應(yīng)介質(zhì)堿性強(qiáng)度的影響本反應(yīng)類(lèi)似willamson法制備醚的反應(yīng)，即殼聚糖分子中羥基首先要和氫氧化鈉鍵合，形成活性中心（chitosan-o-na+）后和氯乙酸反應(yīng)8, 10-14。因此堿化步驟是整個(gè)反應(yīng)的關(guān)鍵。堿化程度越高，約有利于反應(yīng)的進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)中，強(qiáng)堿條件下，同時(shí)提高氯乙酸的量有利于提高取代度。樣本9參考文獻(xiàn)1 高懷生，黃是是，張世達(dá)，等. 殼聚糖的結(jié)構(gòu)分析j. 天津化工，1996，14(2): 21-22.2 x.-g. chen, h.-j. park. chemical characteristics of o-

32、carboxymethyl chitosans related to the preparation conditions j. cacinogtnesis, 1996,17(2) :135-140.樣本103 陳文娟.姜黃素對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的調(diào)控j. 臨床血液學(xué)雜志，1999， 12(5)：238-241綜 述淺談黃芩苷含量測(cè)定方法研究進(jìn)展前言 黃芩( s cutel l ari a baicalensis georgi) 為唇形科黃芩屬多年生草本植物黃芩的干燥根,又名山茶根、爛心草、黃金茶、子芩、條芩、枯芩等，是我國(guó)著名的傳統(tǒng)中藥，始記于神農(nóng)本草經(jīng)，列為中品。主產(chǎn)于河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧等

33、地區(qū)，以山西產(chǎn)量最大，河北承德質(zhì)量最好。其性寒、味苦,歸肺、膽、脾、大腸和小腸經(jīng),具有清熱燥濕,涼血安胎,止血,瀉火解毒等功效,用于治療發(fā)熱煩渴、肺熱咳嗽、瀉痢熱淋、濕熱黃疸、胎動(dòng)不安和癰腫瘡毒等癥。黃芩的有效成分是黃酮類(lèi)化合物，迄今分離出近約40種黃酮，黃酮類(lèi)成分是其發(fā)揮藥理作用的基礎(chǔ)，其中黃芩苷（c21h12o11，baicalimai）、黃芩素(baacalien)、漢黃芩素(wogonin)、黃芩苷元(wogonoside)是最主要的活性成分，其中以黃芩苷的有效成分最強(qiáng)，是黃芩及其制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分，黃芩苷具有抗微生物、抗變態(tài)反應(yīng)、降壓和鎮(zhèn)靜、利膽、保肝和解痙等作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)

34、研究表明黃芩具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗過(guò)敏、抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞、抑制醛糖還原酶活性、阻止鈣離子通道及細(xì)胞凋亡等作用。黃芩苷已受到國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界越來(lái)越多的關(guān)注,需求量也隨之劇增, 是一種很有發(fā)展前途的抗氧化、抗腫瘤、抗病毒的生物化學(xué)成分1-2 。測(cè)定黃芩苷含量常在中藥制劑中作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。目前發(fā)展的黃芩苷測(cè)定方法有分光光度法、薄層掃描法、液相色譜法、紅外光譜分析法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效毛細(xì)管電泳法等7-9。1.分光光度法( spectrophotometry) 分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用

35、的波長(zhǎng)范圍為: 200400 nm的紫外光區(qū); 400760nm的可見(jiàn)光區(qū); 2.525 um (按波數(shù)計(jì)為4000cm-1400cm-1 )的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)(或比色計(jì)) 、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好3。應(yīng)用于黃芩苷測(cè)定得分光光度法主要是紫外分光光度法。1.1紫外分光光度法(ultraviolet spectrophotometry)紫外分光光度法是利用分子結(jié)構(gòu)具有雙鍵、共軛雙鍵、苯環(huán)、芳香稠環(huán)、芳香雜環(huán)或共軛烯烴的物在一定波長(zhǎng)(220350 nm)的范圍內(nèi)的吸收度來(lái)測(cè)定該物質(zhì)含量的一類(lèi)光學(xué)方法，其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、

36、儀器要求不高，易于普及。黃芩苷具有不飽和結(jié)構(gòu)，對(duì)紫外光具有選擇性吸收，可用該法測(cè)定含量。對(duì)于黃芩苷的復(fù)方制劑,多用色譜分離法去除干擾后再用紫外分光光度法進(jìn)行含量分析。馮敏等4采用紫外分光光度法測(cè)定了清熱口服液中黃芩苷含量。樣品經(jīng)過(guò)濃鹽酸(hcl)調(diào)節(jié)ph值,沉淀加氯仿提取, 75%乙醇洗脫沉淀,得到黃芩苷,在= 278100 nm波長(zhǎng)處測(cè)定,得到良好線性關(guān)系。鄧順甫5采用三波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定清熱解毒合劑中黃芩苷含量，3，黃芩苷在3.96849.60ug/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9983）；方法平均回收率為9896%，rsd=1.14.2. 薄層掃描法薄層掃描法主要利用薄層板將待測(cè)藥

37、物與其他干擾藥物分開(kāi),然后根據(jù)展開(kāi)后薄層板上確定待測(cè)組分的斑點(diǎn)位置,用薄層掃描儀測(cè)定斑點(diǎn)的峰面積或吸收度來(lái)定量，是2000版藥典黃芩苷的含量測(cè)定方法,方法較紫外分光光度法簡(jiǎn)便,避免了人手刮取斑點(diǎn)洗脫的缺點(diǎn),但該法精密度較低,而且回收率較差，但其也有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),如儀器價(jià)廉,薄層層析的流動(dòng)相選擇余地較hplc大得多,每次測(cè)定更新薄板,不會(huì)造成柱效下降等。薛滿，閔春艷6采用薄層掃描法測(cè)定金蟬口服液中黃芩苷的含量，黃芩苷點(diǎn)樣量(cr)在0.217-1.083ug/ml范圍內(nèi)與峰面積響應(yīng)值（a )呈良好的線性關(guān)系。3.液相色譜法3.1高效液相色譜法（hplc）高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相

38、泵入裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測(cè)器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號(hào)。高效液相色譜法具有靈敏度、特異性高,分離效能高，分析速度快,高度自動(dòng)化,進(jìn)樣前樣品處理簡(jiǎn)單,樣品易回收,樣品經(jīng)色譜柱可不被破等優(yōu)點(diǎn),是目前黃芩苷定量分析方法中較為優(yōu)越的方法,也是質(zhì)量控制中較常用的方法。但hplc存在分析時(shí)間長(zhǎng),分離效率低,色譜柱易污染難清洗的缺點(diǎn)。高效液相色譜法最常用的hplc多應(yīng)用紫外檢測(cè)器: c18色譜柱,流動(dòng)相甲醇-水-磷酸,檢測(cè)波長(zhǎng)270280 nm。測(cè)得線性關(guān)系、r、rsd、平均回收率、最低檢測(cè)度等均

39、符合標(biāo)準(zhǔn)，是黃芩苷含量測(cè)定的藥典測(cè)定方法。李美月等10采用高效液相色譜法測(cè)定小兒清肺化痰口服液中黃芩苷的含量，黃芩苷在0.1211 2.4220ug 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)r=0.9997, 平均回收率為98.4%,rsd=0.85%。劉堅(jiān)華11采用hplc-dad法測(cè)定肺力咳合劑中黃芩苷的含量，黃芩苷進(jìn)樣量在0.090.72ug范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(r=0.9995);平均回收率為99.8%(rsd=0.77%（n=6)。3.2 超高效液相色譜法（uplc）超高效液相色譜法對(duì)原高效液相色譜方法進(jìn)行轉(zhuǎn)換并優(yōu)化液相色譜方法。該方法加快了分析速度，提高了分析效率，減少了有機(jī)溶劑

40、的使用，并且得到了更高的分析靈敏度。李強(qiáng)，巴小翠12采用uplc法測(cè)定黃芩藥材中黃芩苷的含量，芩苷的線性范圍為29.86238.85ng(r=0.9999)；平均回收率(n=6)為101.2，rsd為1.8，1個(gè)分析流程大約需要3min。李強(qiáng)等13采用uplc法測(cè)定雙黃連口服液中黃芩苷的含量，黃芩苷的線性范圍為01190358ug(r=09992)，平均回收率(n=6)為101.2，rsd為18；1個(gè)分析流程大約需要3min。3.3 高分離度快速液相色譜法(rrlc)rrlc目前廣泛運(yùn)用于中藥化學(xué)成分，中藥制劑，中藥復(fù)方成分的研究分析中，具有分析時(shí)間短，柱效高等優(yōu)點(diǎn)，為復(fù)雜體系的分離分析提供了

41、良好的平臺(tái). 爾西丁買(mǎi)買(mǎi)提等14采用高分離度快速液相色譜法測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷的含量，黃芩苷在0.15一1.35ug(r=09999)范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，加樣回收率為100.41%，rsd= 1.42%。3.4 反相高效液相色譜法(rphplc) rp-hplc法是在hplc法的基礎(chǔ)上改變固定相和流動(dòng)相的極性的液相色譜法。吳佳等15采用反相高效液相色譜法測(cè)定當(dāng)歸拈痛丸中黃芩苷含量黃芩苷選樣量在0.060841.8252 ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=l.00，平均加樣回收率為97.0% ，rsd為1.1% (n=9)。李卓、李湘斌16采用反相hplc法測(cè)定咽喉炎合劑中黃

42、芩苷的含量，黃芩苷進(jìn)樣量在o.141.20 ug 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r =0.99998)；平均加樣回收率為99.78%(rsd=055%，n=6)。林啟凰等17采用反相流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定黃芩苷，在優(yōu)化的條件下，黃芩苷濃度在1.010-81.010-7和3.010-74.0 10-6 moll范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光抑制強(qiáng)度i，呈良好的線性關(guān)系，檢出限為1.0 x 109 moll，對(duì)30107 moll的黃芩苷進(jìn)行平行測(cè)定lo次，得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rsd)為1.7。4. 紅外光譜分析法紅外光譜分析法(n ir)首先通過(guò)樣品測(cè)定校正集的光譜、組成或性質(zhì)數(shù)據(jù)(組成或性質(zhì)數(shù)據(jù)需通過(guò)其它認(rèn)可的

43、標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定) ,采用合適的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法建立校正模型,再通過(guò)建立的校正模型與未知樣品進(jìn)行比較,實(shí)現(xiàn)定性或定量分析，可使用傅里葉變換紅外光譜儀或色散型紅外分光光度計(jì)。用聚苯乙烯薄膜（厚度約為0.04mm）校正儀器，繪制其光譜圖，用3027cm-1，2851cm-1，1601cm-1，1028cm-1，907cm-1 處的吸收峰對(duì)儀器的波數(shù)進(jìn)行校正。該法具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度高、無(wú)損、原位與無(wú)消耗等特點(diǎn)。王東，王玲18采用近紅外光譜法測(cè)定黃芩藥材中黃芩苷的含量，利用 3o個(gè)樣品經(jīng)內(nèi)部交叉驗(yàn)證建立預(yù)測(cè)模型，內(nèi)部交叉驗(yàn)證決定系數(shù)r2=86.24，內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差rmsecv=0.8220。用9

44、個(gè)樣品進(jìn)行外部驗(yàn)證，外部驗(yàn)證預(yù)測(cè)均方差rmsep=0.3667，預(yù)測(cè)值與真實(shí)值的相關(guān)系數(shù)為0.9833。預(yù)測(cè)值的平均回收率為99.37。楊欣等19對(duì)黃芩近紅外漫反射光譜法對(duì)定量模型的建立及應(yīng)用進(jìn)行研究，所建立的定量模型，其內(nèi)部交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)r一0971 2，內(nèi)部交叉驗(yàn)證的均方差(rmsecv)為0.677；外部驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)r一0.96l8，外部驗(yàn)證的均方差(rmsep)為0.396。5.色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法質(zhì)譜法是使待測(cè)化合物產(chǎn)生氣態(tài)離子，再按質(zhì)荷比（m/z）將離子分離、檢測(cè)的分析方法，檢測(cè)限可達(dá)10-1510-12 mol 數(shù)量級(jí)。質(zhì)譜法可提供分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息，定量測(cè)定可采用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法

45、，是分析純有機(jī)化合物的最強(qiáng)有力的分析工具。色譜法是根據(jù)不同組分之間性質(zhì)如(溶解度、吸附能力、揮發(fā)度等)的不同,使樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后差速分離而分開(kāi)的方法。ms作為質(zhì)譜檢測(cè)器，其靈敏度優(yōu)于紫外分光光度法，質(zhì)譜在檢出峰的同時(shí)還能給出分子量和結(jié)構(gòu)信息,使檢測(cè)具二維性。但ms不適合分析復(fù)雜的混合物。經(jīng)典的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法包括氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(gc/ms)、液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(lc/ms)、超臨界流體色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(sfc/ms)、毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用(ce/ms)。焦燕等20采用lc - ms/ms法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地半枝蓮中野黃芩苷和芹菜素含量，野黃芩苷濃度在2167217 mg/l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，

46、含量范圍為0103%0139%，平均回收率( n = 5)為9911%，rsd為1.4%。6. 高效毛細(xì)管電泳法（hpce）高效毛細(xì)管電泳是80年代發(fā)展起來(lái)的一類(lèi)分離分析方法，將經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合，具有高效、高速、微量、操作簡(jiǎn)單和低耗的優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析方面逐漸得到重視，有了較廣泛的應(yīng)用，但檢出度和精密度均遜色于hplc。楊慧文等21采用毛細(xì)管電泳法測(cè)定梔子金花丸中黃芩苷的含量，黃芩苷質(zhì)量濃度在7.552.5.ug/ml范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系(r=0.9996)，黃芩苷平均回收率為96.7，rsd值為1.62(n=6)。林凌等22采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定黃芩中黃芩苷的含量，黃芩苷

47、峰形良好，同時(shí)分離出多個(gè)峰有待進(jìn)一步研究。時(shí)存義等23的黃芩的毛細(xì)管電泳指紋圖譜和黃芩苷含量測(cè)定研究，以萘普生峰為參照物峰，確定了8個(gè)共有峰，l0個(gè)產(chǎn)地黃芩的cefp與黃芩苷的cefp具有良好相似性，含量測(cè)定結(jié)果表明不同產(chǎn)地黃芩中黃芩苷含量有明顯差異。結(jié)束語(yǔ) 隨著藥動(dòng)學(xué)的發(fā)展和完善，以及聯(lián)用技術(shù)、新方法的出現(xiàn)，黃芩苷的含量測(cè)定不斷朝著準(zhǔn)確、方便、快速、低成本、低污染的方向發(fā)展。應(yīng)用于黃芩苷含量測(cè)定的各項(xiàng)方法技術(shù)都有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，但由于hplc法技術(shù)已很成熟在測(cè)定黃芩苷上得到普及，是目前黃芩苷定量分析方法中較為優(yōu)越的方法，也是質(zhì)量控制中較常用的方法。其中hpce法因其有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，其發(fā)展?jié)摿Ψ浅４?，將?lái)為我們制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分析化學(xué)成分等提供更好的平臺(tái)。 參考文獻(xiàn)1.李艷榮，潘海峰，魏紅，李守拙. 中藥材黃芩的研究近況. 承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). vol.26 no.4 2009.418-