常用細菌生化反應試驗

1、常用細菌生化反應試驗常用細菌生化反應試驗糖醇類代謝試驗糖醇類代謝試驗 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗 甲基紅試驗甲基紅試驗 v-p試驗試驗 葡萄糖氧化發(fā)酵試驗（葡萄糖氧化發(fā)酵試驗（o/f試驗）試驗） 七葉苷水解試驗七葉苷水解試驗 半乳糖苷滲透酶試驗半乳糖苷滲透酶試驗糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗 原理原理 多糖多糖單糖單糖丙酮酸丙酮酸酸性產物酸性產物(或產酸產氣或產酸產氣)ph 指示劑呈酸性指示劑呈酸性變色變色(若產氣者有氣泡出現(xiàn)若產氣者有氣泡出現(xiàn)) 培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、半固體發(fā)酵管、微培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、半固體發(fā)酵管、微量發(fā)酵管量發(fā)酵管 試劑：酚紅、溴甲酚紫等試劑：酚紅、溴甲酚紫等 結果結果:培養(yǎng)基呈酸性變色培養(yǎng)基

2、呈酸性變色 應用：觀察細菌對糖度的應用：觀察細菌對糖度的 分解情況，常分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定用于腸道桿菌的鑒定糖發(fā)酵試驗結果判斷糖發(fā)酵試驗結果判斷反應現(xiàn)象反應現(xiàn)象結果描述結果描述酸性酸性變色變色、有氣泡、有氣泡分解分解糖產酸、產氣糖產酸、產氣酸性酸性變色變色、無氣泡、無氣泡分解分解糖產酸、不產糖產酸、不產氣氣培養(yǎng)基不變色培養(yǎng)基不變色不分解不分解糖糖甲基紅試驗甲基紅試驗 原理：細菌分解糖，產生丙酮酸，進一原理：細菌分解糖，產生丙酮酸，進一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基ph維持在維持在4.4以下，加入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)以下，加入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)紅色反應。此為

3、甲基紅試驗紅色反應。此為甲基紅試驗陽性。陽性。 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水 試劑：甲基紅試劑試劑：甲基紅試劑 結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色紅色：+ 培養(yǎng)基不變色：培養(yǎng)基不變色： 應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產氣腸桿菌主要用于區(qū)別大腸肝菌和產氣腸桿菌伏普試驗（伏普試驗（v-p試驗）試驗） 原理：細菌發(fā)酵葡萄糖，產生丙酮酸，丙酮原理：細菌發(fā)酵葡萄糖，產生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白酰甲基

4、甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結合，生成紅色化胨中的精氨酸所含的胍基結合，生成紅色化合物。合物。 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水 結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色紅色：+ 培養(yǎng)基不變色：培養(yǎng)基不變色： 應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產氣腸桿菌要用于區(qū)別大腸肝菌和產氣腸桿菌葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸大量混合酸大量混合酸ph降至降至4.4以下以下甲基紅試劑甲基紅試劑培養(yǎng)基培養(yǎng)基變紅變紅甲基紅試驗甲基紅試驗葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰v-p試劑培養(yǎng)基變紅vp試驗脫酸葡萄

5、糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖丙酮酸大量混合酸ph降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅乙酰甲基甲醇二乙酰v-p試劑培養(yǎng)基變紅脫酸蛋白質類代謝試驗蛋白質類代謝試驗 靛基質試驗靛基質試驗 硫化氫試驗硫化氫試驗 苯丙氨酸脫氨試驗苯丙氨酸脫氨試驗 尿素酶試驗尿素酶試驗靛基質試驗靛基質試驗 原理：細菌產生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的原理：細菌產生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質（吲哚），靛基質與試劑色氨酸，生成靛基質（吲哚），靛基質與試劑對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質。對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質。 培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基：蛋白胨水

6、試劑：靛基質試劑（含對二甲基氨基苯甲醛）試劑：靛基質試劑（含對二甲基氨基苯甲醛） 結果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：結果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：+ 培養(yǎng)基液面為黃色：培養(yǎng)基液面為黃色： 應用：用于腸道桿菌的鑒定應用：用于腸道桿菌的鑒定靛基質試驗原理靛基質試驗原理色氨酸酶色氨酸酶色氨酸色氨酸 靛基質靛基質（吲哚）（吲哚） 玫瑰靛基質玫瑰靛基質（玫瑰吲哚）（玫瑰吲哚）對二甲基氨基苯甲對二甲基氨基苯甲醛醛硫化氫試驗硫化氫試驗 原理：細菌分解蛋白質中的含硫氨基酸，原理：細菌分解蛋白質中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽或鉛鹽結合生成黑色絡合

7、物?；蜚U鹽結合生成黑色絡合物。 培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基 結果：培養(yǎng)基結果：培養(yǎng)基 變黑變黑 為陽性，不變黑為為陽性，不變黑為陰性陰性 應用：常用于腸道桿菌的鑒定應用：常用于腸道桿菌的鑒定苯丙氨酸脫氨實驗苯丙氨酸脫氨實驗 原理：細菌的具有的苯丙氨酸脫氨酶，原理：細菌的具有的苯丙氨酸脫氨酶，可使培養(yǎng)基中的苯丙氨酸脫氨，形成苯可使培養(yǎng)基中的苯丙氨酸脫氨，形成苯丙酮酸，后者與三氯化鐵作用，形成綠丙酮酸，后者與三氯化鐵作用，形成綠色化合物。色化合物。 培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂 試劑：試劑：10三氯化鐵三氯化鐵 結果：加入試劑后培養(yǎng)基呈現(xiàn)結果：

8、加入試劑后培養(yǎng)基呈現(xiàn)綠色綠色為陽為陽性性 應用：多用于腸道桿菌的鑒定應用：多用于腸道桿菌的鑒定苯丙氨酸脫氨試驗原理苯丙氨酸脫氨試驗原理苯丙氨酸苯丙氨酸苯丙氨酸脫氨酶苯丙氨酸脫氨酶苯丙酮酸苯丙酮酸10三氯化鐵三氯化鐵綠色化合物綠色化合物尿素酶試驗尿素酶試驗 原理：產生脲酶的細菌，能水解尿素生原理：產生脲酶的細菌，能水解尿素生成氨和成氨和co2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。 培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基 試劑：酚紅指示劑試劑：酚紅指示劑 結果：培養(yǎng)基變紅：結果：培養(yǎng)基變紅：+ 培養(yǎng)基不變色培養(yǎng)基不變色 應用：腸桿菌科屬間鑒定應用：腸桿菌科屬間鑒定尿素酶試驗原理尿素酶試驗原

9、理尿素尿素尿素酶尿素酶氨氨+co2培養(yǎng)基培養(yǎng)基ph升高升高酚紅呈堿性變色酚紅呈堿性變色枸櫞酸鹽利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗 原理：某些細菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽原理：某些細菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽 作為唯作為唯一碳源，細菌生長過程中分解枸櫞酸鹽產生碳一碳源，細菌生長過程中分解枸櫞酸鹽產生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是指示劑呈堿性反應。指示劑呈堿性反應。 培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽培養(yǎng)基 試劑：溴麝香草酚藍（試劑：溴麝香草酚藍（ph6.0以下呈黃色，以下呈黃色，

10、ph7.6以上呈藍色）以上呈藍色） 結果：培養(yǎng)基變藍：結果：培養(yǎng)基變藍：+ 培養(yǎng)基不變色：培養(yǎng)基不變色： 應用：腸桿菌科屬間鑒別應用：腸桿菌科屬間鑒別枸櫞酸鹽利用試驗原理枸櫞酸鹽利用試驗原理枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基ph下降溴麝香草酚藍 呈堿性變色培養(yǎng)基變藍培養(yǎng)基糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗甲基紅試驗甲基紅試驗靛基質試驗靛基質試驗血清學試驗血清學試驗 血清學鑒定：血清學鑒定： 用已知抗體鑒定未知的細菌或標本中的用已知抗體鑒定未知的細菌或標本中的抗原抗原 血清學診斷：血清學診斷： 用已知抗原檢測血清中的特異性抗體用已知抗原檢測血清中的特異性抗體血清學鑒定血清學鑒定 試劑（診斷血清）試劑（診斷血清） ：含抗體：含抗體 檢測對象：特異性抗原檢測對象：特異性抗原 方法：直接凝集試驗