色譜法的論與實(shí)踐

1、2021-11-71色譜法的理論與實(shí)踐2021-11-72一、色譜基礎(chǔ)理論概述一、色譜基礎(chǔ)理論概述n色譜法或稱層析法（chromatography）是一種物理或物理化學(xué)的分離分析方法。n1906年俄國植物學(xué)家tswett m將碳酸鈣裝在豎立的玻璃柱內(nèi)，從頂端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚沖洗，在柱的不同部位形成色帶，因而命名為色譜法。2021-11-73z色譜法是利用物質(zhì)在不同的兩相中分配、吸附或其他親和作用的差異，通過多次重復(fù)使微小的差別積累起來變成大的差異，從而使混合物中各組分達(dá)到分離。z色譜技術(shù)在近二十多年中的飛速發(fā)展已形成一門專門的科學(xué)，稱為色譜學(xué)。廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，成為多組

2、分混合物的最重要的方法。2021-11-74 二、色譜法的分類二、色譜法的分類 按流動相與固定相的分子聚集狀態(tài)分類氣相色譜法（氣-固，氣-液）液相色譜法（液-固，液-液）柱色譜，平面色譜，逆流分配2021-11-75按色譜過程的分離機(jī)制分類 u吸附色譜（adsorption ）利用吸附能力的差別.2021-11-76u離子交換色譜（ion exchange ）2021-11-77u毛細(xì)管電色譜（capillary electro- ）2021-11-78填充柱毛細(xì)管柱毛細(xì)管電色譜毛細(xì)管電泳柱色譜平面色譜逆流分配色譜gc lc sfccec 色譜法經(jīng)典液相色譜hplc紙色譜法薄層色譜法薄膜色譜法

3、2021-11-79u熱力學(xué)理論塔片理論塔片理論 是由平衡的觀點(diǎn)來研究分離過程，是一種半經(jīng)驗(yàn)理論，以塔片理論為代表。u動力學(xué)理論速率理論速率理論 是從動力學(xué)觀點(diǎn)，即速度來研究各種動力學(xué)因素對柱效的影響，以van deemeter方程式為代表。 2021-11-710n基本概念u色譜峰（peak）樣品產(chǎn)生的電信號強(qiáng)度對洗脫時(shí)間作圖。稱為流出曲線，濃度 -時(shí)間曲線，也稱色譜帶（band）。u色譜峰有三種形式：t對稱峰t拖尾峰（tailing peak）t前延峰（leading peak）2021-11-711n峰形參數(shù)：u對稱因子u拖尾因子掌握2021-11-712w0.05h = x =h/20

4、峰的對稱性ha bd1xww0.05h0.05h2021-11-713u一個(gè)色譜峰，可用三項(xiàng)參數(shù)來描述：峰面積(a)峰高(h) tr tr掌握2021-11-714u基線（base line ）在操作條件下，檢測器中只有流動相通過時(shí)的流出曲線稱為基線。它反映了儀器的噪音隨時(shí)間的變化。nmv基線漂移掌握2021-11-715n定性參數(shù)2021-11-716n保留值n保留時(shí)間（retention time ，tr）進(jìn)樣開始到組分色譜峰頂點(diǎn)時(shí)間間隔。u死時(shí)間（dead time ，t0或tm）流動相通過色譜系統(tǒng)的時(shí)間。2021-11-717n調(diào)整保留時(shí)間（adjusted retention tim

5、e，tr）也稱為表觀保留時(shí)間、校正保留時(shí)間某組分由于溶解或被吸附于固定相，比不溶解或不被吸附的組分在柱中多停留的時(shí)間，即：ntr= tr t0，在實(shí)驗(yàn)條件一定（溫度、固定相）， tr決定組分的性質(zhì)，故tr是定性的基本參數(shù)。2021-11-718tr1tr3tr2t0tr3tr2tr1mvtime進(jìn)樣2021-11-719 保留體積（retention volume，vr），又稱洗脫體積流動相攜帶樣品進(jìn)入色譜柱，由進(jìn)樣開始到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)，通過色譜柱的流動相體積。 2021-11-720n相對保留值（1,2) 指組分（1）與參照物（2）兩者調(diào)整保留值的比值。 1,2= tr（1）/

6、 tr（2） = k1/k2 (k為分配系數(shù)）2021-11-721色譜峰的區(qū)域?qū)挾龋┦煜?021-11-722標(biāo)準(zhǔn)差為峰高0.607h 處的峰寬之半。h0.607h x2021-11-723n半峰寬也稱半腰寬，為色譜峰高之半處的峰寬。w1/2=2.355 ， w1/2易確定，且比值大，故測量誤差較小。h0.5hw1/22021-11-724n峰寬也稱基線寬度。對色譜峰兩側(cè)的拐點(diǎn)作切線,在極限上所截的距離,稱為峰寬。n對色譜峰兩側(cè)作切線后為等腰三角形，底邊為峰寬，而為等腰三角形高度之半處的寬度之半，所以 ：w=4 w2021-11-725 wh0.5h0.607hw1/22021-11-726n分配系數(shù)（partition coefficient，k ）2021-11-727n分離參數(shù)n分離參數(shù)用于衡量分離條件的優(yōu)劣，常用分離度，表示。u分離度（resolution，r）ur=u即相鄰兩峰分開的距離是平均峰寬(w1+w2)/2的幾倍。 r大, 分離效果好。 2（tr2-tr1）w1+w22021-11-7282021-11-7292021-11-730n理論板數(shù)（n）與理論板高度（h）2021-11-731n理論板數(shù)取決于：u固定相種類、性質(zhì)、填充狀況、柱長；u流動