生物化學(xué)第二章蛋白質(zhì)化學(xué)下

1、四 超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域 超二級結(jié)構(gòu)（超二級結(jié)構(gòu)（supersecondarysupersecondary structure structure）是指在多肽鏈中彼）是指在多肽鏈中彼此鄰近的二級結(jié)構(gòu)在空間折疊時相互靠近，相互作用，形成了此鄰近的二級結(jié)構(gòu)在空間折疊時相互靠近，相互作用，形成了一個有規(guī)則的二級結(jié)構(gòu)聚集體，稱為超二級結(jié)構(gòu)。一個有規(guī)則的二級結(jié)構(gòu)聚集體，稱為超二級結(jié)構(gòu)。目前發(fā)現(xiàn)的目前發(fā)現(xiàn)的超二級結(jié)構(gòu)有超二級結(jié)構(gòu)有螺旋組合（螺旋組合（）、）、折疊組合（折疊組合（）和）和螺旋螺旋折疊組合（折疊組合（），其中以），其中以組合最為常見。組合最為常見。這些超二級結(jié)構(gòu)可以直接作為組成單位參與三級結(jié)構(gòu)或

2、結(jié)構(gòu)域這些超二級結(jié)構(gòu)可以直接作為組成單位參與三級結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)域的構(gòu)建，它是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級結(jié)構(gòu)與三級結(jié)構(gòu)之間的一個過的構(gòu)建，它是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級結(jié)構(gòu)與三級結(jié)構(gòu)之間的一個過渡層次，故稱超二級結(jié)構(gòu)。也稱為基元渡層次，故稱超二級結(jié)構(gòu)。也稱為基元(motif)(motif)或基序或模體?；蚧蚧蚰ｓw。 蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)是指由若干相鄰的二級結(jié)構(gòu)單元組合在蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)是指由若干相鄰的二級結(jié)構(gòu)單元組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則在空間上能夠辨認(rèn)的二級結(jié)一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則在空間上能夠辨認(rèn)的二級結(jié)構(gòu)組合體，有三種基本組合形式構(gòu)組合體，有三種基本組合形式、。 結(jié)構(gòu)域（結(jié)構(gòu)域（structur

3、al domainstructural domain）是介于二級和三級結(jié)構(gòu)之間的一）是介于二級和三級結(jié)構(gòu)之間的一種結(jié)構(gòu)層次。是指蛋白質(zhì)種結(jié)構(gòu)層次。是指蛋白質(zhì)亞基亞基結(jié)構(gòu)中明顯分開的緊密球狀結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)中明顯分開的緊密球狀結(jié)構(gòu)區(qū)域，是蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)內(nèi)的獨(dú)立折疊單元。結(jié)構(gòu)域通常都是區(qū)域，是蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)內(nèi)的獨(dú)立折疊單元。結(jié)構(gòu)域通常都是幾個超二級結(jié)構(gòu)單元的組合。幾個超二級結(jié)構(gòu)單元的組合。 結(jié)構(gòu)域與結(jié)構(gòu)域之間常常有一段長短不等的肽鏈相連，形成所結(jié)構(gòu)域與結(jié)構(gòu)域之間常常有一段長短不等的肽鏈相連，形成所謂鉸鏈區(qū)。不同蛋白質(zhì)分子中結(jié)構(gòu)域的數(shù)目不同，同一蛋白質(zhì)謂鉸鏈區(qū)。不同蛋白質(zhì)分子中結(jié)構(gòu)域的數(shù)目不同，同一蛋白質(zhì)分

4、子中的幾個結(jié)構(gòu)域彼此相似或很不相同。常見結(jié)構(gòu)域的氨基分子中的幾個結(jié)構(gòu)域彼此相似或很不相同。常見結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基數(shù)在酸殘基數(shù)在100100400400個之間，最小的結(jié)構(gòu)域只有個之間，最小的結(jié)構(gòu)域只有40405050個氨基個氨基酸殘基，大的結(jié)構(gòu)域可超過酸殘基，大的結(jié)構(gòu)域可超過400400個氨基酸殘基。個氨基酸殘基。 結(jié)構(gòu)域一般都具有一定的功能結(jié)構(gòu)域一般都具有一定的功能 。也叫模體（。也叫模體（motifmotif）或基序）或基序-螺旋-轉(zhuǎn)角hth模體結(jié)構(gòu)示意圖螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋模體由2個螺旋和1個轉(zhuǎn)角組成。hth模體是dna結(jié)合蛋白三維結(jié)構(gòu)中的一部分，每一dna結(jié)合蛋白含一個hth模體，位于分子表

5、面。dna結(jié)合蛋白常以二聚體形式存在，兩個htg模體相距3.4nm，與dna的螺距相當(dāng)，分別結(jié)合于dna分子中相鄰的兩個深溝中。hth模體約由20個氨基酸殘基組成，第1個螺旋含7個氨基酸殘基， 轉(zhuǎn)角含4個氨基酸殘基，第2個螺旋含9個氨基酸殘基。第2個螺旋是dna識別部位，結(jié)合于dna分子的深溝中。螺旋螺旋轉(zhuǎn)角nc模體：在許多蛋白質(zhì)的分子中，常發(fā)現(xiàn)幾個（多為23個）具有二級結(jié)構(gòu)的肽段相互靠近，形成具有特定功能的空間構(gòu)象；或者僅是一個具有特定功能的很短的肽段。 模體（motif）五 球狀蛋白的三級結(jié)構(gòu) 由蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)、超二級結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)域相互連接組由蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)、超二級結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)域相互連接組合形

6、成的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)稱謂蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)。合形成的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)稱謂蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)。 具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈稱謂亞基（具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈稱謂亞基（subunit）。單個）。單個多肽鏈構(gòu)成的蛋白，具有三級結(jié)構(gòu)才能有活性。多條多肽鏈構(gòu)成的蛋白，具有三級結(jié)構(gòu)才能有活性。多條肽鏈形成蛋白，需要亞基進(jìn)一步組合才能有活性。肽鏈形成蛋白，需要亞基進(jìn)一步組合才能有活性。 親水基團(tuán)在外，疏水基團(tuán)在內(nèi)，形成疏水核心。親水基團(tuán)在外，疏水基團(tuán)在內(nèi)，形成疏水核心。維持蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵為非共價鍵氫鍵；鹽堿（離子鍵）；疏水鍵；范德華力；配位鍵；二硫鍵六 蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu) 由兩條或以上的具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈以非共價鍵形式組合

7、在一起，形成的結(jié)構(gòu)稱謂蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)。1221ncnc血紅蛋白的四級結(jié)構(gòu)成人血紅蛋白由2條鏈和2條鏈組成,各亞基分別含一個血紅素.第四節(jié) 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系自然規(guī)律：結(jié)構(gòu)決定功能，功能反應(yīng)結(jié)構(gòu)自然規(guī)律：結(jié)構(gòu)決定功能，功能反應(yīng)結(jié)構(gòu)一一 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)決定高級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)決定高級結(jié)構(gòu)二二 結(jié)構(gòu)與功能結(jié)構(gòu)與功能 一級結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu) 相似蛋白序列相似；相似蛋白序列相似； 氨基酸變異造成功能喪失。氨基酸變異造成功能喪失。空間結(jié)構(gòu)與功能空間結(jié)構(gòu)與功能 構(gòu)象與功能構(gòu)象與功能鐮刀型貧血癥：鐮刀型貧血癥： 表中九種動物之間胰島素分子一級結(jié)構(gòu)中存在的氨基酸殘基組成的差異不影響胰島素的生物活性。臨床上曾經(jīng)應(yīng)用

8、豬和牛的胰島素治療人的糖尿病，取得了顯著的療效。 胰島素分子中氨基酸殘基的差異部分來 源氨基酸殘基的差異部分a8 a9 a10 b30人 thr ser ile thr豬 the ser ile ala狗 thr ser ile ala兔 thr ser ile ser牛 ala ser val ala羊 ala gly val ala馬 thr gly ile ala抹香鯨 thr ser ile ala 鯨 ala ser thr ala 絲氨酸蛋白酶催化基團(tuán)絲氨酸周圍的固定氨基酸序列蛋白酶 催化基團(tuán)絲氨酸殘基周圍的固定氨基酸序列胰凝乳蛋白酶 ac a g a s g v s s c m

9、g d s（195）g g p l v胰蛋白酶c a g y l e g g k d s c q g d s（195）g g p v v胰彈性蛋白酶c a g g n g v r s g c q g d s（195）g g p l h凝血酶c a g y k p g e g k r g d a c e g d s（195）g g p f v凝血因子 xc a g y d t q p e d a c q g d s（195）g g p h v纖維蛋白溶酶c a g h l a g g t d s c q g d s（195）g g p l v血漿緩激肽c a g y l p g g k d t

10、c m g d s（195）g g p l i 絲氨酸蛋白酶是活性中心含有絲(或蘇)氨酸的蛋白水解酶家族。從表中可見，其活性部位絲氨酸（195）附近的氨基酸殘基序列相似。表中藍(lán)色標(biāo)記的氨基酸為同源序列。絲氨酸蛋白酶具有相似的一級結(jié)構(gòu)和相似的三級結(jié)構(gòu)。 動物體細(xì)胞色素c一級結(jié)構(gòu)的進(jìn)化樹圖中的數(shù)字表示該類動物與其祖先相比細(xì)胞色素c一級結(jié)構(gòu)氨基酸殘基的差異數(shù)真菌植物蝗蟲蒼蠅蜜蜂蛾,天蛾海星七鰓鰻角鯊昆蟲類軟骨魚類響尾蛇龜企鵝雞、火雞鴕鳥鴯鹋鳥類和與爬行類鴿鴨蚯蚓牛蛙金槍魚鯉魚兩 類硬骨魚類河馬狗、海豹、蝙蝠馬、豬、羊、牛小鼠兔人類、猩猩猴袋鼠哺乳類51371816916823922897316461

11、8161111112161354231112229 0 1 0 12 11 011 10 1 010 9 3 2 0 11 10 6 5 3 010 9 5 4 2 3 0 9 8 6 5 4 5 2 0 10 11 7 8 6 7 6 6 0 13 12 11 10 9 10 9 8 12 013 12 12 11 10 10 9 8 10 2 011 10 10 9 8 8 7 6 10 3 3 0 14 15 22 21 20 21 19 18 21 19 20 17 0 15 14 11 10 9 9 8 9 11 8 8 7 22 018 17 14 13 11 12 11 11 1

12、3 11 12 11 24 10 021 21 19 18 17 18 17 17 18 17 18 17 26 18 15 027 26 22 22 22 21 22 21 24 23 24 22 29 24 22 24 031 30 29 28 27 25 27 26 28 28 27 27 31 28 29 32 14 0人,猩猩獼猴馬驢豬、牛、羊狗小灰鯨兔袋鼠雞、火雞企鵝北京鴨響尾蛇嚙龜牛蛙金槍魚螺旋蠅蠶蛾 蠶蛾螺旋蠅金槍魚牛蛙嚙龜響尾蛇北京鴨企鵝雞，火雞袋鼠兔 小灰鯨狗豬牛羊驢馬獼猴人，猩猩人與一些動物細(xì)胞色素c一級結(jié)構(gòu)氨基酸差異的數(shù)量比較 磷酸丙糖異構(gòu)酶和丙酮酸激酶結(jié)構(gòu)域1空間構(gòu)象

13、的相似性 磷酸丙糖異構(gòu)酶催化3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮的互變，丙 酮酸激酶催化磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)移磷酸基生成atp和烯醇式 丙酮酸，但其空間結(jié)構(gòu)具有相似性，其空間結(jié)構(gòu)的中心均是由 8個-折疊組成的-折疊桶，每個-折疊又被-螺旋所分隔磷酸丙糖異構(gòu)酶丙酮酸激酶結(jié)構(gòu)域1朊病毒與蛋白質(zhì)構(gòu)象病 朊病毒蛋白（prion protein, prp）是正常存在于人體神經(jīng)原、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞的細(xì)胞膜上的糖蛋白。朊病毒（prion,prpsc）是正常朊病毒蛋白（prpc）的空間構(gòu)象由螺旋變成折疊所致。 朊病毒本身不能自我復(fù)制，但可以攻擊大腦的正常朊病毒蛋白，使之構(gòu)象改變并與其結(jié)合，形成朊病毒二聚體。此二聚

14、體現(xiàn)再攻擊正常朊病毒蛋白，形成朊病毒四聚體。周而復(fù)始，腦組織中朊病毒不斷積蓄，造成腦組織發(fā)生退行性病變。 正常朊病毒蛋白與朊病毒空間結(jié)構(gòu)的差異 朊病毒（prpsc）是蛋白質(zhì)，不含核酸。它是正常朊病毒蛋白（prpc）的空間構(gòu)象由-螺旋變成-片層結(jié)構(gòu)所致。因此，這類疾病又稱蛋白質(zhì)構(gòu)象病。朊病毒本身不能復(fù)制，但它卻可以攻擊大腦的正常朊病毒蛋白，使其發(fā)生構(gòu)象改變，并與其結(jié)合，成為致病的朊病毒二聚體。此二聚體再攻擊正常的朊病毒蛋白。這樣，腦組織中的朊病毒不斷積蓄，造成腦組織發(fā)生退行性變。 正常朊病毒蛋白結(jié)構(gòu) （顯示-螺旋） 朊病毒結(jié)構(gòu)（顯示-片層結(jié)構(gòu)）具體幾種蛋白的功能胰島素（insulin）血紅蛋白（

15、hemoglobin）免疫球蛋白（immunoglobulin）膜蛋白結(jié)構(gòu)前蛋白原的活化 人胰島素的一級結(jié)構(gòu)胰島素由a、b兩條多肽鏈組成，a鏈含21個氨基酸殘基，b鏈含30個氨基酸殘基。a鏈內(nèi)有一個鏈內(nèi)二硫鍵，a與b之間有兩個鏈間二硫鍵。由于兩條鏈之間由共價鍵相連接，所以胰島素沒有四級結(jié)構(gòu)。serglyilevalgluglncyscysthrilecysserleutyrglnleugluasntyrcysasnphevalasnglnhisleucysglyserhisleuvalglualaleutyrleuvalcysglyglygluargphephetyrthrprolysthrn

16、h215101520cooha鏈nh2151015202530hoocb鏈胞外區(qū)胞外區(qū)跨膜區(qū)跨膜區(qū)胞內(nèi)區(qū)胞內(nèi)區(qū)第五節(jié) 蛋白質(zhì)性質(zhì)一一 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)膠體性質(zhì) 親水膠體親水膠體(1-100nm的的)粒子，具有膠體溶液性質(zhì)（真粒子，具有膠體溶液性質(zhì)（真溶液）溶液） 丁達(dá)爾現(xiàn)象；布朗運(yùn)動；不透過半透膜；穩(wěn)定膠體溶丁達(dá)爾現(xiàn)象；布朗運(yùn)動；不透過半透膜；穩(wěn)定膠體溶液（真溶液）。液（真溶液）。透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋通過透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，大分子量的蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)通過透析被分離除去。形成穩(wěn)定膠體溶液的

17、因素：水化膜和同性電荷蛋白質(zhì)所帶電荷和其周圍包繞的水化膜是維持蛋白質(zhì)在水溶液中穩(wěn)定的兩大因素。脫水和中和電荷可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)的沉淀。水化膜正電荷+h+oh-oh-oh-h+h+脫水脫水脫水蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時的親水膠體帶負(fù)電荷的親水膠體蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)帶正電荷的親水膠體帶正電荷的疏水膠體不帶電的疏水膠體 （極易沉淀）帶負(fù)電的疏水膠體負(fù)電荷二 兩性解離和等電點(diǎn)piphph 三 蛋白質(zhì)變性作用和復(fù)性 牛胰核糖核酸酶分子的變性與復(fù)性變性是指蛋白質(zhì)在一些理化因素的作用下，其正常的空間構(gòu)象遭到破壞，主要是次級鍵或二硫鍵發(fā)生破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)的改變（如溶解度下降、粘度增加）和生物學(xué)活性的喪

18、失。蛋白質(zhì)的變性不影響其一級結(jié)構(gòu)。 12684726511058124126hs9540hs40sh58sh72hshs84sh95110sh1241264058657284951101248mol/l 尿素 -巰基乙醇透析除去尿素和 -巰基乙醇除去 -巰基乙醇天然rnase變性失活的rnase“ 錯亂” rnase除去尿素痕量 -巰基乙醇三三 蛋白質(zhì)變性作用和復(fù)性蛋白質(zhì)變性作用和復(fù)性變性物理因素：加熱、紫外線照射、超聲、劇烈震蕩等化學(xué)因素：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、重金屬鹽等沉淀改變ph至pi破壞水溶液中蛋白質(zhì)的水化膜和中和電荷（變性蛋白質(zhì)）（蛋白質(zhì)未變性）凝固加熱加熱（變性，不再溶解）變性不一

19、定沉淀沉淀不一定變性凝固均變性并不溶解加熱加熱蛋白質(zhì)變性（蛋白質(zhì)變性（denaturation）蛋白質(zhì)復(fù)性（蛋白質(zhì)復(fù)性（renaturation)四四 蛋白質(zhì)沉淀（蛋白質(zhì)沉淀（sedimentation）作用）作用precipitation（沉淀）；（沉淀）； aggregation（凝集）（凝集）1 中性鹽法中性鹽法 鹽析（鹽析（salting-out）；分段鹽析（）；分段鹽析（grading salting-out） 重金屬鹽重金屬鹽2 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 乙醇；丙酮乙醇；丙酮3 生物堿生物堿 單寧酸；苦味酸單寧酸；苦味酸4 有機(jī)酸有機(jī)酸 三氯乙酸三氯乙酸第六節(jié) 蛋白質(zhì)分離純化與測定一一 一

20、般原則步驟一般原則步驟材料獲得與破碎（機(jī)械、滲透、凍融、超聲和酶解等）材料獲得與破碎（機(jī)械、滲透、凍融、超聲和酶解等）蛋白抽提蛋白抽提蛋白粗體（沉淀）蛋白粗體（沉淀）蛋白質(zhì)分離（精純化）蛋白質(zhì)分離（精純化）測定：濃度；純度；分子量；性質(zhì)功能鑒定等測定：濃度；純度；分子量；性質(zhì)功能鑒定等 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與常用的純化方法 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 常用的純化方法分子質(zhì)量 離心 凝膠過濾 透析、超濾電荷 離子交換層析 電泳 等電聚焦溶解度 調(diào)整 ph 調(diào)整離子強(qiáng)度 降低介電常數(shù)特異結(jié)合部位 親和層析 親和洗脫其他性質(zhì) 吸附層析 液相層析 氣相層析二二 蛋白質(zhì)的提取與純化原理蛋白質(zhì)的提取與純化原理（一）改變

21、蛋白質(zhì)的溶解度鹽析： 高濃度中性鹽使蛋白質(zhì)從溶液中析出有機(jī)溶劑沉淀： 降低溶液的介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子間 相互吸引而沉淀（二）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分離方法離心(centrifugation)： 利用機(jī)械的快速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，將不同密 度的物質(zhì)進(jìn)行分離 根據(jù)轉(zhuǎn)速分類：常用離心機(jī) 50 000 rpm 相對離心力（g）= 1.119 105 （rpm）2 r 根據(jù)應(yīng)用分類：分析型離心機(jī) 制備型離心機(jī)g: gravity, rpm: revolution per minut, r: 離心半徑勻漿沉淀上清1 000g,5min上清上清上清上清沉淀沉淀沉淀沉淀沉淀4 000g,10min15 0

22、00g,20min30 000g,30min100 000g,90min100 000g,180min（未破壞的 真核細(xì)胞）（細(xì)胞膜碎片，細(xì)胞核）（線粒體， 細(xì)菌）（溶酶體， 菌體碎片）（微粒體）（核糖核蛋白體）胞液 亞細(xì)胞成分的差速離心分離差速離心法是沉降速度離心的一種，采用離心力由小到大的分階段離心的辦法，將密度不同的物質(zhì)分步驟地逐一分離開來。亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分離就是其中最好的例子。差速離心法 幾種蛋白質(zhì)的分子量與沉降系數(shù)的關(guān)系 蛋白質(zhì)分子 分子量沉降系數(shù)（s） 核糖核酸酶 12 900185 細(xì)胞色素 c 15 600190 肌紅蛋白 17 200204 胃蛋白酶 37 00033 -乳球蛋

23、白 41 500312 卵白蛋白 44 000355 馬血紅蛋白 68 000441 人血清白蛋白 69 00046 血纖維蛋白原 330 00079 脲酶 480 000186 豬甲狀腺球蛋白 630 000192s =dxdt在單位力場下，溶質(zhì)分子的沉降速度與離心角速度、離心半徑呈正比，其比例常數(shù)為沉降系數(shù)，用s表示，單位為秒。= s 2 一般蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)為10131012秒，故人們以svedberg(s)單位來表示沉降系數(shù)，即1s = 1013秒。沉降系數(shù)的大小與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān)。透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋通過透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，

24、大分子量的蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)通過透析被分離除去。超濾（ultrafiltration）: 在一定的壓力下，使蛋白質(zhì)溶液在通過一定孔徑的超濾膜時，小分子量物質(zhì)濾過，而大分子量的蛋白質(zhì)被截留，從而達(dá)到分離純化的目的。這種方法既可以純化蛋白質(zhì)，又可達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。 磁力攪拌器待超濾的蛋白質(zhì)溶液加壓的氮?dú)獬瑸V膜凝膠過濾（gel filtration）： 凝膠過濾又稱分子篩層析，在層析柱內(nèi)填充惰性的微孔膠粒（如交聯(lián)葡聚糖），將蛋白質(zhì)溶液加入柱上部后，小分子物質(zhì)通過膠粒的微孔進(jìn)入膠粒，向下流動的路徑加長，移動緩慢；大分子物質(zhì)不能或很難進(jìn)入膠粒內(nèi)部，通過膠粒間的空隙向下流動，其流動的路徑短，移動速度較快，從而達(dá)到按不同分子量將溶液中各組分分開的目的 洗脫液膠粒樣品小分子大分子蛋白濃度洗脫體積各試管進(jìn)行連續(xù)收集試管走行方向 凝膠過濾分離蛋白質(zhì)示意圖凝膠過濾洗脫洗脫洗脫樣品凝膠顆粒大分子先洗脫下來小分子后洗脫下來 凝膠過濾分離蛋白質(zhì)示意圖根據(jù)各種蛋白質(zhì)在一定的ph環(huán)境下所帶電荷種類與數(shù)量不同的特點(diǎn)，將不同蛋白質(zhì)予以分離。常用的方法有：離子交換層析電泳等電聚焦。 （三）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷性質(zhì)的分離方法低鹽濃度 洗脫液高鹽濃度 洗