根際微生物群落及促生菌多樣性及其篩選策略

1、根際微生物群落及促生菌多樣性及其篩選策略摘要：根際是地球上最大的生態(tài)系統(tǒng)，在生物圈功能中發(fā) 揮著非常顯著的作用，微生物和植物在根際環(huán)境中形成的復(fù) 雜網(wǎng)絡(luò)式關(guān)系會直接或間接地影響植物生長，深入了解并利 用這種互作關(guān)系對于提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)出投入比以及篩選獲得更 髙效、廣適的促生菌尤為必要。綜述了根際微生物群落與促 生菌多樣性以及篩選策略，分析了研究中尚存在的一些問 題，并對今后的研究進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞：植物根際促生菌(pgpr)；微生物群落;根際生態(tài)；多樣性；篩選中圖分類號：q 9 3 99 6文獻(xiàn)標(biāo)識碼：a文章編號：0439- 8 114 ( 2 0 12) 24 5553-061 9 0 4年，德國

2、農(nóng)學(xué)家h i 1 t n e r發(fā)現(xiàn)豆科植物根附近區(qū)域的土壤微生物，由于受到根系分泌有機(jī)物質(zhì)對其 產(chǎn)生的“效應(yīng)”，表現(xiàn)出相對更高活性的現(xiàn)象，并首次提出“根際” (rhizosphere)這一概念1 ?，F(xiàn)在我們知道，這種“效應(yīng)”其實(shí)是根際微生態(tài)系統(tǒng)中的根際效應(yīng)。單棵植物根際范圍雖小，但放眼看，根際卻是地球上最大的生態(tài)系統(tǒng)，其能量流也極其巨大，因而，根際在生物 圈功能中的作用非常顯著。曾有研究人員估算，植物2 0%5 0 %的光合產(chǎn)物是通過根部釋放出來的2 , 3 o 根際土壤中存在大量的宏觀生物和微生物，如細(xì)菌、真 菌、原生動物和藻類生物等，細(xì)菌是該群體中數(shù)量最多的一 類微生物。微生物和植物在根

3、際環(huán)境中形成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)式關(guān) 系會直接和間接地影響植物生長；反過來，植物通過分泌有 機(jī)物，構(gòu)建起一個有選擇性的環(huán)境條件，以利于對其生長有 益的細(xì)菌，導(dǎo)致根際細(xì)菌多樣性偏低4, 5 o植物根際 促生菌(pl ant g rowt h p romo t i n g r h i z o b a c teria, p g p r)在根際微生物群 體中研究最為熱門，也是對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)最具有應(yīng)用價(jià)值的一類 微生物。由于p g p r數(shù)量眾多，且在根際定殖時(shí)具有競爭 力，加之其作用機(jī)制的多樣性，因此能在很大程度上影響植 物生長。然而，人們在使用pgpr或相關(guān)制劑時(shí)，普遍發(fā) 現(xiàn)大田應(yīng)用效果遠(yuǎn)不及盆栽或溫室條件下的效

4、果理想，主要 原因是pgpr對“陌生”環(huán)境的不適應(yīng)。根際微生物是野 外環(huán)境中的主要“陌生”因素，因此，了解與某些基本生態(tài) 過程，如復(fù)雜性、自然選擇、種間關(guān)系(共生、寄生、共棲 和競爭)、演替或擾動效應(yīng)有密切關(guān)系的根際微生物群落結(jié) 構(gòu)和多樣性，可以幫助人們更好地理解根際生態(tài)系統(tǒng)，并為 pgpr的篩選和高效利用提供理論依據(jù)?；诖?，本文主 要從根際微生物群落多樣性、pgpr生態(tài)和遺傳多樣性以 及p g p r的篩選策略等3個方面進(jìn)行綜述。1根際微生物群落多樣性微生物多樣性包括物種、遺傳與變異以及功能多樣性 6。在根際系統(tǒng)中，細(xì)菌群落的功能多樣性是基于其遺 傳變異以及和其他原核、真核生物（如植物）的

5、互作關(guān)系。 直至現(xiàn)在，根際微生物多樣性與根際微生物功能之間的關(guān)系 仍不十分清楚。根際微生物多樣性信息的缺乏，其原因一是 其種類繁多，二是絕大多數(shù)微生物的不可培養(yǎng)性。1 . 1根際微生物群落結(jié)構(gòu)的研究方法研究微生物群落結(jié)構(gòu)，就必須了解各類群微生物群體的 種類及數(shù)量。傳統(tǒng)技術(shù)是通過從根際土壤中提取、分離微生 物，實(shí)驗(yàn)室條件下對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生化和遺傳學(xué)檢驗(yàn)。由 于細(xì)菌往往和土壤基質(zhì)以及其他細(xì)胞緊密附著，因此在細(xì)菌 提取中常用到分散劑，即用物理或化學(xué)方法將細(xì)胞和基質(zhì)區(qū) 分開，之后才能對分離細(xì)菌生物量進(jìn)行測定。微生物生物量的測定常用方法有：顯微鏡下直接計(jì)數(shù) （如唳橙染料染色）7、微生物呼吸量測定（如基

6、質(zhì)誘 導(dǎo)呼吸量，subs t rate induced res p i r a t i o n , sir）8、at p 含量測定9 、 最大或然法（most probable n u m b e r , mpn）計(jì)數(shù)10,使用脂類生物標(biāo)志物11 以及氯仿土壤熏蒸法12等。但是，土壤中可培養(yǎng)微生 物比例畢竟極低。有研究者曾估算這一比例只有不足1. 0%(02 %08 %) 1 3 。正因?yàn)槿绱?，基于平板?養(yǎng)法研究土壤微生物多樣性存在重大缺陷，免培養(yǎng)技術(shù)順應(yīng) 而生。所涉及的技術(shù)包括磷脂脂肪酸(p h o s p h o 1 i p i d fatty acid analysis, pl fa)

7、分析法14 16、dna / rn a 雜交17、 聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain r e action, pcr)、核糖體 rn a 測序1 8 、(g + c )含量1 9、溫度梯度凝膠電泳(tempe r a t u r e gradient g e 1 electro p h o r e s i s , tgge)和變性梯度凝膠電泳(d enaturing gradient g e 1 e 1 ectrophoresis, dgge)、限制片段長度 多態(tài)性(restrict ion f ragment 1 e n g t h polymorphism, r f l p

8、) 2 0 , 2 1、d n a 微陣列(dna m i c r o a r r a y ) 2 2 技術(shù)(又稱“dna陣列”或“ dna芯片”)、 克隆文庫分析等方法。過去2 0多年間，人們利用這些技術(shù) 手段揭示了很多有關(guān)土壤微生物群落的信息2 3。這些 方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，正確選擇合適的方法進(jìn)行研究，有助于更 準(zhǔn)確地了解根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)特征。12根際微生物活性和功能多樣性的研究方法及根際p g p r活性研究根際微生物活性的經(jīng)典方法，是將細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)、 分離并作理化試驗(yàn)。另一個方法是利用細(xì)菌在不同培養(yǎng)基上 的生長速率來表征該菌在環(huán)境中的生理特性、養(yǎng)分利用特點(diǎn) 和自適應(yīng)策略24。目前，人

9、們廣泛采用某一關(guān)鍵酶活性的測定來表征某類 群微生物的多樣性和代謝活性。此外，b i o 1 o g體系也 是應(yīng)用較為廣泛的方法之一 16, 2 5 o另外，通過克 隆構(gòu)建大片段dn a文庫（如b a c library）, 有助于更準(zhǔn)確地揭示土壤中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)微生物，以及 土壤微生物生態(tài)系統(tǒng)的相關(guān)信息2 2。未來土壤微生物 群落結(jié)構(gòu)的研究無疑會大量運(yùn)用d n a微陣列技術(shù)22, 因?yàn)樵摷夹g(shù)可以利用其高特異性特點(diǎn)，將不同活性微生物區(qū) 分開，并有助于解釋同一菌株在不同環(huán)境土壤樣本中的生態(tài) 位的異同。當(dāng)然，基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)也是未來微 生物學(xué)研究中不可或缺的輔助手段 2 2,2 6 。

10、根 際微生物多樣性反映了微生物群落的代謝活躍程度。在土壤 中接種p g p r,只要能存活，無論是否改變微生物群落結(jié) 構(gòu)，都會在一定程度上影響群落的代謝活性15。因此, 接種p g p r是否能在土壤中存活并競爭是一個十分關(guān)鍵 的問題，受物理的（質(zhì)地、溫度和濕度等）、化學(xué)的（ph、 養(yǎng)分的可利用性、有機(jī)質(zhì)含量等）以及和根際其他微生物之 間的互作關(guān)系等因素的影響。其中，pgpr與根際土著微 生物的互作關(guān)系是一個十分重要的影響因子，因?yàn)榻臃Npg pr需要在根際形成新的生態(tài)位，并在根際定殖，且能競爭 足夠的養(yǎng)分?？傊?，接種pgpr后，要能以有限的群體發(fā) 揮應(yīng)有的生物效應(yīng)。目前，人們可借助多種技術(shù)研究

11、根際土壤微生物活性， 比如前面介紹過的同位素(3h、1 4 c )標(biāo)記dna的胸 腺喀噪核昔或蛋白質(zhì)的亮氨酸組分，來估算群落代謝活性和 生長狀況7 , 2 7 o此外，還可以用s i r技術(shù)定量測 定根際微生物活性8 。2 p g p r生態(tài)及遺傳多樣性近些年來，由于人們愈加深刻地認(rèn)識到根際生態(tài)系統(tǒng)的 重要性，加之p g p r作用機(jī)制研究的不斷深入2 8, 越來越多的pgpr被篩選出來并加以鑒定。從結(jié)果看，很 多屬都有pgpr的分布。下面以目前pgpr相對集中的 幾個屬來闡述其生態(tài)特征和多樣性。2 . 1 固氮 pgpr(di azot rophi c p g p r)自生固氮菌大概是首個被

12、發(fā)現(xiàn)具有促生作用的根際微 生物。自2 0世紀(jì)7 0年代，固氮螺菌屬(a z o s p i r i 1 1 u m s p .)的菌株就已被分離出并應(yīng)用于實(shí)踐2 9 o其他還有能起促生作用且能自生固氮的屬種主要有固 氮弓菌屬(azoarcus, azonexus, azos p i r a ) 3 0 布克氏菌屬(burkho 1 d e ri a s p)、重氮營養(yǎng)葡糖酸醋桿菌(gluconac etobacter diazotrophicus)> 草螺菌屬(herbaspi r i 1 1 u m sp)、固氮 菌屬(az o t o b a c t e r s p.)和多黏類芽砲桿

13、 菌(p a e n i b a c i 1 1 u s p o 1 y m y x a )等 31。上述這些細(xì)菌可以從許多種類植物，包括水稻、 甘蔗、玉米、高粱以及其他谷物，甚至菠蘿、咖啡豆的根際 分離到。最近，固氮弓菌因其遺傳和代謝多樣性而逐步引起研究 者的關(guān)注。該屬細(xì)菌能生長在以竣酸類或乙醇為碳源的培養(yǎng) 基上，而且最適生長溫度在3 74 2 °co2 2 桿菌(b a c i 1 1 u s )土壤中的g+桿菌有9 5 %屬于芽砲桿菌屬(b a c i1 1 u s sp)，其余5%屬于節(jié)桿菌(art h r o b a c t e r )和弗蘭克氏菌(f rank i a )

14、 3 2 o許 多桿菌能在逆境下形成芽胞以增強(qiáng)生存能力，一些桿菌如枯 草芽胞桿菌(bacillus subtilis)還具 有固氮能力3 3。桿菌類的p g p r具備多種促生能力 1 4, 3 4 , 3 5 o23假單胞菌(ps eudomona s )在植物根際土壤g細(xì)菌中，假單胞菌是數(shù)量最多的一 類，該屬中的pg p r也因?yàn)榇偕芰V泛而被人們所熟知 1 4, 3 6 , 3 7 o假單胞菌屬細(xì)菌生態(tài)多樣性豐富， 國內(nèi)外已經(jīng)從許多植物根際土壤中分離出大量該屬的細(xì)菌。 假單胞菌細(xì)菌往往代謝功能多樣，可以產(chǎn)生抗生素、嗜鐵素 或氧類化合物等多種代謝物3 8。這些代謝物通過抑制 其他有害微生

15、物以及幫助植物吸收土壤養(yǎng)分，從而影響根際 生態(tài)環(huán)境。2 . 4 根瘤菌(rh i z o b i a )這里提及的根瘤菌是指能在非豆科植物根際進(jìn)行非特 異性定殖，并釋放促生調(diào)控因子，如嗜鐵素、氧類化合物或 進(jìn)行溶磷等作用，提高土壤養(yǎng)分的可利用性3 9。已有 報(bào)道指出，在作物和一些非豆科植物輪作后，其根際微生物 數(shù)量會大幅增加4 0 ,這對隨后的作物生長十分有益4 1 o3 p g p r篩選策略由于野外植物根際土壤是pgpr高密度集中地，因此 該區(qū)域成為篩選p g p r的最佳來源地。進(jìn)行篩選工作時(shí)， 不同土壤類型、植物種類、季節(jié)以及植物生長期都必須考慮, 以保證篩選到最多的菌株。且一般土壤根

16、際有2 %5 %的 細(xì)菌屬于p g p ro由此可見，野外植物根際是篩選pgp r的最佳來源地4, 4 2。細(xì)菌成為p g p r的先決條 件是，當(dāng)被接種后，能在根際土壤微生物群體中表現(xiàn)出相當(dāng) 的競爭力。篩選pgpr的第一步工作，是獲得足夠多的根際土壤 細(xì)菌。通常認(rèn)為根際土壤是指緊密附著在植物根表（13 mm區(qū)域）的土壤。試驗(yàn)中，通常將植物根表土壤劇烈抖掉 后，仍緊密附著的土壤作為根際土壤，用于篩選工作。當(dāng)然, 根據(jù)研究需要，除了根際土壤細(xì)菌，也可篩選根際內(nèi)生細(xì)菌, 因?yàn)檫@部分細(xì)菌也有不少是pgpro也有一些研究者將植 物根用自來水輕柔沖洗，仍附著的土壤被看作根際土壤而進(jìn) 行p g p r篩選

17、。根際土壤充分懸浮于無菌水、磷酸緩沖液或生理鹽水。 一些化合物如焦磷酸鹽可作為土壤分散劑，但也可以影響細(xì) 胞膜的通透性43。一些化學(xué)分散劑，如螯合劑可以用 單價(jià)的陽離子（n a +）交換土壤顆粒的多價(jià)陽離子（c a 2 +）,從而減弱土壤顆粒對細(xì)菌細(xì)胞的離子吸附作用。不 少研究者用亞氨基二乙酸制成的離子交換樹脂，如d o w e x a 1 44或 chelex-100 45, 46 0 其他的一些分散劑有t r i s緩沖液或六偏磷酸鈉4 7。 由于微生物細(xì)胞被其胞外聚合物緊密附著于土壤顆粒，有時(shí) 也會使用去污劑。macdona ld4 4曾用0. 1% 的脫氧膽酸鈉作為去污劑，同時(shí)用d o

18、 w e x al作分散 劑處理，土壤微生物的浸出率可提高8 4 %o后來，h e r 011等45將此方法作了改進(jìn)，用che 1 e x 100替代d o w e x a 1 ,同時(shí)用聚乙二醇60 0 0(peg 6000)溶解并分散土壤微生物。還有人在用口丫噪橙染色計(jì)數(shù)土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí)，用0. 2 %的六偏磷酸 鈉作為溶劑10。此外，檸檬酸鹽緩沖劑作土壤溶劑研 究微生物細(xì)胞膜磷脂特性48, w i n o g r a d s k y溶液用于分子生物學(xué)手段(ard ra. d gg e或re p-p c r等)研究微生物多樣性?；瘜W(xué)浸出法一般要結(jié)合物理法，可分為3類：搖蕩法、混合法(均質(zhì)或研磨

19、) 和超聲波法。搖蕩法是這3種方法中效率最低但卻適用于一 些敏感型的細(xì)菌或噬菌體。均質(zhì)化處理會破壞一些細(xì)胞結(jié) 構(gòu)，特別是g 細(xì)菌，導(dǎo)致浸出液具有選擇性。輕微均質(zhì)化 處理結(jié)合化學(xué)分散劑的使用往往具有更高的效率4 9。 超聲波處理是這3種方法中效率最髙的方法，但對一些黏性 土壤，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理50。然而，很多如g 的敏感型細(xì)菌會在處理過程中遭到不同程度的破壞，當(dāng)然， 選擇較小頻率的超聲波處理可以避免這一情況的發(fā)生。當(dāng)獲得足夠多的根際細(xì)菌后，有如下兩個策略可以篩選到所需的pgpr：根據(jù)前文介紹的pgpr-般比較集 中的幾個屬，通過選擇性培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法篩選目標(biāo)pgpr o例如，founoune

20、等5 1 用選擇性培養(yǎng)基將熒光假單胞菌(pseudomonas f 1 u o r e s c e n s )從刺槐根際篩選出來；將所得到的根際細(xì)菌進(jìn) 行體外促生能力測定，保留具有促生潛力的菌株。然后對所 得菌株進(jìn)行遺傳學(xué)試驗(yàn)，剔除同一屬里相似的一些菌株，盡 可能獲得多個屬里不同功能的有益菌4 2, 5 2 , 5 3 o 上述的體外促生能力試驗(yàn)包括：測定促進(jìn)植物生長的 一些激素（如茁長素、赤霉素、細(xì)胞分裂素和生長素等）； 1一氨基環(huán)丙烷一 1 一竣酸脫氨酶（ac c脫氨酶，1一 am inocyc 1 opropanecarboxyl i c acid）活性檢測，該酶能降解乙烯前體acc,從

21、 而降低植株體內(nèi)乙烯的水平，促進(jìn)根系發(fā)育5 4；溶 磷能力測試，細(xì)菌的溶磷能力有助于植物吸收磷素5 5； 產(chǎn)嗜鐵素能力測定，能幫助植物吸收鐵質(zhì)5 6；固 氮能力測定3 1；測定細(xì)菌產(chǎn)生某些能降解病原真菌 細(xì)胞壁的酶（如幾丁質(zhì)酶或b 1 , 3葡聚糖酶）5 2 o通過體外促生能力篩選pgpr是一條可行途徑，但也 存在一定局限性。一些菌株的生化途徑是誘導(dǎo)型的，也就是 說，一些功能在某一環(huán)境條件下是表達(dá)的，但換個環(huán)境或改 變某個培養(yǎng)條件就不表達(dá)了。因此，試驗(yàn)中往往會出現(xiàn)一些 pgpr菌株在實(shí)驗(yàn)室條件下是有效的，但在根際條件下卻 失去這種作用。比如，一些與土壤磷素或鐵質(zhì)等養(yǎng)分相關(guān)的 pgpr，往往在土

22、壤磷素或鐵質(zhì)含量豐富的情況下作用不 明顯。還有一個問題值得關(guān)注，一些具有抗病能力的細(xì)菌在傳 代過程中，由于該菌產(chǎn)生的特異性轉(zhuǎn)化酶(si t e s p e c i f i c i n v e r t a s e)容易使其發(fā)生“相位 變異"(pha s e v a r i a t i on),當(dāng)發(fā)生這種 情況后，細(xì)菌的某些表型會發(fā)生重大變化。這也是一些細(xì)菌 在實(shí)驗(yàn)室條件下表現(xiàn)出pgpr特性，但一段時(shí)間后，促生 能力卻消失的原因之一 57。篩選工作之后，對體外試驗(yàn)獲得成功的pgpr菌株還 應(yīng)該在實(shí)際植物生長過程中起到相同的作用。值得注意的 是，pgpr往往對不同的植物所起作用不同58,但

23、 具體原因至今仍不清楚，此外pgpr在根際的競爭機(jī)制也 不十分明了。接種pgpr可能會改變根際微生物群落，這 有可能對植物間接促生5 9。當(dāng)然，接種pgpr也不 一定會改變根際微生物群落，也有可能只建立自身的群落， 但并不改變根際微生物群落59。最近的一些關(guān)于pgpr篩選的報(bào)道，都遵循上述策 略。kumar等】6 0從生長在貧瘠土壤的番茄根際分 離出細(xì)菌，再通過解磷、產(chǎn)iaa、產(chǎn)hcn、產(chǎn)嗜鐵素、 幾丁質(zhì)酶和b 1 , 3 葡聚糖酶活性測定，確定多株細(xì)菌 具有促生潛力，并在隨后的芝麻種植中進(jìn)一步試驗(yàn)，確立1 株細(xì)菌(pseudomonas aeruginosa l e s 4)具有明顯促生能力

24、；j h a等6 1 采集低氮 土壤的水稻根際土壤，用不同碳源和不同ph的無氮介質(zhì)進(jìn) 行富集培養(yǎng)，從中篩選出多株固氮細(xì)菌；a h m a d等6 2 則采用3種選擇性培養(yǎng)基(jensen' s med i u m, king's b med i u m, n u t r i e n t agar)分別將不同植物根際土壤的固氮菌、 假單胞菌和芽胞桿菌分離出來，再通過上述常用的促生指標(biāo) 逐一進(jìn)行鑒定，從而分離出目標(biāo)pgpro4展望研究者對微生物生態(tài)學(xué)的研究逐漸趨熱，反映了微生物 在生態(tài)系統(tǒng)中的重要性。土壤微生物是生物圈中物質(zhì)能量循 環(huán)的重要組成成分，在植物根際，這一功能尤為顯著。植

25、物 通過根際分泌有機(jī)物質(zhì)，高選擇性地選擇適合其健康生長的 細(xì)菌，導(dǎo)致根際細(xì)菌多樣性減少，但卻為篩選植物根際促生 菌提供了可靠來源。接種pgpr可能會對根際微生物群落產(chǎn)生影響，由于 這種影響關(guān)系到pgpr的作用效果，因而需要對此詳加研 究。另外值得關(guān)注的是，由于關(guān)系到pgpr和植物的互作 關(guān)系，pgpr和其他微生物的''對話機(jī)制”(如群體感應(yīng) 等)值得進(jìn)一步研究。今后需要進(jìn)一步加強(qiáng)根際微生物生態(tài)學(xué)研究，這有助于 獲得一些不同功能的微生物，并幫助人們解決不同的環(huán)境問 題。未來pgpr生態(tài)學(xué)研究會越來越多地應(yīng)用一些先進(jìn)技 術(shù)，如dna/rna微陣列技術(shù)，更好地揭示pgpr結(jié)構(gòu)及功能多

26、樣性。此外，為提髙pgpr的應(yīng)用效果，細(xì)菌 群體感應(yīng)等機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn):1 hi l t n e r l b e r n e u e rerf ahrungen u n d prob 1 e m eu f dem g e b i e t e d e r b o d e n bkteriologie u n t e r b e s o n dr e r berliksichtigung d e r gti n dti n g u n g u n d b r a c h ej aten d e r deut s c h e nt s c h a f t gesel 1 scha9 0

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30、 6 ( 9 )： 110 1-110 8 7 b?約？約th a e, arnebran t a k growth rate and r e s p o n s e o f bacterial c o m m u n i ties t o p h i n limed and a s h treated forest soils j soil biology and b i o c h e m i s t r y , 1 9 9 4, 2 6 ( 8 )： 995 10 0 18 anderson j pe, d oms c h k h. a physiological m e t h o d

31、 for the q u a n titative measurement o f microbial biomass i n s o i 1 s j soil b i o 1 o g y and biochemistry, 1 9 7 8 , 1 0 ( 3 )： 2 15-221 9 eiland f. a simple m e t h o d for quant i tat ive d e termination o f atp i n s o i1 5 ( 6 )： 6 6 5 6j soil biology and b i oh e m i s t r y ,1 9 8 3,10 r

32、eichardt w,a, d e jesus r,r ob ia 1p o p u 1ne xp er i m e n tm sja p p 1 i eat10nsh1ftsa1r1c esystds011ec010e t a 1 m iy ,2 0 0 1, 1 7 ( 2 )： 15 1-16 3 11 hopkins d w, ma c nauh t o n a s j ,o'donnell aa dispersion andn t i a 1 n i q u e ycentforr i f u g a t irepresens a m p 1 i n gfrom y andm

33、 isoil j .b i o c h e m id1ffer0ntectat1vegan1smb1010199192c r o o rsoils t r y ,(3 )： 2 1 7 - 2 2 5 12 v an c e e d,brookesac,j enk i n s 0 n d sa n extact ion methodfor m e a s u rn g soil microbials cj soil biology and b iochemistry, 1 9 8 7,1 9 ( 6 )： 703-7 0 7 13 bakken l r, olsen r a. d n a c

34、o nt ent o f soil b a c t e r i a o f different cell s i z e j soil biology and b iochemistry, 1 9 8 9, 2 1 ( 6 )： 789 - 7 9 3 14 garcia jal, d omen e c h j , santamar i a c , e t a 1. growth o f forest plants (pine and holm-oak) i n o c u 1 a t e d with rhizobacteria： r e 1 a tio nship with m i c r

35、 o b i a 1 community structure and biological activity o f i t s rhizosphere j e n v i r o n m e n t a 1 and experimental b o t a n y , 2 0 0 4, 5 2 ( 3 )： 2 3 9 - 2 5 1 15 ramos b, garc?籬a j a l, probanza a,e t al a 1 t erat ions i n the rhizobacte rial communi ty associated with european alder gro

36、wth when inoculated with p g p r st rain b a c i 1 1 u s 1 i c h e n i f o r mis j environmental and e xperimental bo t any, 2 0 0 3, 4 9 (1 ): 6 1-68 16 grayston sj, griffith g s, mawdsleyl,a c c o u nting f oabilitytempuplande m s j .soiliochemistry,2 0 0 1,3 3(4-5 )：17 griffs , ritzk, e b b l e w

37、h i t en, e1 microbialsubfee tloadrats j .strand9 8 , 3 0 ( 1 )： 1 4 5 - 1 5 3 18 l i e s a c k w, stackebran d t e.occurrence o f n o v etedfroms revmatgeneresjl.journal o f b a c t e r i o 1g y ,1 9 9 2,1 7 4 ( 1 5 )： 5072-5078 19 clegg c d, ritz k, gr i f f i t h s b s broad-scale analysis o fsoi

38、l m i c r o b i a1 community d n a from u p 1 a n d grass landsj antonie v a n leeuwenhoek, 1 9 9 8, 7 3 ( 1 )： 9 1 4 20 dunbar j, takala s, barns s m, e t al. level s o f bacterial community d i v e r s i t y i n four arid soils compared b y cultivation an d 1 6 s r r n agene cloningj a p p 1 i e d

39、 and env i ronme n t a 1 microbiology, 1 9 9 9, 6 5(4 )： 1 6 6 2 - 1 6 6 9 21 l i u w t, mar s h t l,cheng h, e tal. characteriz a t ion o f microbialdivers i t y b y determining t e r m i n a 1 restriction f ragment 1 e n g th polymorphisms o f g n t a 1 mi c rob i o 1 ogy, 1 997, 63(1 1 )： 4516-45

40、22 e n e s encoding1 6 s r r n aja p p 1 i e d andenv i ronme22 0 g r a m a. soil m o 1 e c u 1 a r microbial ecology a t age 2 0 :methodological c h a1 1 e n g e s for the future j soil biology and b i o c h e m i s try, 2 0 0 0, 3 2 ( 1 1 1 2 )：1 49 9 - 1 5 0 4 23 head i m, saunders jr, pickup r w

41、. microbialvolution, divers i t y , and e co 1 o g y ： a decade o f riboso m a 1 r n a a n a 1 y s i s o f u n c u 1 tivated microorganisms j microbial e c o 1 o g y ,1998 , 3 5 ( 1 )： 1-21 24 l e i j f a a m d, wh i p p s j m, lynch j m the u s e o f colony deve 1 opment f o r the characterization

42、o f bacterial communities i n soil and o n roots j m i c r o b i a 1 ecology, 1 9 9 7, 2 7 ( 1 )： 8 1-97 25 fang c, radosevich m, f uh rm ann j j atrazine and phenanthrene degradat i o n i n grass rhi zosphere soil j soil biology and b iochemistry, 2 0 0 1, 3 3 ( 4 5 )： 6handel s manj, rondonr，brady

43、 sbiologicalesschemistrymicrobes：newproj(10)： 2 4 5 - 2 4b?魚勺？約the,on m, s ?解 d e r b e rg ki o n o f an o m ica 1mo n met ho di d i nean drati0nbjl.so i1t ah e m i s t r y ,t0meas1euc1neys011bb i010gyt1ocrcen2 0 0 1,hadapandec0r1fugat1urethym1nc0rp0acter1aandb10cpetterssrapid15 7 13 3 (11)：1 5 7 4

44、2 8康貽軍，程潔，梅麗娟，等.植物根際促生菌作用機(jī)制研究進(jìn)展j應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2 1 ( 1 )： 2 3 2 - 2 3 8 2 9h 0 u d t 0, vanderleyden j azospi ri 1 lum, a f ree 1 iving n i trogen fixing bacterium closely associated with g r a s s e s ： genetic, b i o c h e m i c a 1 and ecological aspects j fems microbiology e c o logy, 2 0 0 0, 2 4 ( 4 )

45、： 4 8 7 - 5 0 6 30 re inhol d-hu r e k b, h u r e k t reassessment o f t h e t axonomi c s t r u c ture o f the diazotrophic genus a z o a r c u s s e n s u 1 a t oand desc r i p t i o n o fthreenew genera and new species, a z o v i brio r e s t r i c tus gen nov, sp. nov., a z o s p i r a o r y z a

46、 e g en. nov.， sp. nov. and azo nexus fungiphi lus gen nov j international journal o f sys tema tic and e v o 1 u t i o n a r y microbiology, 2 0 0 0, 5 0(2 )： 6 4 9 - 6 5 9 31 v e s s e y j k plant g r o w t h promoting rhizobact e r i a a s bioferti 1 izers j plant and soil, 2 0 0 3, 2 5 5 ( 2 )：

47、5 7 1 - 5 8 6 32 garb eva p, van veen j a, van elsas j d p r e d o m i n a n t b a c i 1 1 u s s p p in a g r i c u 1 t u r a 1 soil under d i f f ere nt manageme nt regimes detected v i a pcr dgge j m i c r o b i a 1 ecology, 2 0 0 3, 4 5 (3 )： 3 0 2 - 3 1 6 33 t i mmu s k s , n i c an d e r b, gra

48、nhall u, et al cyto kinin production b y p a e n i b a c i 1 1 u s polymyxa j soil biology and biochemistry, 1 999, 3 1 ( 1 3 )： 1 8 4 7 - 1 8 5 2 34 kokalis-burelle n, k l o e p p e r j w, reddy m s p 1 ant growth promot ing r h i zobacteria a s transplant a mendment s and their e f f e c t s o n i

49、ndigenous r h i z o s p h ere microorganisms j a p p lied soil ecology, 2006, 31(1 2 )： 9 1 100 35 probanza a, garcia j a l, palom i no m r, e t al p1 n u s p i n e a l s e e d 1 i n g g r o wth and b a c terial r h i z o s p here structure after i n o c u 1 a t i o n with p g p r b a c i 1 1 u s (b

50、 licheniformis c e c t 5 1 0 6 and b p u m i 1 u s c e c t 510 5 ) j a p p 1 i e d soil ecology,2 0 0 2, 2 0 ( 2 )： 7 5 - 8 4 36 patten c l, glick b r regulation o f i n d o 1 e a c e t i c acid production i n p s eudomona s put i d a g r 1 2 2 b y t ryptophan and the stationary phasesigma factorr p

51、 o s j canadian journalf microbiology,2 0 0 2,4 8 ( 7 )：3 7mane r 0 fg,r amo sb,f culttedion,growth,andt r o g e n fs e e d 1 i n g s j .o f plant n u t r i t3 , 2 6 ( 5 )： 1 1 0 1 - 1 1 1 5 3 8charest mh,b e au c hamp c j , an t 0 un h effects o f the humic subs tances o f d e i n k i n g paper s 1

52、 u d g e o n the antagoni sm be tween two compost bacteria and pyt h i u m ulti m u m j fems m icrobiology e c o 1 o g y , 2 0 0 5, 5 2 ( 2 )： 2 1 9 - 2 2 7 39 an t 0 un h, b e auchamp cj, goussard n, e t al potento f r h i z o b i u m and b ru m species a s pgrow th prom oting r h io n non 1 egume

53、s： r a d i s h e s ( r a p h al)j plant a n41 9 9 8, 2 0 4 ( 1 )： 5 7 - 6 7 0 y ann i y g, r i z k r y, c 0 rich v, e t al. natural end o p h y t i c association b e t w e e n r h i z o b i u m leguminosaru m bv. t r i f o 1 i i and rice r o o t s and assessme nt of its potent i a 1 t o promote rice growth j plant and soil,1 9 9 7, 1 9 4 ( 1 - 2 )： 99-1 14.l u p w a y i n, claytong,