流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取(圖文解說)

1、流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取 最近老婆要提取脾臟細(xì)胞做流式，我就做個(gè)簡單的解說，也順便傳到網(wǎng)上供菜鳥理解，如果有大神看到這篇文章，也歡迎指導(dǎo)。大家一起討論，把實(shí)驗(yàn)做得更好。無論是做混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)或者流式細(xì)胞分析都要用到脾臟。小鼠的脾臟摘取頗為簡單，但有很多同學(xué)是第一次接觸，所以在此做一個(gè)簡單的圖文講解。在此講解不甚詳細(xì)，具體步驟請(qǐng)同學(xué)參照網(wǎng)上已有各種protocol,本文重點(diǎn)在于圖文解說，讓大家對(duì)照?qǐng)D片和其他protocol更好的理解脾臟的摘取。一， 小鼠處死后泡酒精2-3分鐘，泡久了細(xì)胞會(huì)縮水，泡的時(shí)間短了起不到消毒殺菌的作用二， 擺好小鼠體位，取右側(cè)臥位。三， 沿著

2、小鼠左側(cè)肋骨走行方向做切口。準(zhǔn)備眼科鑷和眼科剪若干（文中筆者使用眼科直鑷3把，眼科剪2把）四， 向小鼠左后背方探查，在皮下很淺的地方可見深紅色脾臟。脾臟走行向與肋骨方向近似平行五， 用鑷子輕輕提起脾臟。脾臟下會(huì)連著許多結(jié)締組織，輕輕把它們撕掉。六，完整摘下脾臟，放于培養(yǎng)皿中【事先在培養(yǎng)皿中放入PBS（混淋）或紅裂（流式）和200目的鐵絲網(wǎng)】如下右圖所示，銀色的為本步驟中使用的鐵絲網(wǎng)，白色的為后面要用到的過濾膜七， 一把新的眼科剪和一把新的眼科鑷（新消毒過的。本文所用的為新高壓的），把脾臟在培養(yǎng)皿里剪成小塊。然后用2.5ml或5ml注射器柄，把脾臟研磨成細(xì)胞。研磨過程要輕柔，否則會(huì)損傷脾臟中的細(xì)胞。八， 研磨至培養(yǎng)皿中不見整塊脾臟，只剩一些不能磨碎的結(jié)締組織為止。九， 再加入4ml紅細(xì)胞裂解液，沖洗鐵絲網(wǎng)，注射器內(nèi)芯，并用槍頭吹打混勻，裂解5min十， 將液體一并轉(zhuǎn)入15ml離心管中，400g,5min,離心十一， 棄去上清，加入5ml含10%FBS的1640 ,重懸, 用裝有200目的尼龍濾膜過濾(可過濾兩次); 尼龍濾膜就是第六步中右圖的白色濾膜。十二， 濾液離心400g,5min,棄上清，加入1ml含10%FBS的1640,重懸混勻，稀釋50(20+980)倍計(jì)數(shù)，；至此