嚴(yán)格控制氨基酸葡萄糖注射液中5

1、嚴(yán)格控制氨基酸葡萄糖注射液中5-HMF及加合物氨基酸類藥物一般可做成水針、粉針以及氯化鈉 / 葡萄糖大輸液等制劑。其 葡萄糖大輸液制劑由于使用等滲調(diào)節(jié)劑葡萄糖， 在加熱或長(zhǎng)期放置過(guò)程中能形成 5-羥甲基糖醛（5-HMF和5-羥甲基糠醛聚合物，5-HMF也可進(jìn)一步與氨基酸形 成加合物；另外氨基酸類藥物還可以和葡萄糖發(fā)生 Maillard 反應(yīng)，形成一系列 復(fù)雜的加合物；而5-HMF及各種加合物皆有一定的毒性，因而氨基酸類藥物制成 葡萄糖注射液時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制溶液中的 5-HMF及各種加合物等雜質(zhì)的量，以確保臨 床用藥的安全性。選擇適宜的檢測(cè)方法由于在生產(chǎn)放置過(guò)程中， 加合物皆可能有所增加， 出于安全

2、性的考慮， 氨基 酸葡萄糖注射液的質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)增加多項(xiàng)檢查， 通過(guò)終點(diǎn)控制使該類 注射液中加合物的量控制在一定范圍內(nèi)以保證臨床用藥的安全性。對(duì)于如何測(cè)定加合物， 目前尚無(wú)統(tǒng)一的檢測(cè)和質(zhì)量控制的方法， 可以通過(guò)顏 色檢查法和HPLC等方法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。顏色檢查法較為粗略 多數(shù)氨基酸（色氨酸、苯丙氨酸等少數(shù)氨基酸除外） 由于結(jié)構(gòu)中含有的發(fā)色 團(tuán)較少，因而紫外吸收皆較弱；葡萄糖為多羥基醛結(jié)構(gòu)，紫外吸收也較小。而葡 萄糖產(chǎn)生的雜質(zhì)5-HMF5-HMF的聚合物、5-HMF與氨基酸形成的加合物、Maillard 反應(yīng)產(chǎn)物分子中皆有較大的共軛結(jié)構(gòu)，在遠(yuǎn)紫外區(qū)（ 400納米附近）皆有一定的 紫外吸收

3、， 因而可以通過(guò)控制溶液的顏色來(lái)初步控制加合物的總量。 目前， 常用 的顏色檢查有比色法和測(cè)定吸光度法。比色法適用于在可見(jiàn)光區(qū)有一定吸收 （即肉眼可見(jiàn)有一定的顏色） 的注射液 的顏色檢查。 由于氨基酸類藥物的葡萄糖注射液一般可見(jiàn)一定的顏色， 因而可采 用比色法通過(guò)控制注射液的顏色來(lái)初步控制加合物的量， 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中一般應(yīng)包括 溶液顏色的檢查，限度一般定為不超過(guò)黃色 1號(hào)或 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液。測(cè)定吸光度的方法適用于在可見(jiàn)光區(qū)無(wú)吸收 （肉眼看不到顏色） 但在紫外區(qū) 有吸收的注射液的顏色檢查。5-HMF在可見(jiàn)光區(qū)無(wú)吸收，但在 284納米有吸收， 因而中國(guó)藥典通常采用吸光度檢查法在 284 納米測(cè)吸光度來(lái)

4、控制葡萄糖大輸液 中5-HMF的量。部分Maillard反應(yīng)產(chǎn)物也僅有紫外吸收，而在可見(jiàn)光區(qū)無(wú)吸收， 故采用吸光度檢查法在紫外區(qū)測(cè)定吸光度也可粗略控制溶液中加合物的量。值得注意的是， 控制溶液的顏色雖是控制加合物等雜質(zhì)的重要的、 有效的手 段，但其對(duì)雜質(zhì)的控制力度是有限的。由于 5-HMF及部分加合物只有紫外吸收， 在可見(jiàn)光區(qū)無(wú)吸收，因而溶液的顏色與溶液中的 5-HMF/加合物的量并沒(méi)有很好 的相關(guān)關(guān)系。如，葡萄糖大輸液的顏色可能已超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但溶液中 5-HMF 的量，即在 284 納米處的吸光度可能仍符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。 另外，由于不同加合物在 紫外區(qū)的吸收波長(zhǎng)可能不一致，因而測(cè)定吸收度的方法

5、也有一定的局限性。在實(shí)際的氨基酸葡萄糖注射液的質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中， 通常在檢查溶液顏 色（比色法）的同時(shí)，在 284納米或其他波長(zhǎng)處（如 440 納米）測(cè)定溶液的吸光 度，二者相結(jié)合能好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。 HPLC法更精確檢測(cè)溶液的顏色對(duì)雜質(zhì)的控制是粗略的， 且無(wú)法控制溶液中的單加合物的量。 高效的相色譜（HPLC法是一種控制5-HMF及各種加合物更為精確的方法，。5-HMF及各種加合物皆有較好的紫外/可見(jiàn)吸收，采用普通的紫外/可見(jiàn)檢測(cè) 器即可對(duì)這些雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)； 而氨基酸和葡萄糖的紫外吸收皆較弱， 在測(cè)定波長(zhǎng) 一般對(duì)這些雜質(zhì)的測(cè)定不會(huì)產(chǎn)生干擾，因而可采用普通HPLC-UV/VIS法來(lái)定量控

6、 制5-HMF及各種加合物的量。中國(guó)藥典XXXX年版葛根素葡萄糖注射液即采用普 通HPLC法，用外標(biāo)法在284納米處測(cè)定來(lái)定量控制5-HMF的量。根據(jù)同樣的原 理，該方法也可以用來(lái)定量控制氨基酸葡萄糖注射液中的5-HMF 5-HMF的聚合物、 Maillard 反應(yīng)產(chǎn)物。由于加合物的種類較為復(fù)雜， 因而在進(jìn)行檢查時(shí)應(yīng)進(jìn)行較為詳細(xì)的方法學(xué)試 驗(yàn)研究：可以先采用劇烈的條件 （如提高溶液中氨基酸和葡萄糖的濃度、 長(zhǎng)時(shí)間 加熱等）加速各種加合物生成， 然后對(duì)含有較大量加合物的溶液進(jìn)行線性、 分離 度、檢測(cè)限方法學(xué)研究和方法學(xué)驗(yàn)證以確定方法的可行性。采用該方法色譜條件的確定一般依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 如波長(zhǎng)的選

7、擇。 由于不同的 氨基酸可以與葡萄糖形成不同的加合物， 而且加合物可能有多種， 而不同的加合 物有不同的紫外吸收， 應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)測(cè)定的結(jié)果來(lái)確定波長(zhǎng)， 必要采用二極管陣列 檢測(cè)器來(lái)確定合適的波長(zhǎng)。實(shí)際的檢測(cè)中，較常使用的檢測(cè)波長(zhǎng)一般在 260400 納米左右。由于氨基酸等主藥在該色譜條件下沒(méi)有吸收峰， 因而不能采用主成分自身對(duì) 照法，而需要選用一個(gè)合適的參比物進(jìn)行折算。由于葡萄糖大輸液中會(huì)產(chǎn)生 5-HMF，其吸收波長(zhǎng)在280納米左右，較為合適，因而可選用5-HMF作為參比物。 注射液中5-HMF量的計(jì)算可采用外標(biāo)法；其他加合物量的計(jì)算，由于加合反應(yīng)歷 程較為復(fù)雜， 且不同的氨基酸生成的加合物的種

8、類和量也不盡相同， 無(wú)法一一精 確定量，可以與5-HMF相比，以5-HMF為參比物進(jìn)行折算。關(guān)于氨基酸葡萄糖注射液中加合物的限度， 目前尚未統(tǒng)一， 可參考中國(guó)藥典 中葡萄糖大輸液中對(duì)5-HMF所定的限度：1%葡萄糖注射液在284納米處吸光度不 得超過(guò)0.32。該吸光度限度與溶液中5-HMF的量有一定的相關(guān)關(guān)系，目前較為 公認(rèn)的折算關(guān)系為：中國(guó)藥典中“ 1%葡萄糖注射液在 284 納米處吸光度不得過(guò) 0.32 ”的限度，約相當(dāng)于1%葡萄糖注射液中5-HMF的量在23微克/毫升左右， 或相當(dāng)于5%葡萄糖注射液中5-HMF的量在1015微克/毫升左右。參考該限度以及中國(guó)藥典 XXXX年版葛根素葡萄糖

9、注射液中5-HM F的限度， 氨基酸葡萄糖注射液中5-HMF和加合物的限度可定為：以5-HMF作為外標(biāo)物，氨 基酸葡萄糖注射液（葡萄糖濃度為5%中5-HMF的量一般不得過(guò)10微克/毫升， 其他加合物的量以5-HMF計(jì)，雜質(zhì)總量（包含5-HMF 一般不應(yīng)超過(guò)2030微克 / 毫升（不同的氨基酸限度可能會(huì)略有差別） 。四項(xiàng)措施減少5-HMF和加合物控制溶液 pH 值實(shí)驗(yàn)研究表明，堿性條件和強(qiáng)酸性條件皆可加速5-HMF的形成及Maillard反應(yīng)的進(jìn)行，因此控制溶液的pH值非常重要。一般情況下，溶液的pH值應(yīng)該控 制在3.55.0之間。但是，由于不同的氨基酸葡萄糖注射液的的pH值可能不盡相同，因而應(yīng)

10、進(jìn)行具體的實(shí)驗(yàn)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)確定的pH值范圍?？刂茰缇鬁囟雀邷貤l件可加速5-HMF及各種Maillard反應(yīng)產(chǎn)物的產(chǎn)生，但葡萄糖大輸液 必須進(jìn)行高溫滅菌以保證產(chǎn)品的安全性， 所以必須選用合適的工藝條件進(jìn)行滅菌、。大輸液常規(guī)的滅菌條件一般采用121C滅菌15分鐘以上或115C滅菌30分 鐘以上的工藝條件。 在實(shí)際生產(chǎn)中， 某些單位以高溫條件下可加劇加合物的產(chǎn)生 為由而采用100C或105C滅菌，這樣的條件不能保證滅菌的徹底性。解決此矛盾的方法為： 熱壓滅菌后應(yīng)采取適當(dāng)?shù)睦鋮s和通風(fēng)措施， 盡快使溶 液散熱降溫。如采用滅菌后迅速通風(fēng)，同時(shí)采用內(nèi)噴淋降溫法使溫度迅速降至 60C以下。此法可大大降低注射液中 5-HMF和Maillard 反應(yīng)產(chǎn)物的量。加入反應(yīng)抑制劑在該類注射液的處方中加入適量的 Maillard 反應(yīng)抑制劑也不失為一個(gè)有效 的方法。目前，常用的 Maillard 抑制劑為亞硫酸鹽，亞硫酸鹽可以與葡萄糖的 羰基發(fā)生可逆性的加成反應(yīng)，阻止 Maillard 反應(yīng)的進(jìn)一步發(fā)生。此外，亞硫酸 鹽還能產(chǎn)生還原作用， 阻止和減緩某些中間反應(yīng)的發(fā)生。 亞硫酸鈉和亞硫酸氫鈉 等是目前較常用的 Maillard 反應(yīng)抑制劑。降低成品的貯藏溫度