蕎麥黃酮復(fù)合物的抗真菌性陰道炎研究

1、    蕎麥黃酮復(fù)合物的抗真菌性陰道炎研究    姜妍+王妍+金玲+韓淑英摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復(fù)合物對小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實(shí)驗(yàn)mtt法評價(jià)蕎麥黃酮復(fù)合物對白色念珠菌的抑制作用以及體內(nèi)試驗(yàn)鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)目。與模型對照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細(xì)胞脫落減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復(fù)合物具有抑制白色念珠菌生長的能力，并且可以減少陰道上皮細(xì)胞的脫落。關(guān)鍵詞：蕎麥黃酮復(fù)合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎一、材料雌性spf級昆明小鼠（天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司）；唐

2、山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復(fù)合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗(yàn)法以水加分離劑（殼聚糖）技術(shù)從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細(xì)胞儀（sigma公司）。二、方法1.體外實(shí)驗(yàn)。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養(yǎng)基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復(fù)合物，西藥對照氟康唑和中藥對照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數(shù)為：1：21：512。第11管不加菌液作為空白對照，第12管作為陽性對照。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將110只昆明雌性小鼠隨機(jī)挑出15只做空白對照組。剩余60只隔日皮

3、下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài)，6天后將密度為2.5×106cfu·ml-1的菌懸液20·l（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內(nèi)。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對小鼠進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型對照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對照組、蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組、蕎麥黃酮復(fù)合物中劑量組及蕎麥黃酮復(fù)合物低劑量組。三、指標(biāo)檢測1.體外實(shí)驗(yàn)。采用mtt法，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測各實(shí)驗(yàn)組白色念珠菌數(shù)目。2.體內(nèi)試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用100ul pbs灌洗陰道56次，取1

4、0l灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，western-blot法檢測各組igfbp7蛋白含量。四、統(tǒng)計(jì)分析方法采用spssl6.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，p<0.05作為顯著性界限。五、結(jié)果1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1顯示，正常對照組無白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（p<0.01）。中、西陽性藥物及蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組白色念珠菌數(shù)目明顯減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對照組作用相近（p<0.01）。表1蕎麥黃酮復(fù)合物對白色念珠菌數(shù)的影響1p<0.05vs正常，

5、2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細(xì)胞檢查結(jié)果：見表2。表2 蕎麥黃酮復(fù)合物對陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)的影響注：統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)。2=24.263，=6，p<0.005，差異有顯著性意義，可以認(rèn)為七組藥物對小鼠陰道上皮脫落細(xì)胞抑制有差別。六、討論目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導(dǎo)致的菌群失調(diào)與該病關(guān)系十分密切。迄今為止，臨床對本病的治療重點(diǎn)還是西醫(yī)抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為

6、一個(gè)潛在的問題。隨著對本病認(rèn)識的深入以及醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)的研究，出現(xiàn)了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應(yīng)用于臨床。近年來，我國醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，中藥制劑新劑型不斷涌現(xiàn)，許多學(xué)者應(yīng)用念珠菌動物模型，對中藥制劑的安全性及有效性進(jìn)行了研究。本次試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)蕎麥黃酮復(fù)合物具有逆轉(zhuǎn)陰道上皮細(xì)胞脫落的作用，并且體外實(shí)驗(yàn)證明其可以抑制白色念珠菌生長。而在藥物的副作用及遠(yuǎn)期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩(wěn)定、效高、價(jià)廉、副作用少、順應(yīng)性好的藥物進(jìn)行廣泛、多層次研究，以更好地服務(wù)于患者。 摘 要：為了觀察蕎麥黃酮

7、復(fù)合物對小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實(shí)驗(yàn)mtt法評價(jià)蕎麥黃酮復(fù)合物對白色念珠菌的抑制作用以及體內(nèi)試驗(yàn)鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)目。與模型對照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細(xì)胞脫落減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復(fù)合物具有抑制白色念珠菌生長的能力，并且可以減少陰道上皮細(xì)胞的脫落。關(guān)鍵詞：蕎麥黃酮復(fù)合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎一、材料雌性spf級昆明小鼠（天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司）；唐山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復(fù)合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗(yàn)法以水加分離劑（殼聚糖）技術(shù)從蕎麥花葉提

8、取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細(xì)胞儀（sigma公司）。二、方法1.體外實(shí)驗(yàn)。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養(yǎng)基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復(fù)合物，西藥對照氟康唑和中藥對照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數(shù)為：1：21：512。第11管不加菌液作為空白對照，第12管作為陽性對照。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將110只昆明雌性小鼠隨機(jī)挑出15只做空白對照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài)，6天后將密度為2.5×106cfu·ml-1

9、的菌懸液20·l（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內(nèi)。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對小鼠進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型對照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對照組、蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組、蕎麥黃酮復(fù)合物中劑量組及蕎麥黃酮復(fù)合物低劑量組。三、指標(biāo)檢測1.體外實(shí)驗(yàn)。采用mtt法，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測各實(shí)驗(yàn)組白色念珠菌數(shù)目。2.體內(nèi)試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用100ul pbs灌洗陰道56次，取10l灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，western-blot法檢測各組igfbp7蛋白含量。

10、四、統(tǒng)計(jì)分析方法采用spssl6.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，p<0.05作為顯著性界限。五、結(jié)果1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1顯示，正常對照組無白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（p<0.01）。中、西陽性藥物及蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組白色念珠菌數(shù)目明顯減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對照組作用相近（p<0.01）。表1蕎麥黃酮復(fù)合物對白色念珠菌數(shù)的影響1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細(xì)

11、胞檢查結(jié)果：見表2。表2 蕎麥黃酮復(fù)合物對陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)的影響注：統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)。2=24.263，=6，p<0.005，差異有顯著性意義，可以認(rèn)為七組藥物對小鼠陰道上皮脫落細(xì)胞抑制有差別。六、討論目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導(dǎo)致的菌群失調(diào)與該病關(guān)系十分密切。迄今為止，臨床對本病的治療重點(diǎn)還是西醫(yī)抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個(gè)潛在的問題。隨著對本病認(rèn)識的深入以及醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)的研究，出現(xiàn)了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來

12、的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應(yīng)用于臨床。近年來，我國醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，中藥制劑新劑型不斷涌現(xiàn)，許多學(xué)者應(yīng)用念珠菌動物模型，對中藥制劑的安全性及有效性進(jìn)行了研究。本次試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)蕎麥黃酮復(fù)合物具有逆轉(zhuǎn)陰道上皮細(xì)胞脫落的作用，并且體外實(shí)驗(yàn)證明其可以抑制白色念珠菌生長。而在藥物的副作用及遠(yuǎn)期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩(wěn)定、效高、價(jià)廉、副作用少、順應(yīng)性好的藥物進(jìn)行廣泛、多層次研究，以更好地服務(wù)于患者。 摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復(fù)合物對小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實(shí)驗(yàn)mtt法評價(jià)蕎麥黃酮復(fù)合物對白色念珠菌的抑制作用以及體內(nèi)試驗(yàn)鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)目。與

13、模型對照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細(xì)胞脫落減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復(fù)合物具有抑制白色念珠菌生長的能力，并且可以減少陰道上皮細(xì)胞的脫落。關(guān)鍵詞：蕎麥黃酮復(fù)合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎一、材料雌性spf級昆明小鼠（天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司）；唐山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復(fù)合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗(yàn)法以水加分離劑（殼聚糖）技術(shù)從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細(xì)胞儀（sigma公司）。二、方

14、法1.體外實(shí)驗(yàn)。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養(yǎng)基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復(fù)合物，西藥對照氟康唑和中藥對照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數(shù)為：1：21：512。第11管不加菌液作為空白對照，第12管作為陽性對照。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將110只昆明雌性小鼠隨機(jī)挑出15只做空白對照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài)，6天后將密度為2.5×106cfu·ml-1的菌懸液20·l（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內(nèi)。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對小

15、鼠進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型對照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對照組、蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組、蕎麥黃酮復(fù)合物中劑量組及蕎麥黃酮復(fù)合物低劑量組。三、指標(biāo)檢測1.體外實(shí)驗(yàn)。采用mtt法，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測各實(shí)驗(yàn)組白色念珠菌數(shù)目。2.體內(nèi)試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用100ul pbs灌洗陰道56次，取10l灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，western-blot法檢測各組igfbp7蛋白含量。四、統(tǒng)計(jì)分析方法采用spssl6.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，p<0.05作為

16、顯著性界限。五、結(jié)果1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1顯示，正常對照組無白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（p<0.01）。中、西陽性藥物及蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組白色念珠菌數(shù)目明顯減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對照組作用相近（p<0.01）。表1蕎麥黃酮復(fù)合物對白色念珠菌數(shù)的影響1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細(xì)胞檢查結(jié)果：見表2。表2 蕎麥黃酮復(fù)合物對陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)的影響注：統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)。2=24.263，=6，p<0.005，

17、差異有顯著性意義，可以認(rèn)為七組藥物對小鼠陰道上皮脫落細(xì)胞抑制有差別。六、討論目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導(dǎo)致的菌群失調(diào)與該病關(guān)系十分密切。迄今為止，臨床對本病的治療重點(diǎn)還是西醫(yī)抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個(gè)潛在的問題。隨著對本病認(rèn)識的深入以及醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)的研究，出現(xiàn)了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應(yīng)用于臨床。近年來，我國醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，中藥制劑新劑型不斷涌現(xiàn)，許多學(xué)者應(yīng)用念珠菌動物模型，對中藥制劑的安全性及有效性進(jìn)行了研究。本次試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)蕎麥黃酮復(fù)合物具有逆轉(zhuǎn)陰道上皮細(xì)胞脫