《PCR技術(shù)簡史》

1、編輯pptPCR技術(shù)簡史 1985年，美國年，美國PE-Cetus公司公司的的Mullis等人發(fā)明等人發(fā)明PCR 基本原理是在試管中模擬細(xì)基本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)的DNA復(fù)制復(fù)制 1993年，年，Mullis等因此項(xiàng)技等因此項(xiàng)技術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)編輯ppt引物引物引物引物編輯ppt7272編輯ppt編輯pptPCR的反應(yīng)體系的反應(yīng)體系4種dNTP混合物各200umol/L引物 各10100pmol模板DNA 0. .12ugTaq DNA聚合酶 2. .5uMg2+ 1. .5mmol/L編輯ppt()()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 4

2、0 20編輯ppt1234522557294時(shí)間（min）溫度（）PCR的基本原理適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性形成2條單鏈子鏈延伸DNA加倍編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)1234522557294時(shí)間（min）溫度（）適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性子鏈延伸DNA加倍DNA變性形成2條單鏈模板DNA95編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)9550引物1引物2DN

3、A引物編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)50引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)72第1輪結(jié)束95第2輪開始編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)955072TaqTaqTaqTaq編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)72第2輪結(jié)束編輯pptPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)模板DNA第1輪擴(kuò)增第2輪擴(kuò)增第3輪擴(kuò)增第4輪擴(kuò)增第5輪擴(kuò)增第6輪擴(kuò)增編輯ppt編輯pptPCR的特點(diǎn)的特點(diǎn)靈敏度高靈敏度高簡便、快速簡便、快速對標(biāo)本的純度要求

4、低，血液、體腔液、洗嗽液、對標(biāo)本的純度要求低，血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織的粗提毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織的粗提DNA。編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt 編輯pptPCR的類型和應(yīng)用編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt55編輯pptA正常人A病 人正常人 (-)病 人 (+)病原微生物基因編輯ppt編輯pptA編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt 現(xiàn)現(xiàn) 嫌嫌1 嫌嫌2 嫌嫌3編輯ppt（8）SNP技術(shù)技術(shù) SNP (Single Nucleotide Polymorphism)，單核苷酸，單核苷酸多態(tài)性，是指多態(tài)性，是指DNA序列中單個(gè)核苷酸序列中單個(gè)核苷酸 突變引起的多態(tài)突變引起的多態(tài)性。性。編輯ppt（9）RAPD技術(shù)技術(shù)RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA）稱為隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性稱為隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA，RAPD是通過利用隨是通過利用隨機(jī)合成的機(jī)合成的10堿基寡聚核苷酸作為引物堿基寡聚核苷酸作為引物,對基因組進(jìn)對基因組進(jìn)行行PCR擴(kuò)增，這些擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)增，這些擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性片段的多態(tài)性,反反映了基因組相應(yīng)區(qū)域的映了基因組相應(yīng)區(qū)域的DNA多態(tài)性。多態(tài)性。 編輯ppt編輯ppt（10）RACE 技術(shù)技術(shù) RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends