動(dòng)物細(xì)胞工程復(fù)習(xí)課件

1、讀下面一段資料，讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念找出單克隆抗體的概念2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單克隆單克隆抗體：抗體：?jiǎn)蝹€(gè)單個(gè)b b細(xì)胞克隆產(chǎn)生的細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體的抗體 制備原理：將制備原理：將單個(gè)單個(gè)b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞和和骨髓瘤細(xì)骨髓瘤細(xì)胞胞細(xì)胞融合成細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞分泌的分泌的設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：一個(gè)一個(gè)b b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞特異性抗體特異性抗體大量增殖大量增殖 b b- -b b 、b b- -瘤瘤 、

2、瘤瘤- -瘤瘤 （未融合的（未融合的b b、瘤）、瘤）（一選）（一選）選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞才能存才能存活活獲得產(chǎn)生相應(yīng)獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的抗體的b b細(xì)胞細(xì)胞（二選）：（二選）：選選能產(chǎn)生所需能產(chǎn)生所需專專一抗體的雜交一抗體的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞2.3單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。度高，并能大量制備?？贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原抗原 反復(fù)注射動(dòng)物反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的從動(dòng)物的血清血

3、清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度體的特異性差、靈敏度低。低。結(jié)合同位素的單抗結(jié)合同位素的單抗-生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈兩個(gè)過(guò)程兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)(1)(1)若若a a細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則b b細(xì)胞是取自小鼠細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)

4、的體內(nèi)的 細(xì)胞，細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射前，應(yīng)給小鼠注射_類(lèi)物質(zhì)。類(lèi)物質(zhì)。（2）d過(guò)程過(guò)程是一個(gè)是一個(gè)_過(guò)程，該過(guò)程的進(jìn)過(guò)程，該過(guò)程的進(jìn)行常用行常用_或或_的誘導(dǎo)。的誘導(dǎo)。(3)(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成 種種類(lèi)型的類(lèi)型的c c細(xì)胞，因此需用細(xì)胞，因此需用_培養(yǎng)基篩選出培養(yǎng)基篩選出d d細(xì)細(xì)胞用于培養(yǎng)，胞用于培養(yǎng)，d d細(xì)胞的名稱是細(xì)胞的名稱是 ，其特點(diǎn)，其特點(diǎn)是是_。效應(yīng)效應(yīng)b抗原抗原細(xì)胞融合細(xì)胞融合聚乙二醇聚乙二醇 滅活的病毒滅活的病毒選擇性選擇性 3既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體既能無(wú)限

5、增殖又能產(chǎn)生特異性抗體雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(4)(4)在培養(yǎng)時(shí)通過(guò)在培養(yǎng)時(shí)通過(guò)_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。d d細(xì)細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5 5項(xiàng)）項(xiàng)）_。（5 5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_。特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和phph；適宜的氣體環(huán)境適宜的氣體環(huán)境1515、（1）單克隆抗體是指）單克隆抗體是指 。（2 2）制備單克隆抗體的步驟：）制

6、備單克隆抗體的步驟：將將_注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)胞，其中至少胞，其中至少1 1個(gè)淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。個(gè)淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。將步驟獲得的將步驟獲得的b b淋巴細(xì)胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞在在_的誘導(dǎo)下融合。的誘導(dǎo)下融合。將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在_培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本領(lǐng)。的本領(lǐng)。檢測(cè)和分離帶有抗檢測(cè)和分離帶有抗x x抗體的

7、陽(yáng)性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放抗體的陽(yáng)性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。將陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克將陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。隆抗體?；瘜W(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體抗原抗原聚乙二醇聚乙二醇選擇性選擇性無(wú)限增殖無(wú)限增殖產(chǎn)生專一抗體產(chǎn)生專一抗體（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：體外培養(yǎng)法，可獲得體外培養(yǎng)法，可獲得10 g/ml的抗體；的抗體；動(dòng)物體內(nèi)動(dòng)物體內(nèi)誘生法可獲得誘生法可獲得520mmg/ml的抗體。你選擇的方法及原的抗體。你選擇的方法及原因是因是 。（

8、4 4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因?yàn)樗怯眯∈蟮臑樗怯眯∈蟮腳細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是_，應(yīng)用于人體，會(huì)作為，應(yīng)用于人體，會(huì)作為 產(chǎn)產(chǎn)生生 ，解決這個(gè)問(wèn)題的方法是，解決這個(gè)問(wèn)題的方法是_。大量生產(chǎn)選，小規(guī)模生產(chǎn)選大量生產(chǎn)選，小規(guī)模生產(chǎn)選效應(yīng)效應(yīng)b蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)異物異物免疫反應(yīng)免疫反應(yīng)采用人的效應(yīng)采用人的效應(yīng)b細(xì)胞制備細(xì)胞制備15、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：（1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？。原因是。原因是_。（2）圖中為）圖中為 過(guò)程過(guò)程，常用，常用 作為誘導(dǎo)劑。該作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了細(xì)胞繼承了_ ，因此不僅能分泌，因此不僅能分泌_，還有，還有 本領(lǐng)。本領(lǐng)。不能不能沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲