針刺足三里對SP拮抗劑抑制大鼠胃電及腦腸肽的干預效應

1、針刺足三里對SP拮抗劑抑制大鼠胃電及腦腸肽的干預效應    【摘要】  目的 探討外周注入P物質(zhì)受體拮抗劑后,觀察電針足陽明經(jīng)穴是否能干預SP拮抗劑對胃電和腦腸肽的抑制作用。方法 將32只大鼠分為4組，A（對照）組、B（足三里）組、C（SP拮抗劑）組、D（足三里加SP拮抗劑）組。將SP拮抗劑（D-Arg1,Trp7,9,Leu11-Substance P）靜脈滴注以阻斷外周P物質(zhì)受體。以胃電慢波振幅變化率、快波峰簇數(shù)及胃竇組織胃動素（MTL）、P物質(zhì)（SP）等為指標，觀察SP 受體阻斷后針刺足三里對胃電及腦腸肽的影響。結(jié)果 針刺足三里使大鼠胃電

2、振幅變化率及快波峰簇數(shù)增高，與對照組比較差異有顯著性（P<0.05）;與此同時胃竇組織內(nèi)MTL、SP升高,與對照組比較P<0.05。靜滴SP 受體拮抗劑后，胃電振幅變化率、快波峰簇數(shù)及腦腸肽含量均呈現(xiàn)下降趨勢，與A、B組比較差異均有顯著或非常顯著性（P<0.05或P<0.01）。D組滴注SP拮抗劑再加上電針足三里后上述胃電活動指標部分恢復，明顯高于C組（P<0.01），但仍低于B組水平（P<0.05），MTL、SP含量也呈類似變化。結(jié)論 電針足三里可部分取消SP受體拮抗劑對胃電抑制效應，該項效應可能與電針使胃竇組織內(nèi)胃動素及SP含量增高有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】&#

3、160; 足三里 胃電生理 P物質(zhì) SP受體 腦腸肽    【Abstract】  Objective  To explore the effect of electro-acupuncture at Foot-Yangming meridians （points） on gastric electrical activity and brain-gut peptide after peripheral substance P （SP） receptor were blocked.Methods  32 rats were divid

4、ed into 4 groups, including group A （control group）, group B（“Zusanli” group）, group C （ SP antagonist group） and group D （“Zusanli” and SP antagonist group）. Blocking peripheral SP receptor by intravenous drop infusion with the SP antagonist （D-Arg1,Trp7,9,Leu11-Substance P） and then observing the

5、effect of electro-acupuncture at “Zusanli” point on gastric electrical activity and brain-gut peptide by measuring the slow wave amplitude variety percentage, number of fast wave clusters of EGG and the content of motilin （MTL） and SP in gastric antrum.Results  After electro-acupuncture at 

6、; “Zusanli” point ,the slow wave amplitude variety percentage and number of fast wave clusters of EGG were raised, showing significance different（P<0.05）comparing with control group,.  At the same time the content of motilin （MTL） and SP in antrum tissues increased，comparing with control gro

7、up（P<0.05）.After infusing with the SP antagonist via vein，the above slow wave amplitude variety percentage, number of fast wave clusters of EGG were decreased, comparing with group A and B, showing distinguished contrast（P<0.05）.After infusing with the SP antagonist and electro-acupuncture at&

8、#160; “Zusanli” point ,the above gastric activity parameters were restored partially, higher than the lever in group C（P<0.01）,but still lower than the level in group B（P<0.05）. The change of contents of MTL、SP were similar.Conclusion  The suppressive effect of SP antagonist on gastric el

9、ectrical activity could be partially weakened by electro-acupuncture at “Zusanli” point, may be due to increased of the content of MTL and SP in gastric antrum tissues.    【Key words】  Zusanli； gastric electrophysiology；substance P （SP）；substance P receptor；brain-gut peptide 

10、;   為了探討足陽明經(jīng)與胃相互聯(lián)系通路及其與P物質(zhì)關(guān)系，本研究采用P物質(zhì)（SP）受體拮抗劑（D-Arg1,Trp79,Leu11-Substance P） 靜脈滴注，與此同時觀察針刺足陽明經(jīng)穴對大鼠胃電活動影響，分析胃竇內(nèi)的胃動素（MTL）、P物質(zhì)（SP）等含量的變化，試圖闡明針刺足陽明經(jīng)穴對胃電活動影響的外周神經(jīng)通路及與腦腸肽的關(guān)系。1  材料與方法    1.1  實驗動物及分組  健康成年大鼠32只，體重25O350g，雌雄不拘，由本院實驗動物中心提供。根據(jù)實驗需要隨機分為4組。（A）對照組：靜滴0.9%N

11、aCl溶液20min，靜滴前后分別記錄胃電60min；（B）足三里組：靜滴0.9%NaCl溶液同時針刺足三里20min，靜滴前后分別記錄胃電60min； （C）SP拮抗劑組:以1g/（kg·h） 作尾靜脈滴注；（D） SP拮抗劑加足三里組。C、D 組除靜滴藥物外，其余步驟同A、B 組。    1.2  手術(shù)方法及術(shù)后處理  大鼠稱重，10%烏拉坦1ml/100g腹腔注射麻醉。動物仰臥位固定于手術(shù)臺上，劍突下腹部正中切口暴露胃體、胃竇部，在胃竇及胃體部分別埋置直徑為2mm 鉑金電極，胃竇電極距幽門括約肌0.5cm，胃大彎電極距胃竇部電極

12、約1cm 處，電極導線經(jīng)皮下自兩肩胛骨之間引出體外，固定在一帶蓋的小塑料套管內(nèi),縫合皮膚,消毒及抗感染。動物隔離飼養(yǎng)45天，禁食1天后作胃電記錄。    1.3  大鼠胃電記錄及分析方法  胃電記錄采用二道生理記錄儀，兩電極間并聯(lián)22F（慢波）或50F（快波）電容，信號輸入放大器，參考電極置于尾根部。同步記錄胃電快波和慢波。慢波參數(shù)：時間常數(shù)2s，高頻濾波10Hz，靈敏度5mV/cm 或2mV/cm；快波參數(shù)：時間常數(shù)0.02s，高頻濾波30Hz，靈敏度1mV/cm。記錄紙速10mm/min。    觀察指標：（1

13、）平均振幅變化率：以慢波3min為一區(qū)段，共取45個區(qū)段，計算各區(qū)段振幅的平均值。處理前后比較平均振幅變化率（%）：平均振幅變化率（%）=（效應值-正常值）/效應值×100。（2）平均峰簇數(shù)（個/10min）：以10min快波為一區(qū)段，測取3個區(qū)段內(nèi)發(fā)放的峰簇數(shù)，并計算處理前后快波平均峰簇數(shù)的差值。    1.4  胃竇組織標本提取及腦腸肽含量放免測定法（RIA）  實驗結(jié)束后摘取胃竇，用0.9% NaCl溶液沖洗,稱重后按1：10比例加0.9%NaCl溶液煮沸3min，0.5mmol/L 冰醋酸勻漿，再加同量NaCl液中和，離心取上

14、清液-20冰箱保存，以備作腦腸肽測定。MTL及SP測定采用RIA，試劑盒由北京美迪科公司提供，由中南大學湘雅醫(yī)院中心實驗室協(xié)助測定。    1.5  刺激部位及方法  足三里取穴參考華興邦動物穴位圖譜。電刺激方法用G6805電針儀，電針頻率710Hz疏密波，強度以肌肉或針柄微顫為度，電針時間20min。    1.6  統(tǒng)計學方法  數(shù)據(jù)以x±s表示，同組針刺前后觀察值比較采用配對t檢驗，多組間顯著性檢驗采用方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗。2  結(jié)果  

15、  2.1  靜注SP拮抗劑后針刺足三里對大鼠胃電的影響  見表1。    大多數(shù)禁食大鼠胃電慢波呈周期性節(jié)律變化，一般可分為高活動相和低活動相，高活動相可見到持續(xù)時間較長的連續(xù)不規(guī)則的大峰簇，在一次記錄中呈周期性出現(xiàn)?？觳殡p向不對稱針形波,多以峰簇發(fā)放形式出現(xiàn)，峰簇多發(fā)生在慢波平臺上。靜注SP拮抗劑后針刺足三里對大鼠胃電的影響見表1。表1  SP拮抗劑與針刺足三里對胃電振幅及 峰簇數(shù)影響注:與A組比較P<0.05，P<0.01；與B組比較P<0.05，P<0.01，與C組比較P<0.05，P

16、<0.01表1顯示與對照組比較針刺足三里可使胃電慢波振幅變化率、快波峰簇數(shù)升高（P<0.05或0.01）。靜滴SP拮抗劑后，胃電振幅下降27.85±23.04%，明顯低于 A、B組（P<0.01）。拮抗劑加上針刺足三里后振幅變化率有所回升，明顯高于C組（P<0.01），但仍低于B組（P<0.05）。快波峰簇數(shù)C組明顯低于B組 （P<0.01）；D組有所恢復。以上說明SP對慢波振幅及快波峰簇發(fā)放均呈抑制效應。針刺足三里可使被抑制胃電得到部分恢復，但仍未恢復至給藥前水平，顯示電針能部分取消SP拮抗劑對胃電抑制效應。   

17、2.2  靜注SP拮抗劑后針刺足三里對大鼠胃竇內(nèi)腦腸肽的影響  見表2。 表2  SP拮抗劑與針刺足三里對胃竇組織 內(nèi)腦腸肽的影響注:與A組比較P<0.05，P<0.01；與B組比較P<0.05，P<0.01；與C組比較P<0.05表2顯示：針刺足三里后胃竇組織內(nèi)MTL及SP含量較對照組升高（P< 0.01）。而SP拮抗劑組其胃竇組織內(nèi)SP與對照組比較差異無顯著性，MTL含量低于足三里組（P< 0.01）。SP拮抗劑+針刺足三里組其MTL和SP含量明顯高于C組和A組。說明針刺足三里使胃竇MTL及SP含量增高。注入SP拮抗劑

18、后與對照組比較胃竇內(nèi)MTL、SP含量無明顯改變。說明針刺足三里在部分取消SP拮抗劑對胃電抑制效應的同時也伴隨胃竇組織內(nèi)胃動素及SP含量增高。3  討論    P物質(zhì)（Substance P）是世界上發(fā)現(xiàn)最早的神經(jīng)肽,由Von Euler 和Gaddum于1931年在馬腸中提取乙酰膽堿時發(fā)現(xiàn),因當時不知其化學性質(zhì),故取名P物質(zhì)。直到20世紀70年代對它的研究才有了突破性進展,隨著放射免疫學和免疫組織化學技術(shù)的應用,SP的研究工作已得到迅速發(fā)展， 現(xiàn)已查明SP是速激肽（TK）家族的一種,來源于前速激肽原（preprotachykinin,PPT）A基因編碼的

19、三種PPT,即: -PPT, -PPT和-PPT1，2。    SP廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織中，其作用主要參與感覺信息傳遞3，4，痛覺調(diào)制5，消化6，心血管活動7，神經(jīng)內(nèi)分泌8，呼吸及行為等活動的調(diào)節(jié)9，10。SP在外周對胃腸道運動有促進作用，外周SP由消化道內(nèi)源性神經(jīng)元或外在神經(jīng)（迷走、內(nèi)臟神經(jīng)等）釋放。它能強烈刺激下食管括約?負突爻交賬酰鶻諼桿岱置冢?1。    SP對胃腸道平滑肌有很強的刺激作用，它增強貓食管肌條的基礎張力，使在體貓胃和幽門強烈收縮；在整體內(nèi)SP增強小腸的節(jié)段性收縮和蠕動1，12。鑒于SP對胃腸平滑肌的強烈刺激作用和它在