藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則

1、 第十四章第十四章生物藥物質(zhì)量控制分析方法驗證生物藥物質(zhì)量控制分析方法驗證1第十四章第十四章 生物藥物質(zhì)量控制分析方法驗證生物藥物質(zhì)量控制分析方法驗證一、概述一、概述二、生物學(xué)測定常用方法二、生物學(xué)測定常用方法 三、方法的來源三、方法的來源四、分析方法四、分析方法五、分析方法的驗證五、分析方法的驗證六、綜合分析六、綜合分析2中國中國美國美國英國英國鑒別方法鑒別方法化學(xué)反應(yīng)顯色法，化學(xué)反應(yīng)顯色法，紅外吸收圖譜比對紅外吸收圖譜比對法，硫酸鹽的鑒別法，硫酸鹽的鑒別反應(yīng)反應(yīng)化學(xué)反應(yīng)顯色法化學(xué)反應(yīng)顯色法硫酸鹽的鑒別反應(yīng)硫酸鹽的鑒別反應(yīng)薄層色譜法薄層色譜法化學(xué)反應(yīng)顯色法化學(xué)反應(yīng)顯色法硫酸鹽特征反應(yīng)硫酸鹽特

2、征反應(yīng)檢測項目檢測項目酸度，酸度，溶液澄清度溶液澄清度與顏色與顏色，硫酸鹽，硫酸鹽，有關(guān)物質(zhì)，有關(guān)物質(zhì)，干燥失干燥失重重，可見異物，不，可見異物，不溶性微粒，異常毒溶性微粒，異常毒性，細(xì)菌內(nèi)毒素，性，細(xì)菌內(nèi)毒素，無菌。無菌。PH值（值（4,5-7.0）干燥失重干燥失重溶液檢查：溶液溶液檢查：溶液S、溶液溶液外觀外觀pH溶液溶液S的的pH （4.5-7.0）甲醇（氣相色譜）甲醇（氣相色譜）含量測定含量測定照抗生素微生物檢照抗生素微生物檢定法（通則定法（通則1201)測測定。定。色譜色譜法法色譜色譜法法鏈霉素鏈霉素3一、概述一、概述n保證藥品保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研

3、發(fā)和是藥品研發(fā)和評價應(yīng)遵循的基本原則，其中，對藥品進(jìn)行評價應(yīng)遵循的基本原則，其中，對藥品進(jìn)行質(zhì)質(zhì)量控制量控制是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。n方法驗證的目的方法驗證的目的是判斷采用的是判斷采用的分析方法分析方法是否是否科科學(xué)、合理，學(xué)、合理，是否能有效控制是否能有效控制產(chǎn)品產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。的內(nèi)在質(zhì)量。4生物藥品質(zhì)控生物藥品質(zhì)控n生物藥品質(zhì)控中采用的方法包括生物藥品質(zhì)控中采用的方法包括理化分析方法理化分析方法和生物學(xué)測定方法和生物學(xué)測定方法。n一般要使用一般要使用動物、細(xì)胞或生物分子動物、細(xì)胞或生物分子，因此對于，因此對于生物學(xué)測定生物學(xué)測定的判斷標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)靈活掌

4、握的判斷標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)靈活掌握n對于對于定量測定方法定量測定方法應(yīng)盡可能減少方法的變異，應(yīng)盡可能減少方法的變異，驗證的結(jié)果仍應(yīng)能證明該方法具有相當(dāng)?shù)尿炞C的結(jié)果仍應(yīng)能證明該方法具有相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確準(zhǔn)確性和可靠性性和可靠性，并應(yīng)以能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量為，并應(yīng)以能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量為基本標(biāo)準(zhǔn)?；緲?biāo)準(zhǔn)。5二、二、 生物學(xué)測定常用方法 生物學(xué)測定系指生物學(xué)測定系指采用生物學(xué)方法，以反映被測采用生物學(xué)方法，以反映被測物的生物學(xué)特性為目的的測定方法。物的生物學(xué)特性為目的的測定方法。6 （一）、酶反應(yīng)試驗（一）、酶反應(yīng)試驗 是指在體外能促進(jìn)酶分子的活化或本身具是指在體外能促進(jìn)酶分子的活化或本身具備酶的活性，通過底物的

5、變化檢測酶活性。主備酶的活性，通過底物的變化檢測酶活性。主要用于酶、輔酶、激酶、激活劑、抑制劑等的要用于酶、輔酶、激酶、激活劑、抑制劑等的活性測定。這類方法的變異相對較小，結(jié)果比活性測定。這類方法的變異相對較小，結(jié)果比較準(zhǔn)確。較準(zhǔn)確。 7（二）、結(jié)合試驗（二）、結(jié)合試驗 是基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合特性而設(shè)計是基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合特性而設(shè)計的試驗，如的試驗，如免疫結(jié)合試驗免疫結(jié)合試驗。目前主要用于生物。目前主要用于生物制品的鑒別。由于在結(jié)合試驗中測定的分子不制品的鑒別。由于在結(jié)合試驗中測定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的活性（或效力）測

6、定。這類方法的變異也相對活性（或效力）測定。這類方法的變異也相對較小。較小。 8（三）、細(xì)胞測定試驗（三）、細(xì)胞測定試驗 是指產(chǎn)品可以是指產(chǎn)品可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生可測定的應(yīng)答誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生可測定的應(yīng)答，如細(xì)胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產(chǎn)，如細(xì)胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產(chǎn)生特定的化學(xué)物質(zhì)等。細(xì)胞測定試驗一般能較生特定的化學(xué)物質(zhì)等。細(xì)胞測定試驗一般能較好地反映制品的生物學(xué)活性，常用于各種好地反映制品的生物學(xué)活性，常用于各種生物生物制品的活性（效力）測定制品的活性（效力）測定。與上述兩類方法相。與上述兩類方法相比，這類方法的變異較大。與使用傳代細(xì)胞相比，這類方法的變異較大。與使用傳代細(xì)胞相比，使

7、用原代細(xì)胞的方法變異更大。比，使用原代細(xì)胞的方法變異更大。 9（四）、動物試驗（四）、動物試驗 是指以整體動物為試驗材料檢測制品生物學(xué)是指以整體動物為試驗材料檢測制品生物學(xué)活性（或效力）的試驗方法，如動物保護(hù)力試驗活性（或效力）的試驗方法，如動物保護(hù)力試驗，一般用于，一般用于疫苗的效力疫苗的效力測定。由于動物實驗的成測定。由于動物實驗的成本高、周期長和變異大，所以一般僅用于成品檢本高、周期長和變異大，所以一般僅用于成品檢定。對于某些治療用的制品，由于其作用機(jī)理或定。對于某些治療用的制品，由于其作用機(jī)理或本身化學(xué)性質(zhì)的原因，難以建立體外測活的方法本身化學(xué)性質(zhì)的原因，難以建立體外測活的方法，也可以

8、采用動物試驗方法測定，但由于這類方，也可以采用動物試驗方法測定，但由于這類方法的法的變異一般相對較大變異一般相對較大，在進(jìn)一步的研究中應(yīng)盡，在進(jìn)一步的研究中應(yīng)盡可能以體外法代替。可能以體外法代替。 10n 鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一般較大，為更好控制產(chǎn)品質(zhì)性，且方法的變異一般較大，為更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，必要時需量，必要時需同時采用多種方法同時采用多種方法進(jìn)行測定。進(jìn)行測定。 11三、方法的來源（種類）三、方法的來源（種類） 根據(jù)質(zhì)控分析方法的來源，可將方法分為根據(jù)質(zhì)控分析方法的來源，可將方法分為兩大類，即兩大類，即標(biāo)準(zhǔn)方法和

9、非標(biāo)準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法。原則上，。原則上，對于各類方法均需進(jìn)行驗證，但依方法來源的對于各類方法均需進(jìn)行驗證，但依方法來源的不同對于驗證的要求有所不同。不同對于驗證的要求有所不同。 12（一）、標(biāo)準(zhǔn)方法（或正式方法、法定方法）（一）、標(biāo)準(zhǔn)方法（或正式方法、法定方法） 一般是指一般是指已有國家標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控方法已有國家標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控方法，WHO推薦的質(zhì)控方法也可作為重要參考。此推薦的質(zhì)控方法也可作為重要參考。此類方法在被確定為標(biāo)準(zhǔn)方法前已經(jīng)過了適當(dāng)類方法在被確定為標(biāo)準(zhǔn)方法前已經(jīng)過了適當(dāng)?shù)尿炞C。的驗證。 采用此類方法前，也應(yīng)對該方法進(jìn)行適采用此類方法前，也應(yīng)對該方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)尿炞C當(dāng)?shù)尿炞C,如進(jìn)行專屬

10、性和精密度的驗證，以如進(jìn)行專屬性和精密度的驗證，以便證明在實際的使用條件下該方法也是適用便證明在實際的使用條件下該方法也是適用的。的。 13（二）、非標(biāo)準(zhǔn)方法（二）、非標(biāo)準(zhǔn)方法 1、標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法、標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法 此類方法系指由申報者提出的可取代標(biāo)準(zhǔn)此類方法系指由申報者提出的可取代標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法。申報者在決定采用此類方法方法的替代方法。申報者在決定采用此類方法時應(yīng)持慎重的態(tài)度，并需提供時應(yīng)持慎重的態(tài)度，并需提供表明新方法等同表明新方法等同于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗證資料于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗證資料，包括兩種方法的比較性資料。包括兩種方法的比較性資料。 14 2、來自

11、參考文獻(xiàn)的方法、來自參考文獻(xiàn)的方法 是指在專業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方是指在專業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方法，一般要認(rèn)真對待此類方法，并需進(jìn)行全面法，一般要認(rèn)真對待此類方法，并需進(jìn)行全面的驗證。應(yīng)說明參考文獻(xiàn)的出處，附原文及譯的驗證。應(yīng)說明參考文獻(xiàn)的出處，附原文及譯文。文。 15 3、自己建立的方法、自己建立的方法 對于某些產(chǎn)品，尤其是創(chuàng)新性產(chǎn)品來講，對于某些產(chǎn)品，尤其是創(chuàng)新性產(chǎn)品來講，由于缺少可參考的方法，通常需要自己建立一由于缺少可參考的方法，通常需要自己建立一種新的分析方法，對于這類方法需進(jìn)行全面而種新的分析方法，對于這類方法需進(jìn)行全面而嚴(yán)格的驗證。嚴(yán)格的驗證。 16四、分析方法四、分

12、析方法 生物藥品質(zhì)控分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性生物藥品質(zhì)控分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性與技術(shù)方法本身（包括方法的原理和方法的技與技術(shù)方法本身（包括方法的原理和方法的技術(shù)特點等）密切相關(guān)，一種系統(tǒng)的完整的分析術(shù)特點等）密切相關(guān)，一種系統(tǒng)的完整的分析方法應(yīng)包括：方法應(yīng)包括： 17 （一）、分析方法的原理（一）、分析方法的原理 （二）、供試品（二）、供試品 應(yīng)說明如何取樣，包括每次測定時取樣的數(shù)量、如何應(yīng)說明如何取樣，包括每次測定時取樣的數(shù)量、如何取用（單支或多支混合）等。取用（單支或多支混合）等。 （三）、測試用儀器及參數(shù)（三）、測試用儀器及參數(shù) （四）、測試用試劑（四）、測試用試劑 列出所有測試用的試

13、劑和規(guī)格，并說明其來源。如果某列出所有測試用的試劑和規(guī)格，并說明其來源。如果某些試劑為自制或?qū)Σ少彽脑噭┻M(jìn)行了加工處理，則應(yīng)詳述些試劑為自制或?qū)Σ少彽脑噭┻M(jìn)行了加工處理，則應(yīng)詳述制備或處理過程。制備或處理過程。 18（五）、標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的配備（五）、標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的配備 （六）、供試品的配備（六）、供試品的配備 ：（七）、測試過程（七）、測試過程 按實驗步驟詳述整個實驗過程，說明關(guān)鍵步驟的實驗條件。按實驗步驟詳述整個實驗過程，說明關(guān)鍵步驟的實驗條件。 （八）、計算（八）、計算 盡可能以表格的形式顯示所獲取的數(shù)據(jù)，說明數(shù)據(jù)的處理方盡可能以表格的形式顯示所獲取的數(shù)據(jù)，說明數(shù)據(jù)的處理方法，提供計算

14、公式，并說明計算方法的出處及采用依據(jù)。法，提供計算公式，并說明計算方法的出處及采用依據(jù)。 （九）、結(jié)果報告（九）、結(jié)果報告 ：說明結(jié)果報告的形式：說明結(jié)果報告的形式 （十）、判定標(biāo)準(zhǔn)：提供判定標(biāo)準(zhǔn)，說明判定標(biāo)準(zhǔn)的制定依據(jù)。（十）、判定標(biāo)準(zhǔn)：提供判定標(biāo)準(zhǔn)，說明判定標(biāo)準(zhǔn)的制定依據(jù)。 19五、分析方法的驗證五、分析方法的驗證 質(zhì)控分析方法的驗證就是根據(jù)方法的需要質(zhì)控分析方法的驗證就是根據(jù)方法的需要測定該方法的測定該方法的專屬性、準(zhǔn)確性、精密度、線性、專屬性、準(zhǔn)確性、精密度、線性、范圍、檢測限度、定量限度、耐用性范圍、檢測限度、定量限度、耐用性等幾個指等幾個指標(biāo)中的一個或幾個，用于不同檢測目的的試驗標(biāo)

15、中的一個或幾個，用于不同檢測目的的試驗方法需進(jìn)行不同參數(shù)的測定，下表為各種檢測方法需進(jìn)行不同參數(shù)的測定，下表為各種檢測方法通常需測定的參數(shù)。方法通常需測定的參數(shù)。2021（一）專屬性（一）專屬性專屬性專屬性系指在其他成分（如系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等）雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析可能存在下，采用的分析方法能夠準(zhǔn)確測定被分析方法能夠準(zhǔn)確測定被分析物質(zhì)的特性的能力。物質(zhì)的特性的能力。 通常通常鑒別、雜質(zhì)檢查、鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定含量測定方法中均應(yīng)考察方法中均應(yīng)考察其專屬性。其專屬性。 如采用的方法不夠?qū)伲绮捎玫姆椒ú粔驅(qū)?，?yīng)采用多個方法予以補充。應(yīng)采用多個方法

16、予以補充。221、鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng)n專屬性專屬性試驗要求證明能與試驗要求證明能與可能共存的物質(zhì)可能共存的物質(zhì)或或結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)相似化合物相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的樣品區(qū)分，需確證含被分析物的樣品呈正呈正反應(yīng)反應(yīng)（可與已知對照物比較），而不含被測成分（可與已知對照物比較），而不含被測成分的樣品呈的樣品呈負(fù)反應(yīng)負(fù)反應(yīng)，以及，以及結(jié)構(gòu)相似結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)或組分中的有關(guān)化合物，也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)?；衔铮矐?yīng)呈負(fù)反應(yīng)。232、雜質(zhì)檢查、雜質(zhì)檢查 作為作為純度檢查純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確保，所采用的分析方法應(yīng)確?？煽蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量檢出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金，如有關(guān)物質(zhì)、

17、重金屬、殘留溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有屬、殘留溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專屬性。一定的專屬性。24n雜質(zhì)可獲得雜質(zhì)可獲得: 可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和共存物質(zhì)能得到分離和檢出檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。精密度。n雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得: 將供試品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水將供試品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)和量。必要時響），比較破

18、壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)行色譜峰純可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)行色譜峰純度檢查度檢查。253、含量測定、含量測定n含量測定目的含量測定目的是得到樣品中被分析物的是得到樣品中被分析物的含量含量或或效價效價的準(zhǔn)確結(jié)果。的準(zhǔn)確結(jié)果。n在雜質(zhì)可獲得的情況下在雜質(zhì)可獲得的情況下，對于主成分含量測定可，對于主成分含量測定可在在供試品中加入雜質(zhì)或輔料供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干，考察測定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測定結(jié)果。擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測定結(jié)果。26n在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得

19、的情況下，可采用可采用另另一個經(jīng)驗證一個經(jīng)驗證了的或了的或藥典藥典方法進(jìn)行比較，比對兩種方法進(jìn)行比較，比對兩種方法測定的結(jié)果。也可采用方法測定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗（破壞性試驗（強光照強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量用兩種方法進(jìn)行含量測定比較測定結(jié)果測定比較測定結(jié)果。必要時進(jìn)行色譜峰純度檢查，。必要時進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。27（二）準(zhǔn)確度（二）準(zhǔn)確度n準(zhǔn)確度系指準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)

20、果與真實值或認(rèn)可的用該方法測定的結(jié)果與真實值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實度。一般以參考值之間接近的程度。有時也稱真實度。一般以回收率（）表示。回收率（）表示。n一定的準(zhǔn)確度為定量測定的必要條件，因此涉及到一定的準(zhǔn)確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證準(zhǔn)確度，如含量測定量測定的檢測項目均需要驗證準(zhǔn)確度，如含量測定、雜質(zhì)定量試驗等。定、雜質(zhì)定量試驗等。28n準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。該指標(biāo)的驗準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。該指標(biāo)的驗證一般以證一般以回收率回收率試驗來進(jìn)行，試驗設(shè)計需考試驗來進(jìn)行，試驗設(shè)計需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備制備3 個不同濃

21、度個不同濃度的樣品，的樣品，各測定各測定3 次，即測定次，即測定9 次，報告已知加入量次，報告已知加入量的回收率（）或測定結(jié)果平均值與真實值的回收率（）或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其可信限。之差及其可信限。（二）準(zhǔn)確度（二）準(zhǔn)確度29回收率回收試驗可在幾份相同試樣中加入適量待測組分的純品，以相同條件進(jìn)行測定，按下式計算回收率： 回收率添加組分試樣測定值原試樣測定值/組分添加量回收率越高則認(rèn)為方法越可靠。30 1、含量測定、含量測定 原料藥原料藥可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法

22、測定的結(jié)果進(jìn)行比較。法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)可用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定。行測定。（二）準(zhǔn)確度（二）準(zhǔn)確度31 2、雜質(zhì)定量試驗、雜質(zhì)定量試驗 雜質(zhì)的定量試驗可向原料藥或制劑中加入雜質(zhì)的定量試驗可向原料藥或制劑中加入已已知量雜質(zhì)知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。進(jìn)行測定。 如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗證的方法。方法或經(jīng)過驗證的方法。 當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原

23、料藥的響應(yīng)因子近似計算雜質(zhì)含量（自身對照原料藥的響應(yīng)因子近似計算雜質(zhì)含量（自身對照法）。并應(yīng)明確單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成法）。并應(yīng)明確單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（）或是面積比（）。分的重量比（）或是面積比（）。 3233（三）精密度（三）精密度 精密度系指精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)樣在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)樣品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測所得結(jié)果之間的接品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。近程度（離散程度）。 該指標(biāo)目的是考察分析方法在不同的時間、操該指標(biāo)目的是考察分析方法在不同的時間、操作人員、試驗室下，所得結(jié)果的作人員、試驗室下，所

24、得結(jié)果的重現(xiàn)性和重復(fù)性重現(xiàn)性和重復(fù)性。涉及涉及定量測定的項目定量測定的項目考察方法的精密度。考察方法的精密度。 34 精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對相對標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。取樣測定次數(shù)應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)表示。取樣測定次數(shù)應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義，至少用意義，至少用6次結(jié)果進(jìn)行評價。次結(jié)果進(jìn)行評價。 精密度可以從三個層次考察：精密度可以從三個層次考察：重復(fù)性、重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。中間精密度、重現(xiàn)性。（三）精密度（三）精密度351、重復(fù)性、重復(fù)性n重復(fù)性系指重復(fù)性系指在在同樣的操作同樣的操作條件下，在條件下，在較短時間較短時間間間隔內(nèi)，由隔內(nèi)，由一個分析人員一個分析人員測定所

25、得結(jié)果的精密度。測定所得結(jié)果的精密度。n重復(fù)性測定重復(fù)性測定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9 次測定結(jié)次測定結(jié)果進(jìn)行評價，如制備果進(jìn)行評價，如制備3 個不同濃度的樣品，各測個不同濃度的樣品，各測定定3 次，或采用同次，或采用同一批樣品一批樣品（把被測物濃度當(dāng)作（把被測物濃度當(dāng)作100），用至少測定），用至少測定6 次的結(jié)果進(jìn)行評價。次的結(jié)果進(jìn)行評價。362、中間精密度、中間精密度n中間精密度系指中間精密度系指在同一試驗室，由于試驗室內(nèi)部在同一試驗室，由于試驗室內(nèi)部條件改變，如時間、分析人員、儀器設(shè)備、測定條件改變，如時間、分析人員、儀器設(shè)備、測定結(jié)果的精密度。結(jié)果的精密度。n驗證

26、設(shè)計方案中的變動因素一般為驗證設(shè)計方案中的變動因素一般為日期、分析人日期、分析人員、設(shè)備員、設(shè)備。37天數(shù)天數(shù)操作者操作者儀器（或色譜儀器（或色譜柱）柱）第一天第一天AABB第二天第二天ABBA第三天第三天AB(或或A)BB(或或A)383、重現(xiàn)性、重現(xiàn)性n指不同實驗室之間不同分析人員測定結(jié)果的精密指不同實驗室之間不同分析人員測定結(jié)果的精密度。度。n當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗。試驗。39（四）線性（四）線性 線性系指線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與試樣中被分析物在設(shè)計的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與試樣中被分析物的濃度（量）直接呈線性比例關(guān)系

27、的能力。的濃度（量）直接呈線性比例關(guān)系的能力。 線性是定量測定的基礎(chǔ)，涉及定量測定的項目，如雜質(zhì)定線性是定量測定的基礎(chǔ)，涉及定量測定的項目，如雜質(zhì)定量試驗和含量測定均需要驗證線性。量試驗和含量測定均需要驗證線性。做法做法: 可用一可用一貯備液貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測定，被測物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測定，至少制備至少制備5 個濃度。以測得的個濃度。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性.40（五）范圍（五）范圍n范圍系指范圍系指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線

28、性，能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物的高低限濃度或量測試方法適用的試樣中被分析物的高低限濃度或量的區(qū)間。的區(qū)間。n范圍通常用與分析方法的測試結(jié)果相同的單位（如范圍通常用與分析方法的測試結(jié)果相同的單位（如百分濃度）表達(dá)。百分濃度）表達(dá)。n涉及到定量測定的檢測項目均需要對范圍進(jìn)行驗證，涉及到定量測定的檢測項目均需要對范圍進(jìn)行驗證，如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質(zhì)如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質(zhì)定量試驗等。定量試驗等。411、含量測定含量測定 范圍應(yīng)為測試濃度的范圍應(yīng)為測試濃度的80100或更寬?；蚋鼘?。2、雜質(zhì)、雜質(zhì) 雜質(zhì)測定時，范圍應(yīng)根據(jù)初

29、步實測，擬訂出規(guī)雜質(zhì)測定時，范圍應(yīng)根據(jù)初步實測，擬訂出規(guī)定限度的定限度的20。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時測。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的度的-20至含量限度（或上限）的至含量限度（或上限）的+20。 （五）范圍（五）范圍42（六）檢測限（六）檢測限n檢測限系指檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。n該驗證指標(biāo)的意義該驗證指標(biāo)的意義在于考察方法是否在于考察方法是否具備靈敏具備靈敏的的檢測能力。因此對雜質(zhì)限度試驗，需證明

30、方法具檢測能力。因此對雜質(zhì)限度試驗，需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證需要控制的雜質(zhì)被測有足夠低的檢測限，以保證需要控制的雜質(zhì)被測出。出。43 1、直觀法、直觀法 直觀評價可以用于直觀評價可以用于非儀器分析非儀器分析方法，也可方法，也可用于儀器分析方法。用于儀器分析方法。 檢測限的測定是通過對一檢測限的測定是通過對一系列已知濃度系列已知濃度被被分析物的樣品進(jìn)行分析，并以能分析物的樣品進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確（或被可準(zhǔn)確（或被可靠）地檢測被測物的最小量或最低濃度靠）地檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。來建立。（六）檢測限（六）檢測限44 2、信噪比法、信噪比法 用于能用于能顯示基線噪音顯示基線噪

31、音的分析方法，即把已知的分析方法，即把已知低低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為一般以信噪比為3：1 或或2：1 時相應(yīng)的濃度或注時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限。入儀器的量確定檢測限。 其他方法其他方法有基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)有基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計算的方法等。偏差進(jìn)行計算的方法等。（六）檢測限（六）檢測限45（七）定量限（七）定量限 定量限系指定量限系指試樣中的被分析物能夠被試樣中的被分析物能夠被定量測定量測定的最

32、低量定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和，其測定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。精密度。 常用信噪比法確定定量限。一般以常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為信噪比為10：1 時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。46 1、直觀法、直觀法 直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限一般通過對一系列用于儀器分析方法。定量限一般通過對一系列含有已知濃度被測物的樣品進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確含有已知濃度被測物的樣品進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確度和精密度都符合要求的情況下，來確定被測度和精密度都符合要求的情況下，來確定被測物能被物

33、能被定量的最小量定量的最小量。（七）定量限（七）定量限47 2、信噪比法、信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法，即把用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般可接受的信噪比是濃度或量。一般可接受的信噪比是10：1。 （七）定量限（七）定量限48（八）耐用性（八）耐用性n耐用性系指耐用性系指測定條件發(fā)生細(xì)小變動時，測定結(jié)果測定條件發(fā)生細(xì)小變動時，測定結(jié)果保持不受影響的承受程度。保持不受影響的承受程度。n耐用性主要考察方法本身對于可變試驗因素的抗耐用性主要考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐干擾能力。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。用性。如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明予以寫明。49n典型的變動因素包括：典型的變動因素包括： 液相色譜法中液相色譜法中流動相的組成流動相的組成和和pH 值值，不同廠不同廠牌牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫、流速等。氣或不同批號的同類型色譜柱，柱溫、流速等。氣相色譜法中載氣及流速、不同廠牌或批號的色譜柱、相色譜法中載氣及流速、不同廠牌或批號的色譜