紫外-可見分光光度計的校正

1、實驗一 紫外-可見分光光度計的校正及使用分光光度計定性分析一、 實驗?zāi)康?. 了解紫外和可見光光度計的構(gòu)造；2. 學(xué)會分光光度計的波長準(zhǔn)確度和吸收池配套性檢驗方法；3. 了解紫外和可見光光度計的校正基本方法；4. 掌握利用分光光度計對物質(zhì)進(jìn)行定性分析。二、實驗學(xué)時 3學(xué)時三、儀器與試劑1、儀器 紫外-可見分光光度計； 鐠釹濾過片； 容量瓶（50mL）； 天平； 燒杯（200mL）； 2、試劑 去離子水； 95%乙醇； 防曬霜； 苯；質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.006000%重鉻酸鉀的0.001mol/L高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取已經(jīng)干燥過的重鉻酸鉀60.00mg，移入1L容量瓶中，用蒸餾水溶解，加入1mL的1.0m

2、ol/L高氯酸，再用蒸餾水稀釋溶液質(zhì)量為1000.0g，避光密封保存。四、實驗原理 紫外吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價電子在電子能級間的躍遷，是研究物質(zhì)電子光譜的分析方法。通過測定分子對紫外光的吸收，可以對物質(zhì)進(jìn)行定性和定量測定。 利用紫外分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定性分析：選擇合適的溶劑（非極性），使用有足夠純度單色光的分光光度計，在相同的條件下測定相近濃度的待測試樣和標(biāo)準(zhǔn)品的溶液的吸收光譜，然后比較二者吸收光譜特征：吸收峰數(shù)目及位置、吸收谷及肩峰所在的位置等；分子結(jié)構(gòu)相同的化合物應(yīng)有完全相同的吸收光譜。 紫外-可見分光光度計的主要部件包括光源、波長選擇器、吸收池、檢測器及測量系統(tǒng)等。1. 光源：能發(fā)射

3、所需波長范圍的光的器件?？梢姽庠闯Ｓ面u絲燈(或碘鎢燈)，波長范圍約為3202500nm；紫外光源常用氫燈(或氘燈)，波長范圍約為200350nm。2. 波長選擇器：能從光源輻射光中分離出一定波長范圍光的器件。通常為濾光片、棱鏡或光柵。固定波長選擇器常用濾光片，連續(xù)變化波長選擇器常用棱鏡或光柵。3. 吸收池：盛放待測樣品溶液的容器。該容器應(yīng)具有兩面互相平行、透光且有精確厚度的平面。按材質(zhì)可分為玻璃和石英兩種。玻璃吸收池用于可見光波長范圍的測定；石英吸收池用于紫外光及可見光波長范圍的測定。4. 檢測器：能把光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕钠骷?，通常為光電管或光電倍增管等?. 測量系統(tǒng)：能放大電信號并將其轉(zhuǎn)變

4、為用百分透射率或吸光度顯示的器件。由放大器及指示器等組成。紫外-可見分光光度計是單光束手工操作儀器，備有鎢燈及氫燈兩種光源，可用于可見及紫外光區(qū)。它是具有色散能力較高的單色器，狹縫可調(diào)，可得到較純的單色光，適用于定性鑒別和定量分析。 新儀器啟用前或儀器修理后或長期使用后均需對儀器的性能進(jìn)行檢定。儀器的性能主要是波長準(zhǔn)確度與重現(xiàn)性、單色器的分辨能力、吸光度的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性及雜散光等。5、 實驗步驟1、儀器調(diào)校1.1 開機(jī)檢查及預(yù)熱檢查儀器，連接電源，打開儀器電源開關(guān)，開啟吸收池樣品室蓋，取出樣品室內(nèi)的遮光物，預(yù)熱20min。1.2 儀器波長準(zhǔn)確度檢查和校正（1）可見光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正校驗波

5、長是否準(zhǔn)確，可用譜線校正法。在吸收池中置一白紙擋住光路，轉(zhuǎn)動波長從720nm向420nm方向轉(zhuǎn)動，遮光觀察白紙上色斑的顏色。根據(jù)調(diào)整的波長范圍觀察所得到的相應(yīng)顏色，并進(jìn)行對比核對，判斷波長的準(zhǔn)確性。（486nm附近，白紙上為藍(lán)色斑；580nm附近，白紙上為黃色斑）吸收光顏色紫藍(lán)綠藍(lán)藍(lán)綠綠黃綠黃橙紅波長/nm400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-610610-650650-760（2）紫外光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正在吸收池滴一滴液體苯，蓋上吸收池蓋，待苯揮發(fā)充滿整個吸收池后，就可以測繪苯蒸氣的吸收光譜，觀察實測結(jié)果與苯的標(biāo)準(zhǔn)光譜曲線是否一致。1

6、.3 吸收池的配套性檢查 儀器所附的同一光徑洗手池中，裝蒸餾水于220nm（石英吸收池）、440nm（玻璃吸收池）處，將一個吸收池的透射比調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，其差值即為吸收池的配套性。透射比的偏差小于0.5%的吸收池可配成一套。2、防曬霜中紫外吸收劑的定性檢測2.1 試樣的制備稱取0.1g試樣于100mL燒杯內(nèi)，加95%乙醇100mL溶解、攪拌，靜止片刻，取清液作為待測試樣。根據(jù)試樣中防曬劑含量的大小，選擇稀釋倍數(shù)。2.2 測定步驟調(diào)節(jié)紫外分光光度計波長于280-400nm，以95%乙醇作為空白。 取待測試樣清液倒入比色皿內(nèi)，用擦鏡紙把比色皿表面擦干，進(jìn)行掃描。儀器在此波長范

7、圍內(nèi)有吸收峰則該樣品含紫外吸收劑，無吸收峰則該樣品不含紫外吸收劑。2.3 結(jié)束工作 工作完畢后，關(guān)閉電源。取出吸收池，清洗后晾干入盒保存，在樣品室內(nèi)放入干燥劑，蓋好樣品室蓋，罩好儀器防塵罩。六、數(shù)據(jù)記錄1、可見光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正波長/nm400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-610610-650650-760吸收光顏色2、紫外光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正 苯蒸氣的紫外吸收光譜紫外光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查所得圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比結(jié)果： 3、吸收池的配套性檢查 波長（nm）透射比（%）配套誤差（%）池號1池號2池號3池號4220100440100 4、防曬霜檢測紫外吸收峰：七、測量注意事項 1、玻璃吸收池只適用于320nm以上及可見光區(qū)；石英吸收池適用于紫外光和可見光區(qū)。 2、石英吸收池毛玻璃面上方有箭頭表示方向。每次測定時，樣品吸收池與空白吸收池的方向應(yīng)保持一致。