藥用植物組培技術(shù)之一---配制母液PPT課件

1、組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/71實(shí)驗(yàn) 藥用植物組織培養(yǎng)技術(shù) 實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 培養(yǎng)基母液配制培養(yǎng)基母液配制 實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基配制和滅菌誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基配制和滅菌 實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 外植體接種技術(shù)外植體接種技術(shù) 實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 接種效果觀察，分化培養(yǎng)基配制接種效果觀察，分化培養(yǎng)基配制 實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 分化接種分化接種組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/72植物組織培養(yǎng)：植物組織培養(yǎng)： 在無菌和人為控制外因條件下，將離體器官、組在無菌和人為控制外因條件下，將離體器官、組織、細(xì)胞、胚胎或原生質(zhì)體培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基織、細(xì)胞、胚胎或原生質(zhì)體培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，使其脫分化產(chǎn)生愈傷組織，

2、進(jìn)而分化出器官并長(zhǎng)上，使其脫分化產(chǎn)生愈傷組織，進(jìn)而分化出器官并長(zhǎng)成完整植株的方法。成完整植株的方法。組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/732021/6/74組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/75實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基母液的制作實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基母液的制作實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模?（一）掌握培養(yǎng)基的化學(xué)組成；掌握（一）掌握培養(yǎng)基的化學(xué)組成；掌握MS培養(yǎng)基的配方組培養(yǎng)基的配方組成；成； （二）熟練掌握常用培養(yǎng)基母液的制備方法。（二）熟練掌握常用培養(yǎng)基母液的制備方法。組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/76實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理水分水分無機(jī)物質(zhì)無機(jī)物質(zhì)有機(jī)物質(zhì)有機(jī)物質(zhì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)固相支持物固相支

3、持物 培養(yǎng)基提供植物生長(zhǎng)所需的營養(yǎng)成分，滿足植物培養(yǎng)基提供植物生長(zhǎng)所需的營養(yǎng)成分，滿足植物正常生長(zhǎng)發(fā)育的需要。主要包括正常生長(zhǎng)發(fā)育的需要。主要包括組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/77大量元素大量元素 所需濃度大于所需濃度大于0.5mmol/L0.5mmol/L大量元素包括大量元素包括N, P, S , N, P, S , Ca, K, MgCa, K, Mg。培養(yǎng)基中加入量最多的是。培養(yǎng)基中加入量最多的是N N，一般以硝酸鹽或氨，一般以硝酸鹽或氨鹽。鹽。1. 1. 無機(jī)化合物無機(jī)化合物微量元素微量元素 植物所需的微量元素有植物所需的微量元素有FeFe、CuCu、ZnZn、B B、 MnM

4、n、Al Al Mo Co Mo Co 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/782. 2. 有機(jī)化合物有機(jī)化合物 有機(jī)物質(zhì)主要指維生素類物質(zhì)、糖類物質(zhì)。有機(jī)物質(zhì)主要指維生素類物質(zhì)、糖類物質(zhì)。a a、維生素類物質(zhì)、維生素類物質(zhì) 維生素類物質(zhì)在酶系統(tǒng)中有催化功能。維生素類物質(zhì)在酶系統(tǒng)中有催化功能。 硫胺素（硫胺素（VB1VB1）與愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有關(guān)，是所有植與愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有關(guān)，是所有植物組織培養(yǎng)初期需要的維生素。物組織培養(yǎng)初期需要的維生素。 鹽酸吡哆醇（鹽酸吡哆醇（VB6VB6）促進(jìn)根的生長(zhǎng)。促進(jìn)根的生長(zhǎng)。 煙酸（煙酸（VB3VB3，又稱維生素，又稱維生素PPPP）促進(jìn)胚的發(fā)育

5、。促進(jìn)胚的發(fā)育。 泛酸鈣（泛酸鈣（VB5VB5）、生物素（）、生物素（VHVH）、鈷胺素（）、鈷胺素（VB12VB12）、葉酸）、葉酸（VBcVBc），），VcVc等。等。 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/79b b、糖類、糖類 糖在培養(yǎng)基的作用：糖在培養(yǎng)基的作用：1 1）、為細(xì)胞提供合成新物質(zhì)的碳骨架）、為細(xì)胞提供合成新物質(zhì)的碳骨架 2 2）、為細(xì)胞的呼吸代謝提供底物和能量）、為細(xì)胞的呼吸代謝提供底物和能量 3 3）、維持滲透壓）、維持滲透壓 蔗糖蔗糖是廣泛應(yīng)用的一種是廣泛應(yīng)用的一種碳源，碳源，一般濃度一般濃度1-5%1-5%。 葡萄糖和麥芽糖也是常用的碳源。葡萄糖和麥芽糖也是常用的碳

6、源。組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/710C.C.天然有機(jī)物天然有機(jī)物 一些天然的有機(jī)物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、一些天然的有機(jī)物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、馬鈴薯煮汁也常用于植物組織培養(yǎng)，并表現(xiàn)出了良好的馬鈴薯煮汁也常用于植物組織培養(yǎng)，并表現(xiàn)出了良好的促進(jìn)作用。促進(jìn)作用。組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/711 無機(jī)元素和有機(jī)營養(yǎng)構(gòu)成的培養(yǎng)基僅保證培養(yǎng)物的生存與無機(jī)元素和有機(jī)營養(yǎng)構(gòu)成的培養(yǎng)基僅保證培養(yǎng)物的生存與最低生理活動(dòng)，最低生理活動(dòng)，只有加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，才能誘導(dǎo)細(xì)只有加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，才能誘導(dǎo)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化。胞分裂、脫分化和再分化。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑植

7、物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是外源的調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育的物質(zhì)。是外源的調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育的物質(zhì)。植物激素植物激素是在植是在植物體內(nèi)合成的，對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有顯著調(diào)節(jié)作用的微量有機(jī)物。物體內(nèi)合成的，對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有顯著調(diào)節(jié)作用的微量有機(jī)物。 主要是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，有時(shí)用主要是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，有時(shí)用GA3GA3，ABAABA。3 3、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/712生長(zhǎng)素類：生長(zhǎng)素類： 誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和根的分化誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和根的分化1 1）吲哚類：）吲哚類：IAAIAA（吲哚乙酸）（吲哚乙酸）、 IBAIBA（吲哚?。ㄟ胚岫∷幔?、酸）、IPAIPA（吲哚丙酸）（吲哚丙

8、酸）2 2）萘酸類：）萘酸類： NAANAA（萘乙酸）（萘乙酸）3 3）苯氧羧酸類：）苯氧羧酸類：2,4-D2,4-D（2,4-2,4-二氯苯氧乙酸）二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T2,4,5-T（ 2,4,5-2,4,5-三氯苯氧乙酸）、三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-T2,4,5-TP P（ 2,4,5-2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。三氯苯氧丙酸）等。 其中其中IBAIBA和和NAANAA廣泛用于生根，并能與細(xì)胞分裂素廣泛用于生根，并能與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖?；プ鞔龠M(jìn)芽的增殖。2.4-D 2.4-D 對(duì)于愈傷組織的誘導(dǎo)對(duì)于愈傷組織的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)有效。和生長(zhǎng)有效。組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)20

9、21/6/713A A：NAA 0mg/LNAA 0mg/L，芽（少），根（無），芽（少），根（無） B B：NAA 0.1mg/LNAA 0.1mg/L，芽（少），根（無），愈傷組織（少量），芽（少），根（無），愈傷組織（少量） C C：NAA 5.0mg/LNAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈傷組織（一定量，芽（少），根（多），愈傷組織（一定量) )A B C組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/714b. 細(xì)胞分裂素分裂素 是一類腺嘌呤衍生物。主要有激動(dòng)素（是一類腺嘌呤衍生物。主要有激動(dòng)素（ 6-糠基氨糠基氨基嘌呤基嘌呤KT）、）、6-芐基氨基嘌呤（芐基氨基嘌呤（6-BA）和玉

10、米素和玉米素（ZT）等。其中最）等。其中最常用的是常用的是6BA。 功能：功能：1、促進(jìn)細(xì)胞的分裂和分化、促進(jìn)細(xì)胞的分裂和分化2、誘導(dǎo)芽的分化、誘導(dǎo)芽的分化3、促進(jìn)側(cè)芽的萌發(fā)和生長(zhǎng)、促進(jìn)側(cè)芽的萌發(fā)和生長(zhǎng)4、抑制衰老、抑制衰老組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/715A BA：6-BA(0mg/L) ，芽（減少），根（增多）愈傷組織（一定量），芽（減少），根（增多）愈傷組織（一定量）B：6-BA(0.1mg/L)，芽（適量），根（適量）愈傷組織（一定量），芽（適量），根（適量）愈傷組織（一定量）組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/716如何控制植物細(xì)胞分化如何控制植物細(xì)胞分化 分裂素分裂素/

11、 /生長(zhǎng)素的比例是控制芽和根形成的生長(zhǎng)素的比例是控制芽和根形成的一個(gè)重要條件一個(gè)重要條件 比例高時(shí)比例高時(shí)產(chǎn)生芽產(chǎn)生芽, ,比例低時(shí)比例低時(shí)產(chǎn)生根產(chǎn)生根組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/717c.c.赤霉素（赤霉素（GAGA3 3）1 1、誘導(dǎo)莖的細(xì)胞伸長(zhǎng)，對(duì)矮生型植物恢復(fù)成高生型特別有效，、誘導(dǎo)莖的細(xì)胞伸長(zhǎng)，對(duì)矮生型植物恢復(fù)成高生型特別有效，對(duì)根無效對(duì)根無效2 2、對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的活性有增效作用、對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的活性有增效作用 注：不耐熱，應(yīng)采用過濾滅菌加入注：不耐熱，應(yīng)采用過濾滅菌加入d. d. 脫落酸（脫落酸（ABAABA）生理作用：生理作用：1 1、抑制蛋白質(zhì)的合成、抑

12、制蛋白質(zhì)的合成2 2、抵消和抑制生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、抵消和抑制生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、GAGA的作用的作用3 3、誘導(dǎo)休眠、促進(jìn)衰老和脫落、誘導(dǎo)休眠、促進(jìn)衰老和脫落 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/718 （4 4）固化劑和懸浮劑）固化劑和懸浮劑a a、固化劑、固化劑 瓊脂、瓊脂糖（用于原生質(zhì)體、細(xì)胞培養(yǎng)及某些作物的花瓊脂、瓊脂糖（用于原生質(zhì)體、細(xì)胞培養(yǎng)及某些作物的花藥培養(yǎng)）藥培養(yǎng)） 瓊脂的用量一般在瓊脂的用量一般在4-10g/4-10g/L L。 瓊脂以顏色淺、透明度好、潔凈的為上品。瓊脂以顏色淺、透明度好、潔凈的為上品。b b、懸浮劑、懸浮劑 FicollFicoll（聚蔗糖）（聚蔗糖）

13、組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/719（三）、培養(yǎng)基的配制（三）、培養(yǎng)基的配制 試驗(yàn)課上講試驗(yàn)課上講1.1.貯備液（母液）的配制貯備液（母液）的配制 為什么要配制母液？為什么要配制母液？ 1 1）、方便）、方便 2 2）、準(zhǔn)確（有些成分量太?。?、準(zhǔn)確（有些成分量太小） 以以MSMS培養(yǎng)基配制為例，包括培養(yǎng)基配制為例，包括大量元素、微量元素、鐵鹽、大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物質(zhì)、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液。有機(jī)物質(zhì)、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液。組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/720組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/721組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/722組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2021/6/723注意：注意： 所有母液都要貼上標(biāo)簽，注明名稱、配制倍數(shù)、日期，所有母液都要貼上標(biāo)簽，注明名稱、配制倍數(shù)、日期，所有的母液都應(yīng)