乙型肝炎病毒檢測(cè)試劑盒(原位雜交)

1、乙型肝炎病毒檢測(cè)試劑盒（原位雜交）（操作之前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀此說(shuō)明書） 檢測(cè)原理和意義原位雜交技術(shù)的原理是采用熒光、生物素、地高辛等標(biāo)記的探針，依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，與組織切片、細(xì)胞涂片等標(biāo)本中的靶序列特異雜交，經(jīng)信號(hào)放大及顯色后，鏡下觀察結(jié)果。此方法具有很高的靈敏性和特異性。HBV（乙肝病毒）是引起乙型肝炎的病原體，常可導(dǎo)致肝硬化、肝癌等，危及患者生命。HBV原位雜交檢測(cè)產(chǎn)品通過(guò)HBV探針與病原核酸的特異結(jié)合，檢測(cè)組織中HBV感染的存在。尤其是當(dāng)組織學(xué)上病變輕微不易診斷時(shí)，HBV原位檢測(cè)?？蓭椭_診。 試劑盒提供的材料和試劑成 份保存方法提 供 量20人份50人份1HBV 雜交液-20500ul6

2、25ulx22蛋白酶K(10X)-20100ul250ul3過(guò)氧化物酶阻斷劑41ml2.5ml4蛋白阻斷劑41ml2.5ml5一抗41ml2.5ml6二抗41ml2.5ml7HRP聚合物41ml2.5ml8DAB底物41ml2.5ml9DAB 420ul50ul1018X18mm蓋玻片4或室溫20片50片11濕盒增效液4或室溫30ml30ml（注意：HBV雜交液和蛋白酶K請(qǐng) -20保存。） 用戶自備材料和試劑1. 原位雜交加熱器（泰普編號(hào)：M10061）8. 二甲苯2. 37恒溫培養(yǎng)箱9. 酒精3. 光學(xué)顯微鏡10. PBS(pH=7.6)4. 移液器11.蘇木素5. 計(jì)時(shí)器12. 氨水6.

3、玻片染色缸和染色架13. 鹽酸酒精7. 濕盒2個(gè) 實(shí)驗(yàn)前需配試劑30濕盒增效液取濕盒增效液及蒸餾水，按3:7配制成30%濕盒增效液備用。 實(shí)驗(yàn)時(shí)需配試劑A、1X蛋白酶K工作液取適量10X蛋白酶K ，用蒸餾水稀釋10倍（1份10X蛋白酶K加9份蒸餾水），并將此1X蛋白酶K 工作液存放于室溫備用。（現(xiàn)配現(xiàn)用）B、DAB顯色液依據(jù)需要配制DAB顯色液，以可覆蓋整個(gè)組織的量為宜。取DAB與DAB底物，按照1：50的比例混勻，避光保存?zhèn)溆谩?現(xiàn)配現(xiàn)用) 操作步驟1切片處理：將4um厚度的組織粘附在APES處理的載玻片上，切片于60-70烘烤60分鐘以上。（建議每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)附加陽(yáng)性、陰性對(duì)照片）2脫蠟及水

4、化：溶液次數(shù)時(shí)間（分）二甲苯3 10100%酒精1 395酒精1 x 380%酒精1 3蒸餾水1 x 3（注意：使用過(guò)的二甲苯，應(yīng)相應(yīng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間，以保證脫蠟完全）3酶消化處理：甩干切片，將組織周圍液體用濾紙吸干，每張切片滴加適量蛋白酶K工作液(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，37孵育30分鐘。4封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：蒸餾水沖洗，小心擦干組織周圍液體，滴加適量過(guò)氧化物酶阻斷劑(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫水濕盒中孵育10分鐘。PBS液洗滌21分鐘后，蒸餾水洗滌11分鐘，小心擦干組織周圍液體。5雜交：5.1 每張切片滴加適量雜交液(約25 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，并加蓋

5、玻片（本試劑盒配備，可根據(jù)加入雜交液量進(jìn)行剪裁）；5.2 放置于95原位雜交加熱器上變性5分鐘；5.3 放入含30%濕盒增效液的濕盒中，37下孵育4-16 小時(shí)。建議過(guò)夜（16小時(shí)）以保證低拷貝樣本的雜交效果；5.4 48（PBS 預(yù)溫）浸泡切片，小心移去蓋玻片，PBS繼續(xù)浸泡5分鐘；5.5 48 PBS洗滌3x 5分鐘 (輕微振蕩容器)；（注意：蓋玻片規(guī)格應(yīng)與雜交液量匹配，切片在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中要保持濕潤(rùn)狀態(tài)，防止干片）6蛋白封閉：小心擦去組織周圍液體，滴加適量蛋白阻斷劑(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫水濕盒中孵育5分鐘；PBS洗滌1x1分鐘。7信號(hào)放大與顯色：7.1 小心擦去組織

6、周圍液體，滴加適量一抗(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，37，水濕盒中孵育30分鐘；37PBS浸泡3x2分鐘（輕微振蕩容器）；7.2 小心擦去組織周圍液體，滴加適量二抗(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫，水濕盒中孵育20分鐘；室溫PBS浸泡3x2分鐘 (輕微振蕩容器)；7.3 小心擦去組織周圍液體，滴加適量HRP聚合物(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫，水濕盒中孵育30分鐘；室溫PBS浸泡3x2分鐘 (輕微振蕩容器)。7.4 小心擦去組織周圍液體，滴加適量DAB顯色液(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫，水濕盒中孵育約10分鐘。（不同樣本的顯色時(shí)間可能有所差別

7、，建議鏡下觀察顯色過(guò)程）；室溫PBS浸泡3x2分鐘 (輕微振蕩容器)。7.5 自來(lái)水沖洗，蘇木精復(fù)染（可用鹽酸酒精分化及氨水返藍(lán)）。梯度酒精脫水，中性樹膠封片。 陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：肝細(xì)胞細(xì)胞核、胞漿或胞膜棕褐色著色。 其他事項(xiàng)：本試劑保質(zhì)期為12個(gè)月?？蛻粼谑盏疆a(chǎn)品時(shí)請(qǐng)及時(shí)檢查，如發(fā)現(xiàn)有外包裝破損、試劑盒成分不全等產(chǎn)品問題，或者在使用過(guò)程中有任何疑問，請(qǐng)及時(shí)與泰普客戶服務(wù)中心聯(lián)系，我們將及時(shí)為您解決。 公司信息：公司名稱：福建泰普生物科學(xué)有限公司總部：福建省福州市金山金洲北路7號(hào)金山科技企業(yè)孵化器7號(hào)樓4層 郵編：350002 電話：800-804-8333，0591-2805 3600 傳真：0591-2805 3700研發(fā)中心：北京市昌平區(qū)北清路中關(guān)村生命科學(xué)園創(chuàng)新大廈A座207室 郵編：102206 電話：010-8072 0071 傳真：010-8072 0072操作步驟簡(jiǎn)表操 作參 數(shù)1二甲苯3X102100%酒精1X3395酒精1X3480酒精1X35蒸餾水1X36蛋白酶K消化37，307蒸餾水18過(guò)氧化物酶阻斷劑室溫，109PBS洗滌2x110蒸餾水111加雜交液適量12變性95，51330濕盒增效液的濕盒中孵育37，4-16h14PBS（用前48預(yù)溫）脫片浸泡1-5+515PBS（用前48預(yù)溫）浸泡3X516蛋白阻斷